ERCC6 C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌患者生存相关

背景与目的：个体化治疗和靶向治疗是目前实体瘤治疗的两大发展方向。基因单核苷酸多态（SNP）不同基因型患者化疗疗效之间存在显著的差别，基因型与疗效之间的相关研究可能为实现个体化治疗提供重要的理论基础。已有研究证实DNA损伤修复基因ERCC1、XRCC1、XPD等基因的遗传变异与非小细胞肺癌铂类药物治疗的疗效及预后相关，尚无小细胞肺癌患者化疗疗效与损伤修复基因SNP相关研究的报告。本研究观察了ERCC6基因C6530G单核苷酸多态与局限期小细胞肺癌化疗近期疗效和生存的关系。方法：采用回顾性研究方法，分析了95例局限期小细胞肺癌患者经卡铂加VPl6（CE）方案一线或辅助治疗后的近期疗效及生存期与ERCC6 C6530GSNP的关系。ERCC6 C6530G基因型分析采用PCR—RFLP方法。组间比较采用卡方检验，生存分析采用Kaplan—Meier Log—rank检验法。结果：ERCC6 6530位点CC、CG和GG基因型患者的近期疗效分别为88．9％、90．3％和85．7％，差异无显著意义（P=1．0）。CG＋GG基因型患者中位TTP为13个月（95％CI=9．2～16．8），CC基因型患者中位1TrP为9个月（95％CI=7．3～10．6；P=0．19）。ERCC6 C6530GSNP和是否手术切除原发病灶两个因素与CE方案治疗后的生存期有关，其中CG＋GG基因型患者中位生存期为24个月（95％CI=18．4～29．6），CC基因型患者治疗后中位生存为16个月（95％CI=9．9～22．0），差异有显著性（P〈0．05）。手术切除原发病灶的患者中位生存期在中位随访时间28．5个月时尚未得到，未行手术切除的患者中位生存时间为18个月（95％CI 12．5～23．5），差异有显著性（P〈0．01）。结论：ERCC6 C6530GSNP与局限期小细胞肺癌患者CE方案近期疗效无关但与生存相关。ERCC6 C6530G基因型可能成为局限期小细胞肺癌患者化疗方案个体化选择的依据。

SNF2家族新成员Ercc6l的cDNA克隆与表达分析(英文)

SNF2家族蛋白在基因组复制、修复与表达中具有重要作用 .报道了SNF2家族新成员Ercc6l (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiency,complementationgroup 6 like)的cDNA克隆、特性与表达分析 .通过表达序列标签 (EST)搜索和组装 ,获得了cDNA全长 4 0 0 2bp的新基因Ercc6l (GenBankAcc .NoAY172 6 88) ,然后通过RT PCR在小鼠胚胎心脏成功克隆了该基因 .Ercc6l在小鼠基因组中由两个外显子和一个内含子组成 ,定位于X染色体 ,最大开放阅读框 (ORF)编码一个含 12 4 0个氨基酸的假定蛋白质 .该假定蛋白质含有SNF2蛋白的 8个保守基序 (SNF2结构域 ) .通过与SNF2家族各亚家族的成员进行多重比对 ,初步确认Ercc6l属于ERCC6亚家族成员 .将Ercc6l编码区克隆到pEGFP C3然后转染HeLa ,3T3和B16细胞 ,融合蛋白主要定位于胞浆 .BLAST搜索检索出 6 9条小鼠EST与Ercc6l同源 ,这些EST主要来自胚胎和肿瘤组织 .对小鼠不同发育时期的多种组织进行RT PCR ,发现Ercc6l在胚胎期强表达 ,出生产后表达显著下调 .

发育相关基因Ercc6l的分子克隆与表达分析及其在酒精致畸中的作用

背景与目的 :在GeneBank中筛选新的小鼠发育相关基因 ,研究其在酒精致畸中的作用。材料与方法 :利用EST介导的基因克隆和表达谱分析进行新基因克隆、表达和同源性分析 ;利用RT-PCR、绿色荧光蛋白标记基因转染、全胚胎原位杂交、石蜡切片原位杂交和Northern杂交进行新基因的验证、亚细胞和组织定位及其在酒精致畸中的表达变化研究。结果 :成功克隆小鼠基因Ercc6l,其在胚胎期正常组织中强表达 ,在新生鼠表达明显减弱 ,在成年鼠几乎不表达。酒精染毒体内、外实验均显示畸变胚胎Ercc6l的表达显著降低。结论 :Ercc6l是小鼠胚胎发育相关基因 ,同时是酒精致畸作用的分子靶点。

