基于EphA1/EphrinA1反馈环的表达探讨BrMC调控子宫腺肌病的机制

目的:探究肝配蛋白A受体1(EphA1)及其配体(EphrinA1)在子宫腺肌病(AM)患者相关组织中的表达情况,并观察8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)处理对子宫腺肌细胞的影响。方法:采用HE染色对AM患者子宫肌层异位内膜组织、非异位内膜组织及子宫肌瘤患者正常内膜组织的形态学变化进行观察;采用免疫组织化学染色检测3种组织中EphA1与EphrinA1表达情况;分离并培养子宫腺肌细胞,分别使用浓度为2.5、5、10μmol/L BrMC的培养基处理细胞,采用MTT法检测不同处理时间后细胞存活率,处理培养48 h后收集细胞,采用TUNEL染色与Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;采用细胞划痕实验检测细胞迁移;采用RT-qPCR和Western blot检测细胞中EphA1、EphrinA1 mRNA与蛋白的表达水平。结果:AM患者异位和非异位子宫内膜组织中EphA1、EphrinA1表达水平均高于对照组(P<0.05);经鉴定发现成功分离子宫腺肌细胞,波形蛋白与α-平滑肌肌动蛋白均表达;经不同浓度BrMC处理后,与对照组比较,各处理组子宫腺肌细胞存活率下降,凋亡率增加,细胞迁移率降低;细胞内EphA1、EphrinA1的mRNA与蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论:EphA1与EphrinA1在子宫腺肌病内膜组织中表达水平升高,经BrMC处理子宫腺肌细胞后,抑制了细胞生长、迁移并促进细胞凋亡,其机制可能与调控EphA1/EphrinA1反馈环相关。

胃癌患者癌组织中EphA1表达与外周血炎症细胞比值的关系

目的:探究胃癌患者癌组织中EphA1表达与外周血中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)、血小板淋巴细胞比值(PLR)的关系。方法:选取2015年12月—2016年10月在安徽省肿瘤医院胃肠肿瘤外科住院48例行根治性手术切除的胃癌患者为研究对象。利用免疫组织化学方法检测癌组织中EphA1表达,计算患者术前外周血中NLR值和PLR值,分析与患者临床病理特征间的关系。将患者分为EphA1表达弱阳性组和EphA1表达强阳性组,分析癌组织中Eph A1表达与NLR、PLR的相关性。结果:胃癌组织中EphA1蛋白高表达和患者术前外周血高炎症细胞比值(NLR值和PLR值)均预示着患者具有更加恶性的临床病理特征。EphA1表达强阳性患者NLR、PLR值较EphA1表达弱阳性患者明显升高(P<0.05)。癌组织中EphA1表达水平与NLR、PLR呈正相关关系(r=0.855、0.555,P<0.05)。结论:癌组织中高EphA1表达、术前外周血高炎症细胞比值胃癌患者具有较差的临床生物学特征,且两者表达呈正相关,推测EphA1可能通过增强机体外周大的炎症环境来促进胃癌的发生发展。

EphA1基因在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨EphA1在结直肠癌中的表达及其临床意义。方法利用荧光实时定量RT-PCR检测EphA1在肠癌细胞系和组织中的表达,并分析甲基化状态。免疫组织化学染色分析E-phA1蛋白在肠癌组织中的表达及其临床意义。结果 EphA1在肠癌细胞中不同程度表达,并存在甲基化。EphA1 mRNA在癌旁正常黏膜和肿瘤组织中表达差异无统计学意义(P=0.496)。EphA1蛋白在肠腺瘤中弥漫强阳性,在癌组织中主要为低或缺失表达,低表达多见于低分化腺癌(P=0.027)、伴有更深的肠壁浸润深度(P=0.002)和淋巴结转移患者(P=0.019)。EphA1下调多见于中晚期病例(P=0.002),下调较上调患者预后不良。结论 EphA1在结直肠癌的发生发展中可能具有一定肿瘤抑制作用,有可能成为预测结直肠癌恶性程度和预后的新指标。

肾透明细胞癌中EphA1蛋白的表达及临床意义

目的探讨受体酪氨酸激酶Eph A1在肾细胞癌(renal cell carcinomas,RCC)中的表达,并分析其表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化法检测144例肾透明细胞癌、18例肾嫌色细胞癌和6例肾乳头状癌组织中Eph A1蛋白的表达,并复习相关文献。结果 Eph A1在正常肾小管中高表达。Eph A1蛋白在64.6%(93/144)肾透明细胞癌中呈阴性或弱阳性,35.4%(51/144)呈阳性。Eph A1蛋白在肾嫌色细胞癌和乳头状癌中均呈阳性。Eph A1蛋白高表达与肾透明细胞癌患者年龄(P<0.001)、性别(P=0.016)以及核级(P<0.001)有关,与肿瘤直径无关(P=0.316)。结论 Eph A1蛋白有可能成为肾透明细胞癌临床预后的新标志物。

