抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

将狂犬病病毒ERA株纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,获得3株稳定分泌抗狂犬病病毒ERA株单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为C7、C4和H3。经过鉴定:其腹水效价分别为1∶1×105、1∶5×104及1∶1×104;且与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)不发生交叉反应;3株单抗均为IgG类型。采用G蛋白亲和层析柱对腹水进行纯化,将纯化后的单抗腹水用FITC(异硫氰酸荧光素)标记制备荧光抗体,建立了检测狂犬病病毒的荧光染色法。结果表明,该方法对狂犬病的实验室诊断具有快速和特异性高的特点。

分子修饰狂犬病ERA疫苗株剂量依赖反应及对强毒的攻毒保护研究

为评价分子修饰狂犬病ERA疫苗株(简称rERAG_(333E))的免疫效果,本实验将其分别以10~3FFU/mL、10~4FFU/m L、10~5FFU/mL、10~6FFU/mL的剂量口服免疫小鼠,监测小鼠血清中和抗体持续期;同时在小鼠免疫4周后采用不同现地流行株进行攻毒保护实验。结果表明,rERAG_(333E)以10~4FFU/mL以上剂量免疫小鼠,免疫后各实验组小鼠均能够产生较高水平的抗狂犬病病毒(RABV)中和抗体,且能够抵抗经典效检强毒株CVS-24和现地流行强毒株GX/09和MRV的致死性攻击,保护率达到100%;免疫有效持续期能够达到24周以上。以上结果表明rERAG_(333E)是一种安全有效,具有推广使用潜力的狂犬病口服疫苗候选株。

狂犬病病毒ERA株在犊牛睾丸细胞(BTC)上连续传代的稳定性及毒种批的制备与检验

将狂犬病病毒ERA株接种犊牛睾丸细胞进行了 2轮传代 ,并逐代测定毒价 (LD50 )。结果 :第一轮从 1 5代传至 2 6代 ,其毒价均 >1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL ,但 2 0代以后似有下降趋势 ;第二轮从 1代传至 2 8代 ,9～ 2 2代毒价为 1 0 4 .5～ 1 0 5 .33LD50 /0 .0 3mL ,2 3代为 1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL ,2 7、2 8代均 <1 0 4 .0 LD50 /0 .0 3mL。将第 6、1 6、2 8、2 9代ERA/BTC培养物和第 3代ERA/BHK 2 1细胞培养物分别作电镜负染观察 ,比较病毒颗粒形态 ,未见明显差异。将第 1 1代ERA/BTC培养物经冷冻真空干燥制成毒种批 ,其病毒含量为 1 0 5 .2 2 LD50 /0 .0 3mL ,水分≤ 2 .38% ,安全性、免疫原性。

红色荧光示踪狂犬病病毒ERA株病毒粒子方法的建立

为建立一种狂犬病病毒(RABV)荧光标记方法,便于有效地观察研究RABV侵入细胞及脱壳的过程,本研究采用CY5-NHS酯红色荧光染料标记氨基的方法将纯化的RABV ERA株进行CY5-NHS酯荧光染料标记;采用亲脂性羰花青荧光染料将细胞膜染成绿色;采用DNA荧光染料将细胞核染成亮蓝色;在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下成像,动态观察病毒吸附细胞并内吞的过程。与传统的染色方法相比,本研究建立的病毒标记方法更适合在3D活细胞激光共聚焦分析成像系统下观察和拍摄RABV感染细胞的过程,为RABV感染机制的研究提供了一种有效研究方法,对于其它弹状病毒科病毒标记方法的建立也具有一定的参考意义。

