益生菌L.Casei hang对大鼠急性肝损伤的保护作用及其对TLR4-ERK-PPAR-γ通路的影响

目的:研究益生菌L.Casei Zhang(LCZ)对大鼠急性肝损伤的保护作用并探讨相关机制。方法:48只Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、益生菌组和地塞米松组。采用腹腔注射脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)建立大鼠急性肝损伤模型。益生菌组在造模前连续30天灌服LCZ(1×109CFU)。地塞米松组在造模前腹腔注射地塞米松(10 mg/kg)。造模后16小时处死大鼠,检测血清中ALT和AST的变化、检测肝脏匀浆中TNF-α和NO的表达。采用免疫组化方法检测肝脏组织中TLR4和p-ERK的表达水平;采用RT-PCR和Western blot方法检测肝脏中PPAR-γ表达的变化。结果:益生菌组和地塞米松组血清ALT、AST以及肝脏中TNF-α和NO表达显著低于模型组。同时,组织切片显示,肝细胞坏死程度也显著减轻。免疫组化结果显示,与模型组相比,益生菌组和地塞米松组肝脏中TLR4和p-ERK水平也显著降低。PPAR-γ表达在模型组中显著降低,在益生菌组和地塞米松组表达又有所恢复。结论:益生菌L.Casei Zhang对LPS/D-GalN诱导的大鼠急性肝损伤有保护作用,该作用与抑制TLR4-ERK通路以及上调PPAR-γ的表达有关。

大黄素抑制背根神经节压迫小鼠模型STAT3、VEGFA、p-ERK蛋白表达及其镇痛作用研究

目的 研究大黄素(Emodin,ED)对背根节压迫小鼠模型的镇痛作用以及对STAT3/VEGFA/p-ERK信号通路的影响。方法 建立背根神经节慢性压迫(chronic compression damage,CCD)小鼠疼痛模型,随机分为空白组、模型组、普瑞巴林组及ED低、中、高剂量组。通过检测动物机械痛敏和热辐射痛敏阈值、醋酸扭体实验评价镇痛效果;ELISA检测小鼠L4-L5节段脊髓组织中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和CD18等炎症因子含量;Western blot和免疫荧光检测脊髓组织信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinases 1/2,p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组的机械痛敏、热辐射痛敏阈值显著降低(P<0.05),脊髓背角炎症因子表达显著增高(P<0.05),脊髓中VEGFA、STAT3、p-ERK的表达显著上调(P<0.05)。与模型组比,ED低、中、高剂量组CCD小鼠模型的机械痛敏、热辐射痛敏阈值升高(P<0.05);脊髓背角炎症因子表达降低(P<0.05);脊髓背角小胶质细胞STAT3、VEGFA、p-ERK的表达降低(P<0.05),醋酸诱导的小鼠急性疼痛中扭体次数减少(P<0.05)。结论 ED对背根节压迫小鼠模型有良好的镇痛作用,其机制可能与抑制脊髓背角炎症因子表达和STAT3/VEGFA/p-ERK介导的脊髓小胶质细胞活化有关。

