非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马CA_1区LTP及ERK2与CaMKIIβ mRNA表达的影响

目的观察补阳还五汤对血管性痴呆(Vascular Dementia,VD)大鼠海马CA1区突触传递LTP效应及对海马组织ERK2与CaMKIIβ基因表达的影响。方法采用四血管阻断法建立大鼠VD动物模型。术后25d行水迷宫检测,30d采用在体大鼠海马CA3侧枝-CA1区长时程增强(LTP)记录方法记录海马CA1区LTP。采用RT-PCR方法检测大鼠海马CA1区脑组织ERK2与CaMKIIβmRNA表达。结果与模型组比较,补阳还五汤和尼莫地平组水迷宫实验平台象限游泳时间/游泳总时间、平台象限游泳距离/游泳总距离的比值显著增加,LTP检测实验中兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)斜率显著上升,大鼠海马ERK2与CaMKIIβmRNA表达显著增加。补阳还五汤与尼莫地平组相比,上述各指标均无显著差异。结论补阳还五汤可显著改善血管性痴呆大鼠学习记忆障碍,其作用可能与增强海马CAl区LTP,上调ERK2与CaMKIIβmRNA表达有关。

葛根素对氧糖剥夺细胞模型CaM、CaMKⅡ、MECP2、BDNF及Akt表达的影响

目的研究葛根素对氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation,OGD)血管性痴呆细胞模型细胞黏附分子(CaM)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、脑源性神经营养因子(BDNF)及Akt表达的影响。方法选取生长良好的PC12细胞传代、分化,行OGD准备血管性痴呆细胞模型,随机分为对照组、模型组及低、中、高剂量葛根素组。MTT法测定细胞存活率并确定合适的葛根素干预浓度及OGD处理时间;检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量评定细胞损伤程度,鉴定细胞模型;Western blot检测CaM、CaMKⅡ、MECP2、BDNF及Akt蛋白的表达水平。结果 PC12细胞存活率随OGD时间延长而逐渐降低,呈时间依赖性;PC12细胞存活率随葛根素浓度增加而逐渐升高,呈浓度依赖性。葛根素有效干预浓度为0.1～10μmol/L;OGD最佳处理时间为6h。与对照组相比,模型组LDH释放量明显增高(P<0.05);葛根素干预组LDH释放量随葛根素浓度增加而减少(P<0.05)。模型组CaM蛋白表达明显升高,BDNF表达量明显减少(P<0.05),MECP2表达及CaMKⅡ、Akt蛋白磷酸化水平均未见明显变化(P>0.05)。葛根素干预可下调CaM蛋白水平,提高MECP2、BDNF的表达及CaMKⅡ磷酸化水平,中、高剂量葛根素组亦能升高Akt蛋白磷酸化水平(P<0.05)。结论葛根素可能通过提高Ca2+-CaM复合物介导CaMKⅡ自身磷酸化水平,诱导MECP2磷酸化,上调BDNF的表达,激活下游PI3K-Akt通路,抑制凋亡基因及蛋白表达,发挥神经保护作用。

血管紧张素Ⅱ对小鼠骨髓间充质干细胞中ERK1/2和NF-κB信号途径介导的炎症反应的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对小鼠骨髓间充质干细胞(bmMSC)炎症反应的影响。方法:分别采用0、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L AngⅡ体外诱导培养bmMSC 12 h,然后应用ELISA法检测细胞TNF-α和IL-6的分泌水平,RT-PCR法检测细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达水平,Western blot法检测细胞中ERK1/2和NF-κBP65蛋白磷酸化程度。结果:5组bmMSC TNF-α和IL-6分泌水平、mRNA表达水平,ERK1、ERK2和NF-κB-P65蛋白磷酸化程度差异均有统计学意义(F=34.562、53.940、24.622、30.208、96.129、106.293和24.752,P<0.001)。与0 mol/L AngⅡ组比较,10-8、10-7、10-6和10-5mol/L AngⅡ组细胞TNF-α和IL-6分泌水平升高(P<0.05),TNF-α和IL-6 mRNA表达水平升高(P<0.05),ERK1/2和NF-κB-P65磷酸化程度升高(P<0.05),并且表现出一定的剂量依赖性(P<0.05)。结论:AngⅡ可通过活化ERK1/2和NF-κB信号途径介导bmMSC的炎症反应。