从应变到求变:新时代传统武术的发展策略及其实现路径

传统武术是我国民族传统体育的典型代表,亦是中国传统文化外显的载体之一。实现传统武术的创造性转化和创新性发展,乃是新时代背景下我国体育强国建设和全面“复兴中华优秀传统文化”的题中应有之义。通过文献资料法、逻辑分析法和专家访谈法等研究方法,在认清当下传统武术发展困境的基础上,对新时代传统武术的发展策略及其实现路径进行探讨。研究认为,传统武术要想尽快走出当前“缺乏文化自信,被迫削足适履”的尴尬境遇,只有改变已有“以不变应万变”的“惰性”思维,深刻解读新时代的特点、要求和内涵,贯彻从“应变”到“求变”的发展策略才行。建议:加强媒体宣传,主动推销自己;深挖文化底蕴,发挥特色优势;彰显礼仪教化,突出育人功能;全力进入校园,扩大受众群体;融入时尚元素,满足大众所需;规范技术体系,解构神秘主义;主动融合其他艺术样式,打造另类发展空间;提升文化自觉,增强自身文化实力。

狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

目的用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N。阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间。通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法。结果扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h。重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测。

北京鸭呼肠孤病毒σA、σB蛋白的二级结构及B细胞抗原表位的预测

应用SOPMA方法和DNAStar Protean软件综合分析了北京鸭呼肠孤病毒分离株DRV-GZ株的σA、σB蛋白的二级结构、亲水性、表面特性、柔韧性和抗原指数，并对各个蛋白的B细胞抗原表位进行了预测．结果表明，σA蛋白的32～37，56—61，82—85，107～116，128～141，202～207，239—246，256～260，274—280，312～317，381—391和σB蛋白的62～86，117～125，141～163，179～186，270—275，287～289，343～345区域内或附近最有可能是B细胞抗原表位的优势区域．

后疫情时代下品牌标志的响应式设计

目的 研究品牌标志的响应式设计应变,使其更好地适应多类型移动终端设备的需求,以此促进后疫情时代品牌的线上传播。方法 在梳理响应式标志发展的基础上,通过对响应式标志案例的类型分析,概括响应式标志设计的传播优势,分析后疫情时代下标志的响应式设计原则。结果 品牌标志一般通过改变布局、去掉文字、简化图形3种常规方式进行响应式设计应变,响应后的品牌标志在线上的传播应用中显示出明显的优势。结论 后疫情时代下,响应式品牌标志设计变得越来越重要,其在传达效率、准确度、情感表达上的优势,使应变设计后的标志能全面适应线上的品牌传播。在可识别、可沟通、可体验的前提下,响应式品牌标志的设计应变需遵循“延展”响应的图形屏显原则、“平衡”响应的信息传播原则、“持续”响应的视觉体验原则。

新生代农民工犯罪的社会原因分析——以犯罪整合理论为视角

新生代农民工犯罪现象已成为社会治安的一大隐患。新生代农民工的犯罪原因是多方面的,只有整合各种犯罪理论才能做出较全面的分析,将犯罪学中的社会控制理论、社会支持理论、压力理论进行整合,用以分析其犯罪原因就是一种思路。一些新生代农民工在其成长和社会化过程中缺少家庭的关爱与正常教育,在其生活中缺乏有效的社会控制和社会支持,由于生存压力过大而导致的紧张和失范,这些因素综合起来使他们走上犯罪道路。

西部地区商业银行利率风险管理的外部制约因素

西部地区银行利率风险管理的外部制约因素主要有经济发展水平和金融业发展水平。西部地区的经济发展比较缓慢,制约了金融业的发展,制约了银行利率风险管理的能力;西部地区银行业整体实力和竞争程度比较低,金融市场不发达,银行业对外开放力度比较小,限制了西部地区银行业应对利率风险的能力。促进西部地区的经济发展,增强西部金融业的整体实力,才能从根本上控制西部地区商业银行的利率风险。

狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth疫苗株反向遗传系统的建立

【目的】建立狂犬病毒的反向遗传系统,为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据。【方法】本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术,建立了狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth(ERA)疫苗株的CMV/T7、T7启动子病毒拯救系统,构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒。【结果】成功拯救出野生型病毒rERA-VC,在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA相同,第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度。【结论】建立了狂犬病病毒的反向遗传系统,拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同。