ERCC6基因单核苷酸多态性与年龄相关性白内障的关联研究

目的探讨江苏汉族人群中ERCC6基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)的相关性。方法收集江苏省阜宁县眼病研究数据库(现场工作于2010年6月至2011年5月进行)中357例ARC患者为ARC组,356例与患者年龄、性别相匹配且无亲属关系者为对照组。采用Taq ManMGB探针实时荧光聚合酶链反应方法检测ERCC6基因4个位点(rs12571445、rs4253160、rs2228526、rs3793784)SNP。采用χ2检验比较对照组和ARC组之间等位基因及基因型分布是否有差异。结果 rs2228526在ARC组中等位基因G的频率为14.57%,高于对照组中10.81%,差异有统计学意义(P=0.033),提示等位基因G增加白内障的患病风险。该位点G等位基因和GG、GA基因型增加了核型白内障的患病风险(P=0.007;P=0.031)。其他位点差异均无统计学意义(rs12571445:P=0.33;rs4253160:P=0.65)。结论 ERCC6基因SNP-rs2228526位点与ARC发病存在关联,提示该SNP在核型ARC的发生发展中发挥着一定作用。

ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨DNA解旋酶ERCC6L在结直肠肿瘤中的表达及其对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法利用GEPIA和UALCAN数据库分析ERCC6L在结直肠肿瘤组织中的表达情况;通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、蛋白质印迹(Western blotting)和免疫组织化学检测ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞中的表达;分别用CCK8和侵袭实验检测ERCC6L对结直肠肿瘤细胞增殖和侵袭的影响。结果 ERCC6L在结直肠肿瘤组织和细胞系中高表达(P<0.05);用siRNA干扰ERCC6L表达后,结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭能力被显著抑制。结论 ERCC6L促进了结直肠肿瘤细胞的增殖和侵袭,有可能成为癌症治疗的潜在新靶点。

DNA氧化损伤修复基因ERCC6对过氧化氢诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨DNA氧化损伤修复基因ERCC6对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法采用不同浓度H_(2)O_(2)处理SRA01/04细胞,构建氧化损伤模型。取氧化损伤的SRA01/04细胞分为H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+空白质粒转染组和H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组进行转染处理。采用实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测转染后氧化损伤的SRA01/04细胞中ERCC6 mRNA和科凯恩综合征互补B蛋白(CSB)的表达变化。采用免疫印迹实验和EdU染色实验分别检测转染后各组SRA01/04细胞凋亡相关蛋白表达变化和细胞增殖能力。结果当H_(2)O_(2)处理浓度为200μmol·L^(-1)时,SRA01/04细胞ERCC6 mRNA和CSB蛋白的相对表达量最低,后续转染实验H_(2)O_(2)处理浓度均采用200μmol·L^(-1)。与H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+空白质粒转染组相比,H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞ERCC6 mRNA和蛋白表达水平均显著增高(均为P<0.05)。进一步实验发现,与另外两组相比,H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞中的促凋亡蛋白Bax表达均明显降低,而抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达则均明显增加(均为P<0.05)。EdU染色实验检测结果显示,与H_(2)O_(2)+空白质粒转染组相比,H_(2)O_(2)+pcDNA3.1-ERCC6质粒转染组SRA01/04细胞内绿色荧光亮度增高,阳性细胞数量增加,表明SRA01/04细胞的增殖能力增强。结论ERCC6基因可能通过减弱DNA的核苷酸切除修复作用抑制氧化损伤的晶状体上皮细胞增殖、促进其凋亡从而导致老年性白内障的发生。

1pcDNA3.1-Ercc6l真核表达载体的构建及在P19细胞内的表达

目的构建Ercc6l的正、反义真核表达载体,并在P19胚胎癌细胞内瞬时表达,在细胞学水平对基因功能进行初步研究。方法KpnⅠ/XhoⅠ双酶切pGEM-T-Ercc6l获得目的基因Ercc6l,将其克隆到同样经过双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1(-)Myc His6,重组质粒pcDNA3.1(+/-)-Ercc6l经菌落PCR和双酶切鉴定;脂质体介导法体外瞬时转染正义载体至P19细胞,RT-PCR检测基因在细胞内的表达活性情况。结果重组质粒经菌落PCR和KpnⅠ/XhoⅠ双酶切鉴定,表明真核表达载体构建正确;脂质体介导法瞬时转染正义载体至P19细胞后,检测表明转染细胞能够表达Ercc6l。结论成功构建了Ercc6l正、反义真核表达载体,其正义载体转染真核细胞后能在其中表达。