舒肌汤对L-DOPA诱发的帕金森病肌僵直大鼠的作用及其脑组织TH、DA含量和FosB、p-ERK蛋白的影响

目的:观察舒肌汤对左旋多巴(Levodopa,L-DOPA)诱发的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)肌僵直模型大鼠的影响,并探讨其作用机制。方法:L-DOPA诱导建立PD肌僵直大鼠模型,随机分为模型组(等体积生理盐水),舒肌汤低、中、高剂量组(10、20、40 g/kg),同时设假手术组(等体积生理盐水)作为对照,每组6只大鼠,每天灌胃给药1次,连续给药28 d。给药完成后通过旋转次数实验、翻正反射实验、肌电图检测行为学表现。免疫组化检测脑组织酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)表达水平。ELISA检测脑纹状体组织多巴胺(dopamine,DA)和TH的含量。Western blot检测脑纹状体组织FBJ鼠科骨肉瘤病毒癌基因同源物B(FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog B,FosB)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠旋转次数、翻正反射时间与评分、肌肉动作电位波幅和潜伏期显著升高或延长(P<0.01),MCV显著降低(P<0.01);与模型组相比,舒肌汤组大鼠旋转次数、翻正反射时间与评分、肌肉动作电位波幅和潜伏期显著降低或缩短(P<0.05),MCV显著升高(P<0.01)。免疫组化结果显示舒肌汤可上调脑组织TH表达水平;ELISA结果显示舒肌汤可上调DA和TH含量。Western blot结果显示舒肌汤可下调FosB、p-ERK蛋白表达水平。结论:舒肌汤对帕金森病模型大鼠肌僵直有显著疗效,其作用机制可能与上调DA和TH含量、下调FosB、p-ERK蛋白表达有关。

Agtr1a调节LPS诱导的Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞炎症

目的基于LBP敲除小鼠(Lbp^(-/-))原代肝细胞探讨LBP缺失后Agtr1a调节LPS诱导炎症的作用。方法通过两步灌流法提取WT组、Lbp^(-/-)组小鼠原代肝细胞,构建LPS诱导的原代肝细胞炎症模型;分别采取加入抑制剂氯沙坦、转染siRNA两种方法抑制Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞Agtr1a表达;抑制剂法将细胞分为对照组A(空白对照)、LPS组A(LPS刺激)、抑制剂氯沙坦组(氯沙坦干预3 h后加入LPS刺激),转染siRNA法将细胞分为对照组B(空白对照)、LPS组B(LPS刺激)、阴性对照组(si-NC干扰12 h后加入LPS刺激)、干扰组(si-agtr1a干扰12 h后加入LPS刺激);WT组小鼠原代肝细胞则分为对照组(空白对照)、LPS组(LPS刺激)。本研究利用Western Blot验证Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞中LBP蛋白敲除情况,从WT组、Lbp^(-/-)组小鼠原代肝细胞的Western Blot方面验证Agtr1a在LPS刺激下的变化情况,使用CCK8、qPCR、Western Blot等方法探讨抑制剂氯沙坦及si-agtr1a对Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞炎症的抑制情况。结果Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞中LBP蛋白已敲除完全;与WT组相比,在LPS诱导下Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞Agtr1a表达显著升高(P<0.001);抑制剂组细胞存活率显著升高(P<0.01);抑制剂组以及干扰组的炎症因子表达显著降低(P<0.01),同时与炎症相关蛋白p-ERK的表达也显著降低(P<0.01)。结论LPS刺激Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞后Agtr1a表达上调能够代偿脂多糖结合蛋白(LBP)的作用来促进炎症的发生,抑制Agtr1a表达能显著降低LPS诱导的Lbp^(-/-)小鼠原代肝细胞炎症反应。

HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及临床意义

目的:探讨HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及意义。方法:选取2020年10月至2022年10月我院收治的宫颈癌患者90例,作为研究组,另纳入宫颈上皮内瘤变患者90例,作为对照组。统计两组HPV感染状况、ERK信号通路关键因子[核不均一核糖核蛋白E1(HnRNP E1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化非受体酪氨酸激酶(p-Src)]表达,比较研究组不同临床病理特征患者ERK信号通路关键因子表达,Spearman分析两者间相关性,Logi.0stic回归方程分析HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应。结果:研究组HPV感染率及HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白阳性率均高于对照组CINⅠ~Ⅱ、Ⅲ级(P<0.05);宫颈癌患者FIGO分期、HPV感染、分化程度与HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白呈正相关(P<0.05);HnRNP E1、p-ERK1/2、p-Src蛋白及三者交互作用是宫颈癌患者HPV感染高危因素(P<0.05)。结论:HPV感染及ERK信号通路关键因子阳性表达均可增加宫颈癌发病风险,两者存在正向交互作用,可为宫颈癌鉴别诊治提供有利参考信息。

