不同雌激素水平大鼠舌下神经核中ERα的表达

目的 研究雌性大鼠去卵巢对雌激素受体ERα在舌下神经核表达的影响。方法 选取90只8周龄雌性SD大鼠,体质量(250±25)g,随机等量分为假手术组(sham组)、去卵巢组(OVX组)、去卵巢+雌二醇组(OVX+E2组),建立不同雌激素水平大鼠模型。sham组去除大鼠卵巢周围少量脂肪,OVX组去除卵巢,OVX+E2组去除卵巢后皮下注射雌二醇;使用免疫组织化学检测ERα在舌下神经核表达;real-time PCR、Western blot检测ERα mRNA、蛋白表达。结果 三组大鼠舌下神经核均存在ERα阳性表达。与sham组比较,OVX组ERα mRNA及蛋白含量明显降低(P<0.01);与OVX组比较,OVX+E2组ERα mRNA及蛋白含量明显升高(P<0.01);sham组和OVX+E2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 雌激素受体ERα在不同雌激素水平雌性大鼠舌下神经核均存在表达,ERα mRNA及蛋白的表达均受雌激素水平调节。

黄芪总黄酮通过ERα/STAT3信号通路调节子宫内膜异位症中子宫内膜细胞增殖和迁移

目的研究黄芪总黄酮(TFA)对子宫内膜异位症(EMs)子宫内膜细胞增殖和迁移的影响,并基于ERα/STAT3信号通路探讨其潜在分子机制。方法分离人EMs患者子宫内膜细胞。(1)为初步探究不同剂量TFA对EMs子宫内膜细胞增殖和迁移的影响,将实验分为5组:对照(NC)组、EMs组、TFA高剂量组(TFA-H,TFA2mg/mL干预异位子宫内膜细胞)、TFA中剂量组(TFA-M,TFA1mg/mL干预异位子宫内膜细胞)、TFA低剂量组(TFA-L,TFA0.5mg/mL干预异位子宫内膜细胞)。采用平板克隆形成实验、CCK-8检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Westernblotting、RT-qPCR检测细胞ERα、STAT3蛋白和mRNA表达水平。(2)为探究ERα/STAT3信号通路对EMs子宫内膜细胞的影响,使用ERα诱导剂Feruti-nin干预EMs子宫内膜细胞,将实验分为两组:NC组,ERα诱导剂(Ferutinin)组。Westernblot、RT-qPCR检测细胞ERα、STAT3蛋白和mRNA表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。(3)为进一步探究TFA及ERα/STAT3信号通路在EMs子宫内膜细胞的作用机制,将实验分为4组:NC组、EMs组、TFA-M组、TFA-M+Ferutinin组。Westernblot、RT-qPCR检测细胞ERα、STAT3蛋白和mRNA表达水平,CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果(1)与NC组相比,EMs组细胞克隆增殖能力增加(P<0.01);与EMs组相比,TFA-L组(P<0.05)、TFA-M组(P<0.05)和TFA-H组(P<0.01)细胞的克隆增殖能力降低。与NC组相比,EMs组细胞活力增加(P<0.01);与EMs组相比,TFA-L组、TFA-M组和TFA-H组细胞活力降低(P<0.05)。与NC组相比,EMs组细胞相对迁移距离增加(P<0.01);与EMs组相比,TFA-L组(P<0.05)、TFA-M组(P<0.05)和TFA-H组(P<0.01)细胞相对迁移距离减少。与NC组相比,EMs组细胞ERα和STAT3蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.01);与EMs组相比,TFA-L组(P<0.05)、TFA-M组(P<0.01)和TFA-H组(P<0.01)细胞的ERα和STAT3蛋白及mRNA表达水平降低。根据以上实验结果,选择TFA-M进行后续实验。(2)与NC组相比,Ferutinin组细胞ERα和STAT3蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.01)。与NC组相比,Ferutinin组细胞细胞活力增加(P<0.01)。与NC组相比,Ferutinin组细胞克隆增殖能力增加(P<0.01)。(3)与NC组相比,EMs组细胞ERα和STAT3蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.05);与EMs组相比,TFA-M组细胞ERα和STAT3蛋白及mR-NA表达水平减少(P<0.05);与TFA-M组相比,TFA-M+Ferutinin组细胞ERα和STAT3蛋白及mRNA表达水平增加(P<0.05)。与NC组相比,EMs组细胞活力增加(P<0.05);与EMs组相比,TFA-M组细胞活力减少(P<0.05);与TFA-M组相比,TFA-M+Ferutinin组细胞活力增加(P<0.05)。与NC组相比,EMs组细胞克隆增殖能力增加(P<0.05);与EMs组相比,TFA-M组细胞克隆增殖能力降低(P<0.05);与TFA-M组相比,TFA-M+Ferutinin组细胞克隆增殖能力增加(P<0.05)。结论TFA可下调EMs中子宫内膜细胞的增殖和迁移能力,这可能与ERα/STAT3信号通路相关。