Cav3．2通道对背根节慢性压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ表达的影响

目的:观察Cav3.2通道对背根节慢性压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ表达的影响,探讨Cav3.2-CaMKⅡ通路在神经病理性疼痛中的作用。方法:雄性SD大鼠60只,体重250±20 g,随机分为5组,每组12只(其中行为学实验8只,免疫印迹实验4只)。分别是正常对照组(C组);模型组(CCD组);生理盐水组(NS组);错义寡聚核苷酸组(MS-Cav3.2组);反义寡聚核苷酸组(AS-Cav3.2组)。分别于鞘内置管前(T1),鞘内置管后3 d(T2),鞘内给药后1 d(T3)、4 d(T4),CCD模型制备后5d(T5)、10 d(T6)、15 d(T7)检测大鼠机械缩腿阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。并于CCD模型制备后5 d,各组取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用免疫印迹法检测Cav3.2及CaMKⅡ的表达。结果:与C组比较,CCD组大鼠在模型制备后第5 d、10 d、15 d时MWT及TWL均显著降低。鞘内注射NS和Cav3.2错义寡聚核苷酸对CCD大鼠MWT及TWL无影响,鞘内注射Cav3.2反义寡聚核苷酸可增加CCD大鼠MWT和TWL,减轻大鼠机械痛敏和热痛敏。C组大鼠脊髓Cav3.2和CaMKⅡ蛋白均有表达。大鼠在制备CCD模型后5 d Cav3.2及CaMKⅡ蛋白表达均显著增加。鞘内注射NS及Cav3.2错义寡聚核苷酸对Cav3.2及CaMKⅡ蛋白表达无影响,鞘内注射Cav3.2反义寡聚核苷酸则可显著抑制Cav3.2及CaMKⅡ蛋白的表达。结论:抑制脊髓Cav3.2通道的表达可降低慢性背根节压迫痛大鼠脊髓CaMKⅡ的表达。

大鼠脑出血后血肿周围Ca^(2+)浓度的变化与磷酸化CaMKⅡ表达的实验研究

目的 探讨脑出血后血肿周围脑组织钙离子浓度和磷酸化的钙调蛋白依赖性蛋白激酶 (P-Ca MK )表达的变化及其相关联系。方法 采用胶原酶注入尾状核建立大鼠脑出血模型 ,干湿重法测量脑组织含水量 ,Fura-2 / AM荧光法测定血肿周围 Ca2 +浓度 ,免疫组化方法检测 P-Ca MK 的表达。结果 与正常组相比 ,脑出血后 6h,Ca2 +浓度、脑含水量和 P-Ca MK 的表达均开始上调 ,第 3天达高峰 ,此后逐渐回落 ,持续 1周仍高于正常水平 ;Ca2 +浓度的变化与 P-Ca MK 的表达强度呈明显正相关。结论 脑出血后细胞内钙超载 ,导致 Ca MK 磷酸化作用增强 。

同型半胱氨酸在大鼠血管平滑肌细胞上通过激活ERK1/2信号通路促进血管紧张素Ⅱ受体1表达

目的观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)血管紧张素Ⅱ受体1(angiotensinⅡreceptor type 1,AT1R)蛋白表达的影响。方法从大鼠胸主动脉分离、培养VSMCs,并用平滑肌特异性肌纤蛋白(α-SMA)进行免疫荧光鉴定;用10、100和300μmol/L 3个不同浓度的Hcy孵育VSMCs,或在加入Hcy的同时加入5μmol/L的ERK1/2通路阻断剂U0126,48h后用免疫印迹法检测磷酸化的ERK1/2及AT1R的蛋白表达。结果经鉴定,成功分离、培养VSMCs。10、100和300μmol/L 3个不同浓度的Hcy均可上调VSMC的AT1R蛋白表达量(与溶剂对照组比较,P<0.05)。但3个浓度的Hcy组间差异无统计学意义(P>0.05)。10μmol/L的Hcy可增加VSMC的ERK1/2磷酸化(P<0.05),激活ERK1/2信号通路。ERK1/2通路抑制剂U0126可完全阻断Hcy导致的ERK1/2磷酸化,并取消Hcy导致的AT1R上调。结论 Hcy可通过激活ERK1/2信号通路促进大鼠VSMC AT1R的表达,这一结果可能有助于揭示高Hcy血症与高血压的内在联系。

ERK1/2及JNK参与DL0805抑制血管紧张素Ⅱ引起的大鼠离体胸主动脉环收缩

目的研究Rho激酶抑制剂DL0805对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的大鼠离体胸主动脉环收缩反应的影响及其可能的机制。方法测定离体血管张力观察大鼠胸主动脉环收缩反应,Western blot检测大鼠离体胸主动脉环ERK1/2和JNK蛋白磷酸化,和AngⅡ1型受体(AT1R)蛋白表达水平。结果 DL0805(10、25和50μmol/L)浓度依赖性地抑制AngⅡ(100 nmol/L)引起的内皮完整或去内皮的大鼠离体胸主动脉环收缩(P<0.01,P<0.001),DL0805(25和50μmol/L)抑制AngⅡ(100 nmol/L)诱导的ERK1/2和JNK的活化(P<0.05,P<0.01和P<0.001),但DL0805(5、25和50μmol/L)对AngⅡ刺激的血管环AT1R蛋白表达水平无显著影响。结论 DL0805抑制AngⅡ引起的大鼠离体胸主动脉环收缩,其机制可能与其抑制AngⅡ诱导的ERK1/2和JNK活化有关。

铝对学习记忆及大鼠海马Ca^(2+)-CaM-CaMKⅡ途径的影响

铝是地球表面含量最丰富、分布最广泛的金属元素,在土壤、地表水、食物及空气的尘埃中均有铝的存在,自来水厂常用硫酸铝作沉淀剂,以上种种原因导致铝不断进入人体,如果积聚于人体达到一定量后即可产生明显的毒性反应,如铝的脑毒性作用。该文介绍铝对Ca2+-CaM-CaMKⅡ通路的影响,以及进而引发的学习记忆方面的障碍。