生长激素释放肽对心衰大鼠心肌细胞中ERK^(-P)表达的影响

目的研究大鼠慢性心衰时细胞外信号调节激酶(ERK-P)含量的变化以及生长激素释放肽(GHRP)对其的影响。方法 Wistar成年大鼠45只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组15只。采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠慢性心衰模型,假手术组只挤出心脏,不结扎冠状动脉;治疗组造模后给予GHRP尾静脉注射4 w,通过HE染色观察心衰大鼠心肌组织形态学变化、Western印迹法检测各组大鼠心肌细胞中ERK-P蛋白表达水平。结果模型组与假手术组相比,左室峰压、左室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显降低,心肌组织中ERK-P明显升高(P<0.01);治疗组与模型组相比,左室峰压、左室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显增高,心肌组织中ERK-P较模型组明显降低(P<0.01),与假手术组相比ERK-P升高(P<0.05)。结论 ERK-P在慢性心衰发生过程中起重要作用,GHRP可降低慢性心衰大鼠心肌细胞ERK-P含量,有保护和改善心衰大鼠心功能的作用。

p,p′-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞MAPK通路的影响

目的 研究p ,p′ DDE对离体培养大鼠睾丸支持细胞内信号转导通路的影响。方法 从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养 ,以SABC方法来检测细胞内p ERK的表达。结果 发现支持细胞细胞内p ERK随p,p′ DDE剂量的增高而染色加深 ,而且胞浆胞核都表达。结论 p ,p′ DDE可导致支持细胞内ERK磷酸化 ,诱导ERK下游通路的激活 ,从而影响到基因的转录和表达。

叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制及其机制

目的:研究叶黄素对结肠癌HT29细胞的增殖抑制作用及可能的机制.方法:用不同浓度的叶黄素(20、40、80、160 m g/L)和空白对照组(0 m g/L)干预处理培养的HT29细胞24、48、72 h,采用SRB法检测其对该细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞凋亡;Western blot检测磷酸化ERK(phosphorylation of ERK,p-ERK)、磷酸化p38(phosphorylation of p38,p-p38)蛋白表达水平的变化.结果:叶黄素能抑制HT29细胞增殖,且有明显的剂量和时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期结果显示,叶黄素(80 mg/L)干预处理HT29细胞48 h后,G0/G1期细胞由58.67%增加至63.23%,且随药物浓度增加,G0/G1期细胞显著增加,当叶黄素浓度为160 mg/L时,G0/G1期细胞增加至70.81%,表明叶黄素可将HT29细胞阻滞在G0/G1期;Hoechst33342/PI荧光染色法检测细胞凋亡结果显示,叶黄素可诱导HT29细胞凋亡;Western blot检测结果显示叶黄素可下调p-ERK、上调p-p38蛋白的表达,有浓度依赖性(P<0.01).结论:叶黄素可显著抑制HT29细胞的增殖并诱导其凋亡,使细胞周期阻滞在G0/G1期;下调p-ERK蛋白、上调p-p38蛋白的表达可能是其诱导细胞凋亡的重要机制.