天香丹胶囊通过ERα调节细胞焦亡减轻H9C2细胞缺氧复氧损伤的机制研究

目的:探讨天香丹胶囊通过ERα调节NLRP3对H9C2细胞缺氧复氧损伤的影响。方法:体外培养心肌细胞,分为空白对照组、模型组、雌激素(E2)阳性对照组及天香丹胶囊含药血清低(5%)、高(15%)浓度组和天香丹胶囊含药血清(15%)+AZD9496(雌激素抑制剂)组、天香丹胶囊含药血清(15%)+MCC950(NLRP3抑制剂)组。CCK-8测定细胞活力;DCFH-DA荧光探针测定心肌细胞活性氧(ROS)水平;ELISA检测细胞上清中LDH、IL-1β、IL-18水平;Hoechst33342/PI双染评价细胞焦亡情况;Western Blot检测雌激素受体ERα和焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD的表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低,ROS、LDH、IL-1β、IL-18水平及焦亡相关蛋白表达显著升高(P<0.05),PI红色荧光明显增强。与模型组比较,天香丹胶囊含药血清低、高浓度组细胞活力显著升高,ROS、LDH、IL-1β、IL-18水平及焦亡相关蛋白表达显著降低(P<0.05),PI红色荧光明显减弱,天香丹胶囊含药血清高浓度组细胞ERα蛋白表达显著升高(P<0.05)。AZD9496可逆转天香丹胶囊的作用。结论:天香丹胶囊可缓解心肌细胞缺氧复氧后损伤,减轻炎症反应,可能与调节ERα和NLRP3焦亡机制有关。

ERα在雌激素调控颏舌肌功能中的作用研究

目的:探索ERα在雌激素调控SD大鼠颏舌肌功能中的作用。方法:将30只8周龄雌性SD大鼠(250±25)g,随机分为假手术组(SHAM组),去卵巢+雌二醇组(OVX+E2组),去卵巢+雌二醇+ERα拮抗剂MPP组(OVX+E2+MPP组)(n=10)。通过卵巢切除与雌激素回补,在外周血建立稳定的雌激素水平大鼠模型;使用玻璃微电极检测SD大鼠舌下神经核团放电频率,BL-420E+生物机能实验系统检测颏舌肌肌电频率及幅值。结果:(1)舌下神经核放电频率:OVX+E2+MPP组明显弱于OVX+E2组(P<0.05)。(2)颏舌肌电频率及幅值:OVX+E2+MPP组明显弱于OVX+E2组(P<0.05)。结论:雌激素可能通过与ERα受体结合,影响舌下神经核放电,进而改变颏舌肌肌电功能。

