鼻咽癌中Period2下调ERK/MAPK磷酸化水平的机制

目的探讨生物钟基因Period2在鼻咽癌中下调ERK/MAPK磷酸化水平的分子机制。方法用慢病毒对细胞进行感染,构建细胞系。采用Label-free蛋白质组学检测方法对PER2蛋白表达进行验证。采用不同浓度的ERK通路激活剂Ceramide C6干预各组细胞,MTT检测各组细胞的增殖能力,筛选最佳药物浓度和作用时间。采用ERK通路激活剂Ceramide C6干预细胞,正常对照组采用等剂量药物溶剂进行处理,分为6组。Western blot检测各组细胞PER2、ERK、p38MAPK、p-ERK、p-p38MAPK蛋白的表达。流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测各组细胞侵袭能力,进一步明确PER2调控ERK、MAPK磷酸化的机制。用免疫组化检测PER2、p-ERK在人体鼻咽癌样本中的表达,并分析PER2、p-ERK与鼻咽癌临床特点的相关性。结果蛋白质组学检测结果示PER2过表达组的PER2蛋白表达明显高于阴性病毒对照组和空白对照组(P<0.05)。Top 20差异蛋白显示MAPK3在PER2过表达组和对照组差异有统计学意义(P<0.05)。MTT实验结果:不同药物浓度处理后,根据每组细胞抑制率,得出最佳的药物作用浓度10μmol/L,最佳处理时间24 h。WB结果显示PER2过表达下调p-ERK、p-p38MAPK蛋白表达,ERK通路激活剂Ceramide C6干预后,在PER2-OE组中ERK、p38MAPK蛋白水平无明显变化,但p-ERK、p-p38MAPK蛋白表达水平上调,干预前后差异有统计学意义(P<0.01)。细胞周期实验结果显示:ERK通路激活剂Ceramide C6干预各组细胞后,使细胞在G1期的比例明显增加,而在G2期数量减少。Transwell实验结果显示PER2过表达抑制细胞侵袭能力,此种现象不能被磷酸激酶逆转。在鼻咽癌组织、鼻咽部黏膜中PER2蛋白、p-ERK蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。PER2蛋白表达与肿瘤的T分期相关(P<0.05)。在鼻咽癌组织中PER2蛋白与p-ERK蛋白表达相关(P<0.05)。结论PER2过表达下调ERK/MAPK磷酸化水平,可能不是直接作用于ERK和p38MAPK的磷酸化位点,而是与调控ERK和p38MAPK的关键节点有关。鼻咽癌组织中PER2蛋白呈低表达,p-ERK蛋白呈高表达,两者相关,并且与肿瘤的发生、发展关系密切。