p-ERK、p-CREB、c-fos在姜黄素抗大鼠神经病理性痛中的作用

目的:观察姜黄素对神经病理性痛大鼠痛行为及背根神经节的p-ERK、p-CREB表达的影响。方法:采用大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型。雄性SD大鼠108只,随机分为实验对照组(Con)、假手术组(Sham)、溶剂对照组(SC)、小、中、大剂量姜黄素组(Cur30、Cur100、Cur300)。姜黄素组行CCI术,每组每天分别腹腔注射姜黄素30mg/kg、100mg·kg-1、300mg·kg-1,持续14d。各组于术前2d和术后1、3、5、7、10、14d测定机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL)。在术后3、7、14d处死大鼠(n=6),分别制备大鼠L4-5背根神经节的石蜡标本,用免疫组织化学方法测定背根神经节p-ERK、p-CREB、c-fos表达的动态变化。结果:Con组大鼠MWT和TWL呈进行性下降,在术后3d降至最低(MWT为15.3±3g,TWL为4.6±1.0s),术侧背根神经节p-ERK、p-CREB阳性神经元明显增多;Cur组大鼠在术后MWT和TWL亦进行性下降,在术后3d降至最低(Cur100组的MWT为22.6±4g,TWL为5.6±1.1s),与Con组相比,每组每个时间点的MWT、TWL均明显升高(P<0.01);术侧的背根神经节的p-ERK、p-CREB、c-fos阳性神经元的表达下降,每组每个时间点表达均低于Con组(P<0.01)。结论:姜黄素能减轻神经病理性痛,其机制可能与降低背根神经节的p-ERK、p-CREB、c-fos阳性神经元的表达有关。

食管鳞癌中ERK及其活化形式蛋白的表达及意义

目的研究食管鳞癌及食管黏膜组织中的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)及其活化形式蛋白(P-ERK)的表达情况,并与食管癌临床病理特征进行相关性分析,探讨ERK及其活化形式蛋白在食管鳞癌发生发展中的作用。方法采用Western blotting法检测食管癌组织与黏膜组织中ERK及P-ERK蛋白的表达情况,并分别从食管鳞癌患者年龄、性别、病理分化程度、临床分期及淋巴结有无转移等方面进行相关性研究。同时,采用免疫组化SP法从食管鳞癌病理分化程度、临床分期及淋巴结有无转移方面进一步检测ERK及P-ERK与食管鳞癌的相关性。结果由Western blotting法结果可以看出,ERK及P-ERK在食管癌组织中表达明显增强,而在食管黏膜组织中则呈低表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。ERK在患者的年龄、性别和分化程度各组间的表达差异无显著性(P>0.05),而在临床分期、淋巴结转移各组间差异有显著性(P<0.05),且T3-4期患者ERK及P-ERK蛋白的表达强度明显高于T1-2期患者;食管鳞癌淋巴结发生转移患者ERK及P-ERK蛋白的表达强度明显高于无淋巴结转移患者。免疫组化结果与Western blotting结果一致。结论 ERK及P-ERK蛋白在食管鳞癌组织发生、发展中起关键作用,对研究食管癌与ERK转导途径相关的抗肿瘤药物有重要的参考价值。

EZH2对HSC-T6细胞增殖活化的影响及其部分机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)表达沉默对大鼠肝星状细胞HSC-T6细胞增殖活化的影响,及其部分调控机制。方法应用EZH2的抑制剂DZNep(3-Deazaneplanocin A)作用于TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞,采用Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达;根据EZH2的碱基序列设计并合成小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),通过脂质体LipofectamineTM2000转染到HSC-T6细胞内,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞的增殖变化,Western blot法检测蛋白EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA的表达。结果将DZNep加入TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞后,EZH2蛋白水平明显降低,同时p-ERK、pAKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低;将EZH2-si RNA转染活化的HSC-T6细胞内,HSC-T6细胞的增殖可明显被抑制,同时EZH2、p-ERK、p-AKT和α-SMA蛋白水平亦明显降低。结论抑制EZH2的表达可明显抑制HSC-T6细胞的增殖活化,EZH2可能是潜在的治疗肝纤维化的靶点。