黄芩对ZEA暴露雌性小鼠抗氧化能力、性激素水平和ERαmRNA表达的影响

【目的】试验旨在研究黄芩(SBG)对玉米赤霉烯酮(ZEA)暴露幼龄雌性小鼠抗氧化能力、性激素水平及雌性生殖器官中雌激素受体α(ERα)和孕酮受体(PR)基因表达的影响。【方法】试验选取50只雌性小鼠,预饲1周后随机分为5组,每组10只。对照组(CK)灌胃10 mL/kg玉米油、ZEA组灌胃20 mg/kg ZEA、ZEA+SBG10组灌胃20 mg/kg ZEA+10 g/kg SBG、ZEA+SBG20组灌胃20 mg/kg ZEA+20 g/kg SBG、ZEA+SBG30组灌胃20 mg/kg ZEA+30 g/kg SBG。所有试验小鼠均饲喂基础饲粮,正试期3周。正试期间每日记录小鼠体重;分别在试验的第1、2和3周末晨饲前采集小鼠尾静脉血样,检测血清中抗氧化相关指标和性激素含量;在试验第3周末,采集卵巢和子宫,检测相关类固醇激素受体基因mRNA的表达。【结果】与CK组相比,ZEA暴露2周以上可引起雌性小鼠体重、血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、谷胱甘肽(GSH)和雌二醇(E 2)含量均显著降低(P<0.05);卵巢刺激素(FSH)水平显著增加(P<0.05),而黄体生成素(LH)水平无显著变化(P>0.05)。与ZEA组相比,20和30 g/kg SBG处理3周均显著提升小鼠体重(P<0.05),20 g/kg SBG处理3周显著升高血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、GSH-Px活性及GSH水平(P<0.05),30 g/kg SBG处理2周后这3项指标均显著提高(P<0.05);20和30 g/kg SBG处理2周显著降低血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05);30 g/kg SBG处理2周可显著增加血清E 2水平(P<0.05),显著降低FSH含量(P<0.05);20和30 g/kg SBG处理3周后小鼠子宫和卵巢ERα基因表达显著提升(P<0.05),但PR的mRNA表达量在各组之间差异不显著(P>0.05)。【结论】SBG可通过提高ZEA暴露雌性小鼠血清抗氧化能力及性激素水平,增强子宫及卵巢ERα的表达,缓解ZEA造成的氧化损伤和生殖毒性,SBG推荐剂量为20~30 g/kg。

薯蓣皂苷通过ERα/miR503/RANK信号通路抑制破骨细胞生成

目的探究薯蓣皂苷对小鼠破骨细胞前体细胞(RAW264.7)破骨分化的抑制作用以及潜在机制。方法利用核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7破骨分化模型,设置模型对照组、雌激素组、薯蓣皂苷低剂量组、薯蓣皂苷高剂量组,通过CCK8法检测不同浓度薯蓣皂苷对细胞的毒性作用,通过TRAP染色进行破骨细胞计数,qPCR检测细胞中ERα/miR503/RANK信号通路及破骨标志性基因TRAP、MMP9、CTSK基因表达水平,Western blot检测细胞中ERα、RANK蛋白表达水平。结果薯蓣皂苷对RAW264.7细胞无明显毒性作用。与模型对照组比较,高剂量薯蓣皂苷组及雌激素组的TRAP阳性细胞数目下降(P<0.05),薯蓣皂苷及雌激素上调了ERα、miR-503-5p的表达水平,抑制了RANK的表达水平,下调了破骨标志性基因的表达(P<0.05)。结论薯蓣皂苷可能通过ERα/miR-503/RANK信号通路下调破骨标志性基因,从而抑制RAW264.7细胞破骨分化。

基于深度神经网络对抗乳腺癌候选药物ERα生物活性的预测

针对抗乳腺癌候选药物的ERα生物活性建立定量结构-活性关系模型预测药物化合物的生物活性,首先通过主成分分析法,以化合物的生物活性值(IC_(50))为因变量,729个分子描述符为自变量。再利用皮尔逊相关系数,剔除高度相关的变量,最终得到20个最具有显著影响的变量。使用支持向量机(SVM)和深度神经网络(DNN)两种模型分别建立化合物对ERα生物活性定量预测模型,利用评价指标对两模型结果进行比较。结果显示DNN模型的预测结果较好,其均方根误差为0.7355,均方误差为0.5354,平均绝对百分比误差为0.0861。研究得出的预测模型可以极大地节省药物研发时间,为新型抗乳腺癌先导化合物的药物研究提供实验和理论支持。