胃癌组织中EphA1的表达与肿瘤转移及患者生存时间的关系

背景与目的:受体酪氨酸激酶Eph基因家族在生长发育和肿瘤发生中发挥重要作用。本课题研究EPhAl在胃癌中的表达,并分析其与临床病理指标之间的联系,旨在探索EphAl基因在胃癌发生中的作用。方法:利用实时定量逆转录聚合酶链式反应(real time RT-PCR)检测胃癌组织和正常黏膜中EphA1转录子的表达。通过甲基化特异性PCR检查启动子区相关的CpG岛甲基化状态。并运用免疫组织化学染色测定细胞的EphA1蛋白表达水平。结果:EphAl转录子在34%(19/56)的样本中表达下调,25%(14/56)的样本中表达上调,41%(23/56)的样本中表达差异无统计学意义(P>0.05)。EphAl转录子表达水平与肿瘤大小(P=0.05)、分期(P=0.001)以及淋巴结转移(P-0.011)相关。在检查的15例EphAl下调的标本中,12例检出甲基化EphAl DNA;在5例上调的标本中,仅1例检出甲基化DNA;18例表达无差异的标本中,3例检出甲基化DNA(P=0.001)。145例组织标本中EphA1蛋白表达与转录子表达的临床意义相符。随访89例患者分析生存时间发现,EphA1下调者预后比上调者长(P=0.005)。结论:EphA1可能在胃癌细胞的侵袭和转移中发挥作用。

EphA1蛋白在卵巢浆液性腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨受体酪氨酸激酶Eph A1在卵巢浆液性腺癌中的表达水平并分析其与临床病理特征的关系,为筛选可用于卵巢浆液性腺癌的诊断和预后指标提供依据。方法采用免疫细胞化学法检测不同人浆液性卵巢癌细胞系HO8910、SKOV3和A2780细胞中Eph A1的表达情况。采用免疫组化染色检测Eph A1在76例卵巢浆液性腺癌组织中的表达情况,将结果分为:低表达(≤5分)和高表达(>5分);分析Eph A1表达与临床病理特征的关系。结果 Eph A1在HO8910、SKOV3细胞中呈阴性表达,而在A2780细胞中呈弱阳性表达。76例卵巢浆液性腺癌组织中,Eph A1高表达33例(43.4%),低表达43例(56.6%)。Eph A1表达与WHO分级、MDACC分级有关(P<0.05),而与临床分期、转移情况、发生部位、肿瘤直径及年龄均无关(P>0.05)。Eph A1高表达者的中位总生存期为71.0个月,高于Eph A1低表达者的31.0个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Eph A1蛋白在卵巢浆液性腺癌中低表达,其表达与组织学分级和预后均有关,有可能成为卵巢浆液性腺癌辅助诊断及临床预后的新指标。

梅山猪胚胎附植期EphA1基因表达及甲基化检测

旨在研究促红细胞生成素产生肝细胞受体A1(EphA1)在某些哺乳动物胚胎发育期的细胞间侵入和黏附活动中发挥一定作用以及EphA1基因甲基化对胚胎附植期其表达的影响。本研究以梅山猪为研究对象,采用实时荧光定量PCR、Western blot和亚硫酸氢盐测序法,分析了EphA1基因的mRNA表达、蛋白表达和CpG岛甲基化。结果表明,在梅山猪胚胎附植前期(13d)、中期(18d)、后期(24d)的子宫内膜附植点,EphA1的mRNA表达趋势为先升高后降低(P<0.05),蛋白表达趋势为逐渐降低,且妊娠猪的表达量均显著高于空怀猪(P<0.05)。附植前期的EphA1甲基化程度最高,中期的次之,后期的最小,即EphA1甲基化趋势与蛋白表达趋势一致。综上表明,EphA1的CpG岛甲基化很可能影响了基因的表达,进一步影响了猪胚胎附植的调控。