木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖侵袭和上皮间质转化的机制研究

目的:探究木蝴蝶苷A通过调控MEK/ERK信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的机制。方法:将肝癌细胞HepG2分为Control组、OAL组、OAM组、OAH组、PD98059组和ML-099组。MTT法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡能力;蛋白质印迹法检测细胞中MEK.p-MEK、ERK.p-ERK蛋白及EMT相关蛋白表达。结果:OAL组、OAM组和OAH组细胞增殖和侵袭能力(82.34±2.43)、(61.04±1.61)、(32.44±1.04)均明显低于Control(110.42±3.86)组,细胞凋亡率(6.81±0.62)、(11.74±0.94)、(18.36±1.05)明显高于Control组(5.01±0.53)(F侵袭=1068,F凋亡=323.1,P<0.0001);细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.42±0.04)、(0.58±0.05)、(0.97±0.09)高于Control组(0.23±0.03)(F=181.1,P<0.0001);上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.63±0.06)、(0.51±0.05)、(0.38±0.03)、Vimentin蛋白(1.23±0.11)、(0.98±0.09)、(0.51±0.05)及p-MEK/MEK(0.72±0.07)、(0.51±0.05)、(0.32±0.03)和p-ERK/ERK(0.92±0.09)、(0.68±0.06)、(0.41±0.04)比值低于Control组(F_(N-cadherin)=39.04,F_(Vimentin)=111.0,F_(p-MEK/MEK)=107.8,F_(p-ERK/ERK)=82.68,P<0.0001)。PD98059组细胞增殖和侵袭能力(30.86±1.01)均明显低于Control组(t=48.84,P<0.0001),细胞凋亡能力(17.95±0.98)明显高于Control组(t=28.45,P<0.0001),细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.92±0.09)明显高于Control组(t=17.82,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.37±0.04)(t=9.585)、Vimentin蛋白(0.41±0.04)(t=19.99)及p-MEK/MEK(0.30±0.03)(t=16.78)、p-ERK/ERK(0.39±0.04)(t=14.65)比值均明显低于Control组(P<0.0001)。ML-099组细胞增殖和侵袭能力(100.86±2.68)均明显高于OAH组(t=12.54,P<0.0001),细胞凋亡能力(5.15±0.86)明显低于OAH组(t=23.84,P<0.0001);和OAH组相比,ML-099组细胞中上皮间质转化蛋白E-cadherin蛋白(0.25±0.03)明显减少(t=18.59,P<0.0001),上皮间质转化蛋白N-cadherin(0.69±0.07)(t=0.971,P<0.0001)、Vimentin蛋白(1.50±0.12)(t=18.65,P<0.0001)及p-MEK/MEK(0.94±0.09)(t=16.01,P<0.0001)、p-ERK/ERK(1.05±0.10)(t=2.367,P=0.0395)比值均明显升高。结论:木蝴蝶苷A可抑制肝癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,诱导肝癌细胞凋亡,其机制和抑制MEK/ERK信号通路有关。

温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究

目的观察温阳解郁颗粒(Wenyang Jieyu granule,WYJY)对皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导损伤型小鼠海马神经细胞(TH22 cell)的保护作用,基于脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,TrkB)/细胞外信号调节蛋白激酶(Extra cellular regulated protein kinases,ERK)信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型,以不同浓度的WYJY和氟西汀(Fluoxetine,FXT)含药血清作用于模型细胞,细胞增殖-毒性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分析细胞活性,倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)、实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)法检测神经细胞内凋亡因子(BCL2-Associated X,Bax)、抗凋亡因子(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶(Phospho-p90RSK,RSK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果在浓度为459.5μmol·L^(-1)的CORT作用24 h后,HT22细胞的活性抑制率达到50%,在此条件作用下细胞形态结构损伤明显,凋亡程度严重,细胞上清中BDNF的含量显著减少(P<0.05),细胞内凋亡相关因子Bcl-2/Bax的比值明显降低(P<0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低(P<0.01);以5%的浓度为2.85 g·kg-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后,HT22细胞存活率明显提升(P<0.01),细胞结构的损伤明显改善,细胞凋亡程度减轻,细胞外BDNF的含量显著升高(P<0.05),细胞内Bcl-2/Bax比值显著上调(P<0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升(P<0.05,P<0.01)。结论温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路,放大CREB信号传导,影响Bcl-2、BDNF水平,可能是其保护海马神经元,发挥抗抑郁疗效的重要机制。