微囊藻毒素LR影响人肝细胞HL7702的ERK及JNK的蛋白磷酸化

微囊藻毒素（Microcystin,MCYST）是蓝藻的一些属产生的次级代谢产物,在发生水华的水体中普遍存在。微囊藻毒素LR（MCLR）是微囊藻毒素中存在最为普遍且毒性作用最强的一种。已有研究表明,微囊藻毒素可以诱发肝毒性并且与人群中的肝癌发生密切相关[1,2],因此进一步阐明其致毒机理具有重要的意义。

p-Bad112/136、p-Akt、p-Erk在乳腺癌癌变过程中的表达及意义

目的:研究p-Bad112/136、p-Erk、p-Akt在乳腺癌癌变过程中,即乳腺正常组织、普通导管增生、轻中度不典型导管增生、重度不典型增生及导管原位癌、乳腺浸润性导管癌中的表达及意义。方法:用免疫组织化学S-P法检测131例乳腺石蜡包埋组织、WesternBlotting法检测27例乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中p-Bad112/136、p-Akt、p-Erk的表达情况。用χ2和t检验等方法分析四种蛋白在乳腺癌组织中表达的意义及其与临床病理特征间的关系。结果:免疫组化结果显示在乳腺癌癌变过程中这四种蛋白表达阳性率呈递增趋势,其中四种蛋白在乳腺普通导管增生和重度不典型增生及原位癌间阳性表达率差异有统计学意义(P值分别为0.034、0.023、0.001、0.001);p-Bad112/136蛋白在重度不典型增生及原位癌组与浸润性导管癌组间差异有明显统计学意义(P=0.002,0.004)。统计分析显示在乳腺浸润性导管癌中这四种蛋白与患者的年龄、临床分期、肿瘤大小无明显关系,但均与组织学分级相关(P值分别为0.039、0.026、0.038、0.026)。同时p-Erk、p-Akt蛋白的表达与腋窝淋巴结转移有关(P值分别为0.041、0.016)。WesternBlotting结果显示四种蛋白含量在乳腺癌与癌旁乳腺组织的差异有明显的统计学意义(P值分别为0.002,0.001,0.002,0.003)。在乳腺癌组织中p-Bad112与p-Erk及p-Bad136与p-Akt蛋白表达量呈正相关性(P值分别为0.034、0.020)。结论:这四种蛋白表达水平在一定程度上提示了乳腺导管非典型增生向乳腺癌的转化潜能,并且提示MAPK/Erk及PI3-K/Akt传导路径在乳腺癌癌变过程中具有重要作用。

雌激素及雌激素受体拮抗剂对乳腺癌信号传导通路中MEK-2和p-ERK病理形态的影响

目的:探讨乳腺癌中雌激素受体与细胞信号传导通路MAPK上游激酶MEK-2和下游激酶p-ERK的作用机制。方法:应用雌激素(雌二醇)与雌激素受体拮抗剂(三苯氧胺)诱导BCML-TA299小鼠原位移植乳腺癌组织,通过病理形态学、免疫组织化学法检测ERβ、MEK-2和p-ERK的表达。结果:雌二醇(E2)促进细胞增殖,核分裂多见,肿瘤有丰富的血管,第20天时肺组织中血管腔及心腔内可见大量瘤栓。E2可激活MEK-2,p-ERK明显上调,ERβ与其基因有协同作用;而三苯氧胺(TAM)抑制细胞增殖,癌细胞明显受到损伤,核碎裂、凋亡小体多见,可见多灶性变性坏死区。同时出现ERβ、MEK-2和p-ERK下调,亦有协同作用。三苯氧胺与环磷酰胺联合应用效应优于单药的应用(F=211.88,F=179.08,F=156.44;P<0.05)。结论:ERβ与MAPK信号途径中上游激酶MEK-2和下游激酶p-ERK关系密切,并有协同作用,是乳腺癌发展中重要的调节信号。