受体酪氨酸激酶EphA1 mRNA在胃癌中的表达

目的:EphA基因是受体酪氨酸激酶基因家族成员,可能在肿瘤的发生、发展中起重要作用。文中通过检测EphA1基因在正常胃黏膜和胃癌组织中的表达,探索EphA1基因对胃癌发病、进展及预后的作用。方法:用荧光标记实时定量RT-PCR检测56例胃癌患者肿瘤和正常黏膜组织中EphA1 mRNA的表达,分析其差异与临床多项指标之间的关系。结果:EphA1表达下调在直径小于5 cm的肿瘤中多见(P=0.017)。EphA1表达上调多发生于胃癌晚期(P=0.002)及伴有淋巴结转移的患者(P=0.020)。EphA1表达与其他临床指标之间无明显相关。结论:EphA1基因可能具有促进胃癌进展的作用。

前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究

目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。

受体酪氨酸激酶EphA1的研究进展

EphA1基因是受体酪氨酸激酶Eph家族中第一个成员,不仅参与胚胎发育和血管生成,而且在正常成人组织中也广泛表达。其独特的受体和配体复合物的结构特点和信号转导模式,使其在肿瘤发生、发展和转移中的作用日益受到重视。在不同器官、不同组织类型的肿瘤,甚至在同一种肿瘤发展的不同阶段,EphA1基因表达状况也有很大差异,提示该基因功能的多元性。深入研究EphA1在血管生成和肿瘤发生、发展和转移中的作用,有可能为肿瘤的早期诊断和治疗提供新的靶点。

EphA1基因可控性双稳转内皮祖细胞系EPCs^(Tet-On-EphA1)SiRNA的建立

目的建立可调控EphA1基因表达的内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA。方法将pWHE146质粒转染到内皮祖细胞系中,筛选出稳定表达的细胞克隆;扩增后瞬时转染pTRE-hyg-luc质粒,强力霉素诱导表达后,检测荧光素酶活性,挑选出高表达、低背景的受强力霉素调控的EPCsTet-On细胞株;再将重组质粒pTRE-EphA1SiRNA转染入EPCsTet-On细胞株,筛选出稳定表达细胞克隆EPCsTet-On-EphA1SiRNA;通过强力霉素诱导后,利用RT-PCR和Western blotting法检测EphA1基因mRNA与蛋白的表达。结果成功构建了受强力霉素调控的高表达低背景的EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株;强力霉素可诱导EPCsTet-On-EphA1SiRNA细胞株中EphA1mRNA表达下调,较之未调控组其差异有统计学意义(P<0.05);强力霉素调控EphA1蛋白表达的能力在一定范围内呈剂量依赖性关系。结论成功建立强力霉素调控EphA1基因表达的大鼠双稳转内皮祖细胞系EPCsTet-On-EphA1SiRNA,为深入研究EphA1基因在内皮祖细胞参与肝癌血管生成过程中的作用提供了有效的实验手段。

受体酪氨酸激酶EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达及临床意义

背景与目的:EphA1基因是受体酪氨酸激酶家族的成员之一,其过表达可能在恶性肿瘤的发生、发展中起重要的作用。本研究旨在探讨受体酪氨酸激酶EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR法检测50例膀胱癌组织和15例相应癌旁组织中EphA1 mRNA的表达,分析基因表达的差异与临床病理特征间的关系。结果:EphA1 mRNA在膀胱癌中的表达量为106.86±30.40,高于癌旁组织的表达量10.37±2.69,差异有显著性统计学意义(P<0.001);EphA1 mRNA在高级别膀胱癌中的表达量为210.94±50.51,高于低级别膀胱癌组的52.64±16.01(P<0.001),肌层浸润性膀胱癌EphA1 mRNA的表达量为174.69±43.57,显著高于非肌层浸润性膀胱癌的63.14±17.60(P=0.001)。EphA1 mRNA的表达与性别、年龄、肿瘤大小、数目无显著相关性(P>0.05)。结论:EphA1 mRNA的表达在肿瘤组织中明显高于正常组织,且与病理分级、临床分期呈正相关,因此EphA1基因的过表达可能促进膀胱癌的进展。