基于大脑情感网络模型与PSO-AGA算法对抗乳腺癌候选药物ERα的研究

乳腺癌是目前世界上最常见,致死率较高的癌症之一。有研究发现,能够拮抗ERα活性的化合物可能是治疗乳腺癌的候选药物,具有重要的研究价值。本文从理想到实际,首先使用模型对数据进行清洗和筛选,之后基于大脑情感网络模型和PSO-AGA算法对ERα生物活性进行预测,再使用多元线性回归模型、支持向量机、随机森林模型和梯度提升树回归模型进行预测模型构建并求解,并对五种模型的预测效果进行分析。

雌激素受体GPR30、ERα和PR在甲状腺癌组织中的表达及相关性

目的探讨雌激素受体GPR30、ERα和PR在甲状腺癌组织中的表达及其相关性。方法选取重庆医科大学附属第一医院病理科2006-2009年101例甲状腺癌组织标本,包括乳头状腺癌83例、滤泡状腺癌9例、髓样癌6例、未分化腺癌3例,患者年龄45.9（9~93）岁;采用免疫组化S-P法检测甲状腺癌组织中GPR30、ERα和PR的表达,分析其与肿瘤临床病理特征之间,以及相互间的差异。结果甲状腺癌组织中GPR30、ERα和PR主要表达于细胞质,少量表达于细胞核,阳性表达率分别为78.2%、85.1%、79.2%;除在≥45岁年龄组患者肿瘤中ERα表达率高于〈45年龄组外（r=-0.2383,P〈0.05）,GPR30和ERα的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、病理类型、TNM分期等临床病理因子及患者MAC IS预后评分无统计学差异（P〉0.05）;GPR30与ERα（r=0.2518）、PR（r=0.3207）的表达呈正相关。结论雌激素受体GPR30和ERα共同参与甲状腺癌的发生、发展,可能是潜在的治疗靶点。

ERα基因SNPs与乳腺癌芳香化酶抑制剂治疗所致骨代谢异常的关系

目的探讨接受芳香化酶抑制剂(AIs)治疗的乳腺癌患者ERα基因rs9340799、rs2234693位点单核苷酸多态性(SNPs)与AIs所致骨代谢异常的相关性。方法随机选取160名接受AIs治疗的乳腺癌术后患者,排除影响骨代谢的疾病,提取全基因组DNA并进行PCR扩增,对rs9340799、rs2234693位点进行单向测序;用双能X线吸收法测定腰椎(L1-4)骨密度(BMD)。结果 ERα基因rs9340799位点各基因型受试者的腰椎BMD存在显著性差异(P<0.01),A/A型高于A/G型及G/G型(P<0.01);rs2234693位点各基因型间的腰椎BMD亦存在显著性差异(P<0.01),T/T型、C/T型均高于C/C型(P<0.01)。去除绝经年数的影响,两位点各基因型受试者间腰椎BMD的差异仍具有统计学意义(P<0.01)。根据接受AIs治疗时间分层分析,两位点SNPs与服药1年内受试者的腰椎BMD相关(P<0.01),在服药1年及以上的受试者中,rs9340799位点SNP与腰椎BMD相关(P<0.05)。结论 ERα基因rs9340799、rs2234693位点SNPs与接受AIs治疗的乳腺癌患者的腰椎BMD存在显著性关联。与纯合基因型A/A型、T/T型相比,杂合基因型A/G型、C/T型及纯合基因型G/G型、C/C型更具有发生骨代谢异常的可能。