头穴丛刺对阿尔茨海默病大鼠MAPK信号的影响

目的观察头穴丛刺对阿尔茨海默病(AD)大鼠MAPK信号中的erk、jnk、p38表达的影响。方法大鼠双侧海马区注射Aβ1-42建立AD大鼠模型,将60只大鼠随机分为5组:空白组,模型组,头穴丛刺组,传统头针组及体针组,每组各12只。经过4周干预后,经免疫组化法观察大鼠海马区组织中p-jnk/jnk、p-erk/erk、p-p38/p38的变化。结果头穴丛刺组、传统头针组分别与模型组相比差异具有统计学意义(P<0.05),体针组与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05);p-jnk/jnk表达变化:各治疗组间相比差异均具有统计学意义(P<0.05),头穴丛刺组优于传统头针组及体针组;p-erk/erk表达变化:体针组与头穴丛刺组和传统头针组相比差异具有统计学意义(P<0.05),头穴丛刺组较优,头穴丛刺组与传统头针组相比有上升趋势,但P>0.05,两者比较差异无统计学意义;p-p38/p38表达变化:各治疗组间相比差异均具有统计学意义(P<0.05),头穴丛刺组优于传统头针组及体针组。结论头穴丛刺通过上调p-erk、下调p-jnk及p-p38的表达,进而改善大鼠学习记忆能力。

雷公藤多甙对胶原诱导关节炎大鼠的治疗作用及其作用机制

目的探讨雷公藤多甙对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型,胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮生长因子(vascuoar endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-1、2、9表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,研究雷公藤多甙治疗RA的可能机制。方法采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型;观察雷公藤多甙治疗后模型大鼠关节肿胀情况,用免疫组化法观察大鼠关节炎症及滑膜微血管密度;用Western blot法检测CIA大鼠血清IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1、2、9的表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS;用Western blot法检测不同浓度雷公藤多甙治疗后CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK的表达。结果 CIA大鼠造模成功,雷公藤多甙治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子及血管新生相关因子表达(P<0.05);免疫组化结果显示雷公藤多甙能抑制CIA大鼠关节滑膜血管新生(P<0.05);不同浓度雷公藤多甙对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,但可降低FLS的p-ERK表达(P<0.05)。结论雷公藤多甙对CIA大鼠抗炎及抑制血管新生的作用可能与调节ERK信号转导通路有关。

苦参碱通过MAPK/mTOR信号通路诱导IMCD3细胞自噬及机制研究

目的:通过观察苦参碱对小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞(IMCD3)自噬的影响,探讨苦参碱诱导细胞自噬可能的分子机制。方法:在小鼠IMCD3中加入不同浓度的苦参碱(0.2、0.4、0.8、1.6 mg/ml),检测苦参碱对细胞活性、细胞的凋亡以及细胞自噬的影响;采用Western blot检测自噬相关的蛋白LC3、ERK、p-ERK、p53、Beclin-1、p70S6K、p-p70S6K、AKT、p-AKT表达水平的变化。结果:当苦参碱浓度为0、0.2、0.4、0.8 mg/ml时,IMCD3活性以及凋亡坏死没有明显变化,当苦参碱浓度为1.6 mg/ml时,细胞凋亡坏死明显增加;苦参碱处理后,细胞中自噬小体的数量明显增加;随着苦参碱处理浓度的增加,细胞中LC3蛋白表达明显升高,p-ERK、p-p70S6K表达明显减弱,ERK、p70S6K、p53、Beclin-1、AKT和p-AKT等蛋白表达无明显变化。结论:苦参碱可通过抑制MAPK/mTOR信号通路的活化促进小鼠IMCD3的自噬。