启动子甲基化导致人前列腺癌雄激素非依赖性细胞株PC-3中EphA1基因低表达

目的:观察前列腺癌细胞株中EphA1基因表达及甲基化情况,探讨DNA甲基化酶抑制剂对其表达及甲基化的影响。方法:采用实时定量RT-PCR法检测雄激素依赖性、非依赖性前列腺癌细胞系LNCaP、PC-3中EphA1基因表达情况;用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-dC)处理细胞,实时定量RT-PCR法观察处理后EphA1基因表达的变化。亚硫酸氢钠处理后,采用DNA测序法对前列腺癌细胞EphA1基因进行甲基化状态分析。结果:LNCaP、PC-3细胞中EphA1基因表达低下;5-Aza-dC作用后,LNCaP细胞EphA1基因无明显变化,而PC-3细胞中EphA1基因表达显著恢复(P<0.001)。PC-3细胞中EphA1基因启动子区存在高甲基化,而LNCaP细胞该区域较少发生甲基化。结论:启动子甲基化可能是导致雄激素非依赖性PC-3细胞EphA1基因表达下调的重要机制。

EphrinA1及其受体EphA1与VEGF在直肠癌中的表达及相关性研究

目的:探讨EphrinA1及其受体EphA1与VEGF在直肠癌中的表达及相关性。方法:检测直肠癌标本40例与癌旁组织标本40例中EphrinA1、EphA1、VEGF的表达。结果:癌旁组织EphrinA1阳性率、EphA1阳性率、VEGF阳性率低于直肠癌组织(P<0.01)。直肠癌EphrinA1表达与VEGF的表达呈正相关(P<0.05,r=0.32),直肠癌EphA1表达与VEGF的表达呈正相关(P<0.05,r=0.3)。结论:直肠癌的发生、发展可能和EphrinA1、EphA1、VEGF的异常表达有关。EphrinA1及其受体EphA1有望成为抗血管治疗的新靶点。

EphrinA1及其受体EphA1在直肠癌中的表达及意义

目的:探讨Ephrin A1及其受体Eph A1在直肠癌中的表达及其意义。方法:检测40例直肠癌标本及40例癌旁组织标本Ephrin A1及其受体Eph A1的表达。结果:直肠癌Ephrin A1阳性率、Eph A1阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01)。≤65岁直肠癌患者与>65岁直肠癌患者Ephrin A1阳性率、Eph A1阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:直肠癌的发生、发展可能和Ephrin A1及其受体Eph A1的异常表达有关。Ephrin A1及其受体Eph A1有望成为抗血管治疗新的靶点。

EphA1/EphrinA反馈环调控内皮祖细胞促肝细胞癌血管生成潜能

目的:研究体内外调控内皮祖细胞系EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1/EphrinA1信号通路对其细胞生物学行为及活体内促肝细胞癌血管生成潜能的影响。方法:体内外用不同浓度强力霉素调控EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因的表达,分为调控组Dox(+)(培养液中分别含强力霉素1、10和100μg/mL)和非调控组Dox(-);用Western blot法检测对EphA1/EphrinA1信号通路的影响;CCK8法、细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测对细胞增殖、运动及侵袭能力的影响;绘制肝癌裸鼠移植瘤生长曲线结合瘤体免疫组织化学染色分析调控EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因的表达对其促血管生成潜能的影响。结果:体外实验中用10μg/mL强力霉素能最大程度抑制EphA1/EphrinA1信号通路活性,EphA1及其配体EphrinA1蛋白表达分别为0.293±0.029、0.603±0.038,与Dox(-)组的0.943±0.041、0.960±0.062比,差异均有统计学意义(t=12.940,4.864;P<0.001,0.008)。细胞生物学行为分析显示调控EphA1基因表达对EPCsEphA1/SiRNA-Tet增殖能力并无影响;10μg/mL强力霉素调控时能最有效地抑制EPCsEphA1/SiRNA-Tet运动及侵袭能力,与Dox(-)组比差异均有统计学意义(t=4.435,2.467;P=0.002,0.039)。体外100μg/mL强力霉素可最大程度诱导活体内EPCsEphA1/SiRNA-Tet中EphA1基因表达下调,在第6周移植瘤体积为(543.8±24.6)mm3,比Dox(-)组体积(924.5±81.8)mm3明显减少(t=4.909,P=0.001)。免疫组织化学染色显示100μg/mL强力霉素调控组微血管为(21.6±3.6)个,明显少于Dox(-)组的(37.0±4.1)个(t=2.823,P=0.024)。结论:不同浓度强力霉素可在体内外精确调控内皮祖细胞中EphA1/EphrinA1信号轴的活性,进而达到调控内皮祖细胞促肝癌血管生成潜能的目的。