基于AQP4、Kir4.1及Ras/Raf-1/ERK信号通路和F-ERG探讨活血通络方对视网膜静脉阻塞大鼠视网膜功能的影响

目的观察视网膜分支静脉阻塞大鼠应用活血通络方后视网膜组织内AQP4、Kir4.1及Ras/Raf-1/ERK1/2的表达及电生理变化。方法将SD大鼠分为正常空白对照组、实验对照组、中药实验组。采用眼底视网膜激光机光凝视网膜分支静脉。实验对照组给予生理盐水2 ml每日灌胃1次,中药实验组给予活血通络方2 ml每日灌胃1次。应用电生理闪光ERG(F-ERG)观察造模前、造模后第3天、第6天的视网膜双极细胞功能变化。应用Westernblot方法,于造模后第6天,观察水通道蛋白4(Aquaporin-4,AQP4)、钾离子通道4.1(Kir4.1)及Ras/p-Raf-1/p-ERK1/2的表达情况。结果视网膜分支静脉阻塞发生后,F-ERG示大鼠视网膜功能下降,但中药实验组功能好于实验对照组;造模后AQP4、Kir4.1及Ras/p-Raf-1/p-ERK1/2表达增高,但中药实验组结果均低于实验对照组。结论活血通络方能够抑制AQP4、Kir4.1;Ras/Raf-1/ERK1/2信号通路的表达,有助于受损的视网膜功能恢复。

肾素原受体在糖尿病视网膜病变中的作用及其机制研究

目的观察糖尿病视网膜病变发生过程中肾素原受体(PRR)及血管紧张素Ⅱ受体2(AT2R)的表达水平及视网膜神经细胞凋亡情况,阐明PRR与糖尿病视网膜神经细胞凋亡的关系。方法建立链尿佐菌素诱导的糖尿病SD大鼠模型,建模成功后分别在4周、8周和12周用免疫组化法检测CD14及8-羟脱氧鸟苷分子的表达,检测糖尿病及对照组视网膜AT2R、PRR mRNA的表达及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果各病程SD大鼠视网膜AT2R和PRR的mRNA表达水平较对照组明显升高(P<0.05),随病程的延长表达量随之增多。病程越长糖尿病组大鼠视网膜组织凋亡细胞数量越多,各阶段病程CD14染色未见明显新生血管。通过相关性分析显示,PRR和AT2R表达水平与神经节细胞凋亡相关。各病程大鼠视网膜ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达量显著高于对照组。结论糖尿病视网膜病变中PRR和AT2R的表达与大鼠糖尿病视网膜病变的神经节细胞凋亡相关,可能通过增加ERK的磷酸化水平发挥功能作用。

快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究进展

睡眠不足是快节奏的现代社会人们需要面对的越来越严重的问题之一,而长期的睡眠不足又会导致认知功能障碍。睡眠剥夺会影响实验动物的学习记忆能力已得到广泛认可。本文回顾总结了近些年有关快速眼球运动睡眠剥夺对记忆和突触可塑性的影响及其分子机制的研究新进展,以期为相关治疗靶点和治疗药物的研究提供理论支持和启发。

仑伐替尼通过下调IGF1R/Mek/Erk信号通路治疗瑞戈非尼耐药的肝细胞癌

目的探讨仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞的治疗疗效及其作用机制。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和克隆形成实验观察仑伐替尼对肝癌细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测仑伐替尼处理后瑞戈非尼耐药肝细胞癌细胞的凋亡情况,Western blot和免疫组化染色检测相关蛋白表达水平变化,小鼠皮下成瘤实验观察仑伐替尼对瑞戈非尼耐药肝癌细胞体内成瘤能力的抑制效果。结果CCK-8和克隆形成实验显示,仑伐替尼能够抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的增殖能力;仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞克隆数[分别为(120.67±11.06)个、(53.00±11.14)个、(55.00±9.54)个和(78.67±14.64)个]均低于对照组[分别为(478.00±24.52)个、(566.00±27.87)个、(333.67±7.02)个和(210.00±12.77)个,均P<0.05]。流式细胞术检测显示,仑伐替尼能够促进肝癌瑞戈非尼耐药细胞凋亡,仑伐替尼组HepG2、SMMC7721和瑞戈非尼耐药的HepG2、SMMC7721细胞凋亡率[分别为(12.30±0.70)%、(9.83±0.38)%、(15.90±1.32)%和(10.60±0.00)%]均高于对照组[分别为(7.50±0.87)%、(5.00±1.21)%、(8.10±1.61)%和(7.05±0.78)%,均P<0.05]。仑伐替尼处理后凋亡相关蛋白比值提示细胞凋亡能力增加。动物实验显示仑伐替尼治疗能够在体内抑制肝癌瑞戈非尼耐药细胞的生长。免疫组化及Western blot结果显示,仑伐替尼能够下调瑞戈非尼耐药细胞中异常活化的IGF1R/Mek/Erk信号通路。结论仑伐替尼能够逆转肝细胞癌瑞戈非尼耐药,其机制可能是通过下调IGF1R/Mek/Erk信号通路实现。