乳腺癌中ERα、PR的表达与预后关系及其影响阳性率的相关因素

目的分析乳腺癌中ERα、PR的阳性率与预后的关系,探讨影响ERα、PR阳性率的相关因素。方法采用免疫组化En Vision法检测662例乳腺癌组织中ERα、PR的表达,按不同阳性率分组,Kaplan-Meier法分析预后。选择其中的80例采用两种克隆号ERα(SP1、6F11)染色并由一位高年资医师判读,以分析不同克隆号对阳性率的影响;选择其中的214例ERα(SP1)由三位不同年资医师采用Allred score、H score两种判读系统分别判读,以观察不同判读系统及医师经验对阳性率的影响。一致性采用Kappa检验。结果生存分析显示,ERα、PR低阳性组无病生存率(disease-free survival,DFS)、总生存率(overall survival,OS)均优于阴性组(DFS:P=0.021、0.003)、(OS:P=0.019、0.003),ERα、PR高阳性组DFS、OS均优于低阳性组(DFS:P=0.011、0.002)、(OS:P=0.012、0.005)。浸润性癌非特指型、浸润性小叶癌、导管原位癌ERα阳性率分别为59.5%、78.9%、63.6%,差异有统计学意义(P=0.002),PR阳性率分别为56.3%、68.9%、59.1%,差异无统计学意义(P=0.079)。不同组织学分级的浸润性癌非特指型ERα、PR阳性率差异有统计学意义(P均<0.001)。不同核级导管原位癌ERα、PR阳性率差异有统计学意义(P均<0.05)。克隆号SP1阳性细胞百分率、染色强度均优于6F11;判读系统H score重复性略优于Allred score;高年资医师间阳性细胞百分率、染色强度判读重复性好(κ=0.850,κ=0.824),而高年资和低年资医师之间重复性均较差(0.4<κ<0.75);阳性细胞百分率估计法与计数法重复性较差(κ=0.726)。结论 ERα、PR不同阳性细胞百分率与患者预后密切相关,影响ERα、PR阳性率的因素包括病理类型、组织学分级、核分级、抗体的选择、判读系统及判读医师间的差异等。

大豆异黄酮对去卵巢大鼠小脑ERα、NGF、IL-2、AR mRNA表达的影响

建立去卵巢SD大鼠模型,运用原位组织杂交方法,通过补充不同剂量大豆异黄酮观察其对ERα、NGF、IL-2、AR mRNA在小脑中的表达和分布影响,探讨大豆异黄酮对小脑的作用机制和意义及其剂量关系。结果显示:ERα、NGF、IL-2、AR mRNA杂交信号主要分布于小脑皮质的蒲肯野氏细胞层和小脑室顶核、间位核和齿状核中,小脑皮质的分子层和颗粒层也有少量弱杂交信号表达;杂交信号主要定位于胞核,也存在于胞浆、胞膜和突起中,4种杂交信号变化的总趋势为去卵巢大鼠小脑皮质及小脑核中ERα、NGF、IL-2、AR mRNA的表达强度和阳性数目显著降低;而补充不同剂量大豆异黄酮后,4种物质的阳性杂交信号强度和数目均有不同程度回升,其中高剂量组基本恢复到假手术组水平,低剂量组仅有少许回升或无变化,中剂量组介于两者之间。从以上结果得出:大豆异黄酮可在基因水平上促进ERα、NGF、IL-2、AR在小脑中的表达,且存在剂量依赖性;这4种物质表达变化的相似性提示四者在大豆异黄酮对小脑的作用中是相互调节和影响的。

荔枝核皂苷对乳腺增生大鼠雌激素受体ERα、ERβ及ERK、VEGF表达的影响

目的:探讨荔枝核皂苷对乳腺增生大鼠雌激素受体ERα、ERβ及ERK通路的影响。方法:取未孕雌性SD大鼠,除留正常对照组8只外,其他动物均进行造模,成模动物随机分为模型组、荔枝核皂苷低剂量组(0.1 g/kg)、荔枝核皂苷高剂量组(0.2 g/kg)和他莫昔芬阳性对照组(4 mg/kg),每组8只。以上各组分别灌胃给药30 d后,采用免疫组化方法检测乳腺组织ERα、ERβ、细胞外信号调节激酶(ERK)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:与模型组比较,荔枝核皂苷高剂量组大鼠乳腺组织ERα、ERK、VEGF的表达显著降低(P<0.05);低剂量组大鼠乳腺组织ERα、ERK的表达显著降低(P<0.05)。结论:荔枝核皂苷可降低乳腺增生大鼠乳腺组织中ERα、ERK、VEGF的表达。