SORL1、EPHA1基因多态性与新疆维吾尔族及汉族Alzheimer’s病的相关性研究

目的研究新疆地区汉族、维吾尔族Alzheimer’s病(AD)患者SORL1基因、EPHA1基因多态性,探讨SORL1基因及EPHA1基因多态性与AD的相关性。方法应用PCR测序技术对新疆地区131例散发AD患者(维吾尔族72例、汉族59例)以及128例对照者(维吾尔族63例、汉族65例)进行SORL1基因及EPHA1基因7个SNP位点rs1699102、rs1010159、rs2282649、rs3824968、rs11767557、rs1525119、rs10233030基因多态性分析。结果SORL1基因中rs1699102、rs1010159、rs2282649、rs3824968病例组和对照组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。EPHA1基因型rs11767557、rs1525119、rs10233030位点分布在病例组和对照组之间差异无统计学意义(均P>0.05)。SORL1基因的rs1010159、rs2282649、rs3824968单倍体在维吾尔族AD患者与汉族AD患者比较中差异有统计学意义(均P<0.05),EPHA1基因中rs1525119、rs10233030形成单体型在维吾尔族AD患者与汉族AD患者比较中差异有统计学意义(均P<0.05)。结论SORL1基因的4个SNP位点及EPHA1基因的3个SNP位点与新疆AD患者发生无明显相关性。

酪氨酸激酶受体EphA1调控Snail2蛋白影响胶质瘤细胞的侵袭能力

目的探讨酪氨酸激酶受体EphA1对胶质瘤细胞侵袭能力的影响。方法培养正常星形胶质细胞与胶质瘤细胞系U87、U251,分别通过qPCR实验及Western Blot实验检测正常星形胶质细胞与胶质瘤细胞U87、U251中EphA1的mRNA及蛋白表达水平;在U87和U251细胞中设置阴性对照组与实验转染组,阴性对照组转染无意义序列RNA,实验转染组转染EphA1的小干扰RNA降低其表达,通过细胞划痕损伤修复实验观察胶质瘤细胞中下调EphA1表达水平后肿瘤细胞的侵袭能力;在胶质瘤细胞U87和U251中转染EphA1小干扰RNA后,通过Western Blot实验检测EphA1及Snail2的蛋白表达水平。结果胶质瘤细胞U87和U251中EphA1的mRNA及蛋白表达水平均高于其在正常星形胶质细胞表达;在胶质瘤细胞U87和U251中敲低EphA1表达后,肿瘤细胞的侵袭能力明显减弱;在胶质瘤细胞U87和U251中敲低EphA1表达后,Snail2蛋白表达水平明显降低。结论EphA1调控Snail2蛋白影响胶质瘤细胞的侵袭能力。

EphA1基因在前列腺癌中的表达及临床意义

目的检测EphA1基因在前列腺癌的表达，探讨其异常表达机制及其临床意义。方法利用RT—PCR检测EphA1在前列腺癌细胞系中的表达，并用重亚硫酸钠修饰的DNA直接测序法检测并分析其甲基化状态。免疫组织化学分析EphA1蛋白、p53蛋白、EGFR蛋白在前列腺癌组织中的表达及其相关性在临床中的意义。结果EphA1蛋白表达在前列腺癌和良性增生组织中差异有统计学意义（P=0．013），并且发现在前列腺癌细胞存在EphA1基因甲基化现象。EphA1蛋白表达上调与前列腺癌有较高的Gleason评分患者有相关性（P=0．017），并与EGFR阳性有相关性（P=0．056），EphA1蛋白下调与p53阳性有相关性（P=0．007）。结论EphA1甲基化可能是导致该基因下调的机制之一，在前列腺癌的发生、发展中可能具有重要作用。

猪EPHA1基因多态性及其与产仔数的关联性分析

研究利用PCR-SSCP技术对大白、长白和杜洛克猪EPHA1基因外显子多态性及其与产仔数的关系进行了研究。结果表明：在第15外显子上检测到一个发生G→C颠换的突变位点,形成3种基因型。对于大白猪,3-6胎的GG型个体的产活仔数（NBA）比CC型个体高出1.66头（P〈0.05）;在所有胎次中,GG型个体的总产仔数（TNB）比CC型个体高出0.2头（P〈0.01）。对于长白猪,第2胎GG型个体的TNB和NBA分别比CC型个体高出1.41头（P〈0.05）和1.46头（P〈0.05）;所有胎次中,GC型个体TNB比CC型个体高出0.67头（P〈0.05）。对于杜洛克猪,3种基因型个体的TNB和NBA差异不显著（P〉0.05）。对于试验大白猪群体而言,该多态位点GG基因型可作为TNB性状的标记基因型。