ERCC6L在肿瘤中的表达和作用

ERCC6L是一种新发现的DNA解旋酶,也被称为PLK1相互作用检查点解旋酶(PICH)。它最初在小鼠组织中被鉴定,并属于SNF2蛋白家族的成员之一。作为PLK1的底物,ERCC6L在控制细胞有丝分裂中扮演重要角色。很多研究报道了ERCC6L在肿瘤细胞中异常表达的情况。ERCC6L的异常表达可以通过促凋亡因子抑制细胞增殖或诱导凋亡。然而,由于肿瘤环境的差异和不同肿瘤复杂的调控机制,ERCC6L对不同肿瘤的进展影响也不尽相同。在某些肿瘤中,高表达的ERCC6L可能促进肿瘤的转移,而在其他肿瘤中,高表达的ERCC6L则可能抑制肿瘤的侵袭和转移。越来越多的证据表明,在不同的肿瘤环境中,ERCC6L通过多种复杂的调控机制,在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着复杂而不同的作用。因此,ERCC6L不仅可能成为一种有用的转移生物标志物,还可能成为研究肿瘤细胞代谢机制和治疗多种类型肿瘤的靶点。本文作者综述了ERCC6L在不同肿瘤中的表达、机制和功能的研究进展,并对ERCC6L在不同肿瘤中的表达情况进行了进一步的分析,为深入理解ERCC6L在肿瘤中的作用机制提供重要的参考。

ERCC6基因单核苷酸多态性的研究进展

科凯恩氏综合征互补B蛋白质(CSB)是核苷酸切除修复(NER)通路的关键蛋白质,由ERCC6基因编码,该基因的突变可引起科凯恩氏综合征。有CSB缺陷的细胞易出现氧化应激引起的DNA氧化损伤。单核苷酸多态性(SNP)是人类遗传变异中最常见的一种类型,与很多疾病的易感性相关。本文旨在综述ERCC6基因SNP的研究进展。

干扰ERCC6L增强非小细胞肺癌细胞放疗敏感性

目的探讨切除修复交叉互补酶6L(ERCC6L)在非小细胞肺癌中的表达及其与放射敏感性的关系。方法Western blot和免疫荧光验证ERCC6L在肺癌细胞系中的表达水平及亚细胞定位;Western blot检测16对癌组织及癌旁组织中ERCC6L的表达;免疫组化的方法检测肺癌和X射线照射后肺癌组织中ERCC6L的表达;用ERCC6L特异性siRNA干扰其在A549细胞中的表达,用磷酸化-γH2AX荧光焦点检测DNA双链断裂损伤的修复情况。结果ERCC6L在肺癌组织的中表达水平高于癌旁组织,在A549细胞中干扰ERCC6L并经过X射线照射后,抑制DNA双链断裂损伤的修复能力。结论干扰ERCC6L可以增强非小细胞肺癌的放射敏感性。

靶向DNA修复基因ERCC6的shRNA载体构建及干扰效果评价

构建靶向ERCC6基因的短发夹RNA（short hairpin RNA,sh RNA）真核表达载体,评价其对肺癌细胞ERCC6表达的干扰效果。依据ERCC6基因的核苷酸序列和小干扰RNA的设计原则,设计并合成靶向ERCC6基因的3对ERCC6-sh RNAs和1对阴性对照NC-sh RNA片段,退火后连接至表达载体p GPU6/GFP/Neo中,重组载体经测序鉴定后转染肺癌SPC-A-1细胞中观察绿色荧光蛋白的表达情况,实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测ERCC6基因表达的变化。经测序分析证实,各ERCC6-sh RNA的表达载体均构建成功。转染重组质粒48 h后的各组细胞均有绿色荧光表达。实时荧光定量PCR和Western blotting表明,相对于阴性对照组,ERCC6-sh RNA1、ERCC6-sh RNA2、ERCC6-sh RNA3三个实验组SPC-A-1细胞中ERCC6基因在m RNA和蛋白水平上的表达均显著降低（p〈0.05）,其中ERCC6-sh RNA3载体的干扰效果最佳。本研究成功构建并筛选了靶向ERCC6基因的sh RNA高效干扰载体,能够有效抑制ERCC6基因在肺癌细胞中的表达,这为进一步研究ERCC6基因与肿瘤发生分子机制和化疗耐药的相关性提供了帮助。