ERα免疫反应产物在山羊卵巢中的分布

为了研究不同生殖周期山羊卵巢中雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)的表达,本试验应用高灵敏度的免疫组织化学SP法检测了ERα免疫反应产物在不同生殖周期山羊卵巢中的分布。结果显示,ERα免疫反应产物主要存在于成熟卵泡的颗粒细胞、发情期和妊娠期生长卵泡的部分颗粒细胞、原始卵泡卵母细胞胞质、粒黄体细胞胞质及膜黄体细胞胞核、卵泡膜细胞和类固醇细胞胞质;间情期生长卵泡的颗粒细胞中的ERα免疫反应产物较少,主要存在于细胞膜上;卵母细胞中ERα免疫反应产物在初级卵泡阶段含量较少,从次级卵泡开始其含量很丰富。以上结果提示,ERα以激活不同信号途径的方式参与了对卵泡生长、排卵及妊娠维持的调控,这为研究雌激素及雌激素受体α在卵巢中的作用及其生殖调控机理提供了形态学资料。

牦牛雌激素受体ERα和ERβ基因分子特征及组织表达研究

为研究牦牛雌激素受体(ERα和ERβ)基因序列特征及其在不同组织中的表达差异.根据NCBI上已公布的普通牛ERα和ERβ基因序列,设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆麦洼牦牛ERα和ERβ基因序列,同时利用荧光定量PCR技术检测ERα和ERβ基因在牦牛不同组织的表达分布.结果表明,分别获得2 100 bp ERα(Gen Ban K登录号:KJ011123)和1 791 bp ERβ(Gen Ban K登录号:KJ011124)基因序列,其中ERα的ORF为1 658 bp,编码596个氨基酸,ERβ的ORF为1 584 bp,编码527个氨基酸.多重序列分析表明,牦牛ERα和ERβ与普通牛、原鸡、人、小鼠、大鼠、扬子鳄、蟾蜍及斑马鱼的氨基酸序列同源性分别为45.3%-99.5%和53.9%-99.1%.荧光定量PCR结果显示,ERα和ERβ基因在牦牛的各种组织中均有表达,且除睾丸外,ERα在输卵管、子宫及乳腺中的表达高于ERβ.此外,就ERα而言,ERα在牦牛乳腺中表达最高,子宫、输卵管及卵巢次之,心、肝、脾、肺、肾及睾丸相对表达较低.而牦牛ERβ基因在卵巢中表达最高,子宫和输卵管次之,心、肝、脾、肺、肾、睾丸及乳腺表达较低.为进一步了解牦牛ERα和ERβ基因的生物学功能及其分子繁殖机制提供了基础.

散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系

目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶（DNMT）3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体（ER）α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者（均P〈0.05）;97例乳腺癌中有39例（40.2%）发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关（rs=0.250）;DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期（OS）有显著影响（P=0.035）,对无病生存期（DFS）无明显影响（P=0.064）,DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响（P分别为0.914、0.961）。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。