熊果苷对膀胱癌EJ-1细胞增殖的影响及其机制研究

【目的】探讨熊果苷对膀胱癌EJ-1细胞增殖的影响及其机制研究。【方法】采用MTT法观察不同质量浓度(10、20、50、100、500μg/mL)及不同作用时间(24、48、72、96 h)熊果苷对EJ-1细胞增殖能力的影响,流式细胞术观察100μg/mL熊果苷对EJ-1细胞周期及凋亡的影响,蛋白免疫印迹(Western blot)法观察熊果苷对EJ-1细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、Cyclin D1、p21蛋白表达的影响。【结果】100μg/mL熊果苷对EJ-1细胞增殖的抑制作用最佳,且呈时间依赖性。细胞阻滞于G2/M期。100μg/mL熊果苷作用96 h的EJ-1细胞增殖指数(PI)下降,与处理24~48 h的细胞PI比较,差异有统计学意义(P <0.05)。亚G1峰值逐渐升高,96 h时最为明显(P<0.05)。Western blot结果显示:与同组0 d比较,作用24、48、72、96 h后, p-ERK蛋白表达水平均降低(P> 0.05),呈逐渐下降后升高的趋势;ERK蛋白表达水平均降低,但差异无统计学意义(P> 0.05);Cyclin D1蛋白表达水平均升高(P> 0.05),呈逐渐升高后下降的趋势;p21蛋白表达水平随时间延长逐渐升高,于96 h差异有统计学意义(P <0.05)。【结论】熊果苷可抑制膀胱癌EJ-1细胞的增殖,其机制可能与抑制ERK和p21蛋白的表达有关。

硫化氢对正常及自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞PCNA和P-ERK蛋白表达的影响

目的研究硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）对正常大鼠及自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat，SHR）主动脉平滑肌细胞（aoric smooth muscle cell，ASMC）增殖的影响。方法分别将正常大鼠及SHR主动脉平滑肌细胞分为实验组和对照组，实验组中分别加入浓度为（10^-5～10^-3）mol·L^-1 H2S供体的硫氢化钠（sodium hydrosuifide，NaHS）或浓度为（2～10）mmol·L^-1胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂的炔丙基甘氨酸（DL-propargylglycine，PPG），对照组加入等体积的生理盐水，分别以蛋白质印迹法观察6、12、18和24h时间点的平滑肌细胞中细胞增殖核抗原（PCNA）和磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白表达情况。结果NaHS对正常大鼠ASMC增殖及p-ERK蛋白表达无影响。PPG显著促进正常大鼠ASMC增殖及p-ERK蛋白表达。NaHS显著抑制SHR的ASMC增殖及p-ERK蛋白表达。PPG显著促进SHR的ASMC增殖及p-ERK蛋白表达。结论内源性H2S下调可促进正常大鼠及SHR的ASMC增殖，而外源性补充H2S可抑制SHR的ASMC异常增殖，ERK信号途径可能介导H2S抑制ASMC增殖的分子机制。

ghrelin调控ERK信号通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制

目的:探讨ghrelin调控ERK信号传导通路对乳腺癌细胞多药耐药的影响及机制。方法:人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞培养,设立对照组、多柔比星组、ghrelin组、ghrelin联合多柔比星组、ghrelin联合多柔比星加PD098059抑制剂组,采用流式细胞法检测细胞凋亡,Western-blot方法检测细胞ERK、p-ERK、P-gp蛋白的表达。结果:在ghrelin干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最低(P<0.01),在多柔比星的干预下人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率最高(P<0.01),ghrelin联合多柔比星能够抑制多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的促凋亡作用(P<0.01),ghrelin联合多柔比星加ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059能够减弱ghrelin联合多柔比星对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的抑制作用(P<0.01)。多柔比星组与ghrelin组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P<0.05)、且ghrelin组与多柔比星组相比P-gp蛋白表达明显上升(P<0.05),ghrelin联合多柔比星组与多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显增加(P<0.05)、且P-gp蛋白表达明显增加(P<0.05),ghrelin联合多柔比星加抑制剂组与ghrelin联合多柔比星组相比ERK表达及p-ERK水平明显下降(P<0.01),P-gp蛋白表达无显著性差异(P=0.07)。结论:一定浓度的ghrelin激活乳腺癌细胞ERK信号通路增加P-gp蛋白表达,从而抑制多柔比星诱导乳腺癌细胞凋亡而诱发耐药的产生,阻断ghrelin-ERK信号通路可能逆转乳腺癌细胞多药耐药的发生。