Cockayne综合征患儿临床特征及基因突变研究一例报告

科凯恩综合征(Cockayne syndrome,CS)是一种罕见的常染色体隐性遗传疾病,于1936年由英国儿科医生Cockayne[1]首次对该疾病进行报道。在美国及欧洲国家该病的发病率大约是2.7/1000000[2],国内偶见散发个例报道。Coakayne综合征是一种以身材矮小、早衰外观为特征,该病特点包括体重不增、不能正常生长、头围异常小和神经系统发育受损。患儿对光极度敏感,少量阳光照射就能引起晒伤,其他症状包括听力丧失、眼部异常、蛀虫严重、骨质异常并有脑部特征性变化[3,4]。目前已知的主要致病基因有ERCC6、ERCC8,ERCC8位于人类第5号染色体(5q12.1),ERCC6位于人类第10号染色体(10q11.13)[5],另外少见的XPB、XPD、XPG基因亦可导致Cockayne综合征[6]。

Cockayne综合征研究进展

Cockayne综合征(Cockayne Syndrome, CS)是一种有多种临床表现的常染色体隐性遗传病,主要致病基因为ERCC6、ERCC8,与转录偶联核苷酸切除修复缺陷有关,此外转录缺陷、碱基切除DNA修复障碍、线粒体功能障碍等也可能参与发病。主要临床表现有体格生长受限、神经发育延迟/退化、小头畸形、皮肤光敏感、视听觉损害、早老面容等。神经影像学显示脑白质营养不良、脑萎缩、颅内钙化等特征性表现。有Cockayne综合征I型(经典型)、Cockayne综合征II型(重型)、Cockayne综合征III型(轻型)三种临床表型,以及紫外线敏感综合症(UVSS)及脑眼面骨骼综合征(COFS)两种变异型。该病罕见,发病率约0.027/万,我国目前多为个案报道,为提高对该病的认识,现就CS的临床表现、分子遗传学、诊断及治疗等方面进行综述。

Cockayne综合征两例临床特征与基因突变分析

目的分析Cockayne综合征患儿临床特征及基因突变。方法分析归纳2013年7月至2014年11月广州妇女儿童医疗中心收治的一对同胞兄弟共患经典型Cockayne综合征的临床特点；提取患儿及其血缘父母外周血全基因组DNA，用PCR方法扩增ERCC6基因全部外显子及与其相连的内含子区，扩增产物行双向测序，查找突变位点。结果患儿为同胞两兄弟，分别为4岁8月龄和7岁5月龄。均因“生长和智力落后数年”就诊，母孕产史均无异常。1岁前，患儿身高、体重均在正常范围内。1岁半后均出现身高、体重增长缓慢，运动发育落后，眼、皮肤光敏感，听力及视神经损害，小头、眼窝深邃。例1（先证者）就诊时身高90．8cm，体重9．1kg，头围41cm，胸围44cm；例2（先证者胞兄）就诊时身高92cm，体重11．2kg，头围41cm，胸围46cm。例1在4岁半，例2在7岁时头颅MRI检查提示全脑萎缩，脑室扩大，髓鞘形成不良。头颅磁共振波谱分析（氢谱）-MR成像提示左右两侧背侧丘脑、岛叶及左侧半卵圆中心神经元损伤。头颅CT提示双侧基底节对称性钙化。ERCC6基因突变分析提示兄弟俩ERCC6基因均存在c．1357C〉T（P．Arg453Ter）与c．1607T〉G（P．Leu536Trp）复合杂合致病突变，突变分别遗传自患儿母亲和父亲。结论Cockayne综合征患儿具有出生时正常，生后逐渐出现生长发育迟缓，语言、智力落后，脑损伤、小头畸形，眼窝深邃，皮肤光敏感等临床特征，存在ERCC6基因突变，易误诊为脑瘫、先天性小头畸形等。

Cockayne综合征1例报告

Cockayne综合征是一种罕见的进行性加重的多系统遗传性疾病,由Cockayne在1936年报道第1例而得名,属于常染色体隐性遗传病[1]。Cockayne综合征主要表现为全面发育迟缓、身材矮小、光敏性皮炎、早衰面容、小头畸形、视力听力损害、龋齿等。它具有由遗传异质性赋予的复杂表型,其最主要的致病基因是ERCC8(Cockayne syndromeA,CSA)和ERCC6(Cockayne syndromeB,CSB),分别位于第5和第10号染色体,ERCC6的突变约占病例的75%.