整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达

为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。

ERα和ERβ在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:观察ERα和ERβ蛋白表达与乳腺癌临床病理参数的相关性及临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本214例,乳腺纤维腺瘤组织25例,应用SP免疫组化法检测ERα和ERβ蛋白的表达情况,并分析与乳腺癌患者临床指标及病理参数的相关性。结果:乳腺癌中ERα、ERβ蛋白表达阳性率分别为56.5%(121/214)、62.1%(133/214),乳腺纤维腺瘤中ERα、ERβ蛋白表达阳性率分别76.0%(19/25)、84.0%(21/25),与乳腺纤维腺瘤组织比较,乳腺癌组织ERα蛋白阳性表达率无差异,ERβ蛋白阳性表达率显著低于乳腺纤维腺瘤组织(P=0.031)。在乳腺癌组织中,ERα蛋白表达水平与患者年龄、病理类型、临床分级及淋巴结转移、HER-2、p53蛋白表达均未见相关性,与PR蛋白表达正相关(P<0.000 1)。ERβ蛋白表达与患者年龄和绝经状态相关,在不同的病理类型中,浸润性小叶癌的ERβ蛋白表达阳性率明显高于其它类型肿瘤(P=0.029);ERβ蛋白表达与临床分级、淋巴结转移情况、HER-2、p53蛋白表达比较均未见相关性。生存分析发现,ERα和ERβ蛋白表达对乳腺癌患者总体生存期未见显著影响,ERα和ERβ均阳性表达的乳腺癌患者,OS时间明显延长(P<0.05)。结论:ERα、ERβ蛋白在乳腺癌组织的异常表达与患者年龄、绝经状态、病理类型相关,二者协同表达对于乳腺癌的发生和发展更具指导意义。

新型雌激素受体ERα36在张氏肝细胞和人肝癌细胞中的表达比较分析

研究新型雌激素受体ERα36在人肝细胞和肝癌细胞系中的差异表达具有重要的意义.以张氏肝(Chang Liv-er)、Caveolin-1基因沉默细胞株CAV7、人肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2为实验材料,通过免疫印迹杂交法观察了不同细胞内ERα36蛋白的表达情况,并与典型雌激素受体亚型ERα66蛋白的表达进行了比较.结果发现:(1)几种细胞中均有ERα36蛋白的表达;(2)与张氏肝细胞相比,Caveolin-1基因沉默时ERα36表达明显增加(P<0.01);(3)ERα36在SMMC-7721中表达水平较低,而在HepG2细胞中表达水平较高,与ERα66和Caveolin-1的表达水平相关.提示新型雌激素受体ERα36可能参与Caveolin-1介导的雌激素信号转导,而在肝细胞的恶性增殖过程中发挥一定的作用.

化瘀止痛方及其拆方对人子宫腺肌病细胞OTR mRNA、ERα mRNA的影响

目的观察化瘀止痛方及其拆方对人子宫腺肌病细胞缩宫素受体(OTR)mRNA、雌激素受体α(ERα)mRNA表达的影响。方法将化瘀止痛方及其拆方分为化瘀止痛方高、低剂量组,缓急止痛方高、低剂量组,活血行气方高、低剂量组,另设空白对照组、基质组及米非司酮(RU486)组,每组5例,采用胶原酶消化法培养人子宫腺肌病细胞,采用荧光RT-PCR检测药物干预前后子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA、ERαmR-NA表达的变化。结果与空白对照组比较,各给药组子宫腺肌病细胞的OTR mRNA表达均有不同程度下降,化瘀止痛方高、低剂量组及活血行气高剂量组的OTR mRNA表达显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与RU486组比较,化瘀止痛方高、低剂量组OTR mRNA表达均有不同程度下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与缓急止痛低剂量组比较,化瘀止痛方高、低剂量组OTR mRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,各给药组细胞的ERαmRNA表达均有不同程度的下降,化瘀止痛方高、低剂量组及缓急止痛高、低剂量组的ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与RU486对照组比较,化瘀止痛方高、低剂量组、缓急止痛高剂量组子宫腺肌病细胞ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。化瘀止痛方高剂量组与活血行气高剂量组比较,子宫腺肌病细胞ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化瘀止痛方可能通过降低子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA、ERαmRNA表达,减缓子宫平滑肌的收缩强度,从而缓解患者的痛经症状,在降低子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA表达方面活血行气药贡献值较大,在子宫腺肌病病灶细胞ERαmRNA表达变化中缓急止痛药的贡献值较大。