黄芪多糖对维甲酸诱导骨质疏松大鼠的影响

[目的]探究不同浓度的黄芪多糖对维甲酸诱导的骨质疏松大鼠的影响。[方法] 50只SD大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。除对照组外其他各组予以70 mg/kg维甲酸连续灌肠18 d,对照组使用等体积蒸馏水灌肠。之后,予以黄芪多糖灌胃,低剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(200 mg/kg)和高剂量组(400 mg/kg),对照组和模型组使用等体积蒸馏水,用药第30 d后,行大鼠左侧股骨大体、 BMD、生物力学检测,检测血清TNF-α和TGF-β1浓度,检测骨均浆蛋白。[结果]股骨重量由高至低依次为对照组>高剂量组>中剂量组>低剂量组>模型组[(1.1±0.2) g vs (1.0±0.1) g vs (0.9±0.2) g vs (0.8±0.1) g vs (0.6±0.0) g, P<0.001],对照组与高剂量组间骨重差异无统计学意义(P>0.05)。BMD依次为对照组>高剂量组>中剂量组>低剂量组>模型组[(252.5±21.2) mg/cm^(2)vs (232.7±21.4) mg/cm^(2)vs (190.6±31.2) mg/cm^(2)vs (158.1±13.1) mg/cm^(2)vs(119.9±12.2) mg/cm^(2), P<0.001],对照组与高剂量组间BMD差异无统计学意义(P>0.05)。力学测试的最大载荷排序同上,组间差异有统计学意义(P<0.05)。血清检测TNF-α排序为对照组<高剂量组<中剂量组<低剂量组<模型组,组间差异有统计学意义(P<0.05);血清检测TGF-β1排序为高剂量组>对照组>中剂量组>低剂量组>模型组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。骨均浆检测BMP-2/β-actin和p-ERK/ERK均为对照组>高剂量组>中剂量组>低剂量组>模型组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]黄芪多糖可改善维甲酸诱导的大鼠骨质疏松症状,其机理可能是激活MAPK/ERK信号通路下游。

尼可地尔联合乌司他丁对老年急性心肌梗死患者心肌的保护作用

目的:观察尼可地尔联合乌司他丁在老年急性心肌梗死(AMI)患者中的应用效果,并基于术后心肌保护、ERK信号通路探究其作用机制。方法:选取2020年1月—2023年3月我院老年AMI患者100例。对照组采取乌司他丁治疗,观察组采取尼可地尔联合乌司他丁治疗,每组50例。观察两组疗效、不良心血管事件及治疗前后心功能[左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、心排血量(CO)]、心肌损伤[可溶性肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子(sTWEAK)、弗林蛋白酶(Furin)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)]、氧化应激[超氧化物歧化酶(SOD)、醌氧化还原酶-1(NQO-1)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)]及细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路表达。结果:观察组总有效率94.00%,高于对照组78.00%(P<0.05);治疗3、7 d后观察组LVEF、CO、SV水平高于对照组(P<0.05);治疗3、7 d后观察组sTWEAK、Furin、NLR水平低于对照组(P<0.05);治疗3、7 d后观察组MDA、MPO水平低于对照组,SOD、NQO-1水平高于对照组(P<0.05);治疗3、7 d后观察组Bad mRNA、ERK mRNA表达低于对照组(P<0.05);观察组不良心血管事件发生率4.00%,与对照组14.58%相比,无显著差异。结论:尼可地尔联合乌司他丁能有效降低老年AMI患者氧化应激损伤,改善心功能,并可通过ERK信号通路调控发挥心肌保护作用,疗效确切。