血管紧张素Ⅱ通过ERK1/2信号通路诱导脐静脉内皮细胞凋亡

目的观察血管紧张素Ⅱ致内皮细胞(HUVECs)凋亡的作用并探讨其可能机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)制备血管内皮细胞损伤模型,ERK1/2抑制剂PD98059进行干预。流式细胞仪测定内皮细胞凋亡率;免疫印迹法测定胞外信号调节激酶(ERK1/2)的表达。结果 AngⅡ可导致内皮细胞凋亡;并可明显促进内皮细胞ERK1/2表达;PD98059可降低AngⅡ所致内皮细胞凋亡率。结论 AngⅡ可诱导的HUVECs凋亡,促进ERK1/2表达可能是作用机制之一。

北五味子多糖通过ERK1/2通路对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的观察北五味子多糖(polysaccharide of Schisandra chinensis,SCP)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFb)增殖作用,并探讨其作用机制.方法以培养的新生Wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组、模型组、3个药物剂量组.采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb;四氮唑盐(MTT)比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸(Hyp)法测定胶原含量;分光光度计测定CFb中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)水平;硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)水平;免疫组化技术检测CFb中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白表达.结果SCP能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖(P<0.05或P<0.01),降低Hyp含量,提高SOD活力,降低MDA水平(P<0.05,P<0.01),提高NOS活性及NO水平(P<0.05,P<0.01),减低ERK1/2蛋白表达(P<0.05,P<0.01).结论SCP可通过抑制ERK1/2信号通路提高NOS活性,并升高NO水平,增强抗AngⅡ诱导的CFb增殖能力.

磷酸化ERK、TGF-β受体Ⅱ和磷酸化Smad2蛋白在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨磷酸化ERK(P-ERK)、TGF-β受体Ⅱ(TβRⅡ)和磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白在食管癌发生、发展中的作用。方法采用Western blot技术检测38份手术切除的食管癌标本和12份癌旁组织标本中P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达。结果食管癌组织中TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达明显低于癌旁组织,P-ERK蛋白表达明显高于癌旁组织,P均<0.05;P-ERK、TβRⅡ、P-Smad2蛋白表达与食管癌患者年龄、性别及肿瘤组织分化程度、淋巴结转移均无明显相关性;P-ERK、TβRⅡ与P-Smad2蛋白表达亦无明显相关性。结论食管癌组织中存在P-ERK、TβRⅡ和Smad2蛋白表达异常;此可能与食管癌的发病有关。

PI3K阻断剂LY294002对TNF-α诱导心肌肥大的Ca^(2+)-CaMKⅡ和CaN通路的影响

目的研究PI3K是否通过Ca2+-Ca MKⅡ和Ca N信号途径参与肿瘤坏死因子-α诱导的心肌肥大。方法应用激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞内Ca2+浓度变化。Lowry法测心肌细胞蛋白含量。计算机图象分析测心肌细胞体积。应用Western blot法测定心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N蛋白表达。结果 1PI3K阻断剂LY294002(50μmol/L)明显抑制TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子浓度增高(P<0.01),对正常心肌细胞内Ca2+浓度无明显影响。其抑制程度与LY294002+2-APB(30μmol/L)组相近(P>0.05),小于LY294002+ryanodine(50μmol/L)组(P<0.05)。2LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞蛋白含量的增加及细胞体积的增大;其程度与LY294002+2-APB无统计学差异,但大于单用2-APB组,小于LY294002+ryanodine组(P<0.05)。PI3K阻断剂LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N表达增加(P<0.01),其抑制程度与LY294002+2-APB组相近(P>0.05)。结论 PI3K通过作用IP3R使心肌细胞内Ca2+浓度增加,进而调节心肌细胞内Ca MKⅡδB和Ca N的表达,从而参与TNF-α诱导的心肌肥大。

复合离子盐对高血压大鼠肾脏皮质AngⅡ、NO的产生及磷酸化ERK1/2表达的影响

目的观察复合离子盐对自发性高血压大鼠(SHR)肾脏皮质AngⅡ、NO的产生,及对磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的影响,探讨复合离子盐对SHR肾脏保护作用的可能机制。方法42只8周龄雄性SHR随机分为4组:8%食盐摄入组(HS组);1%复合离子盐摄入组(CIS组);1%复合离子盐+2.25%L-精氨酸摄入组(CIS+L-Arg组);1%食盐摄入组(NS组),持续干预12周。干预期间定期观察大鼠血压、尿蛋白的变化;干预结束后处死动物,放射免疫法检测肾皮质中AngⅡ、NO含量;并通过Western-blot法分析SHR肾脏皮质磷酸化ERK1/2蛋白表达的情况。结果12周干预结束后,CIS组与CIS+L-Arg组血压升高趋势明显低于NS组(P<0.01)。CIS组与CIS+L-Arg组尿蛋白排泄量与实验前相比无差异,但显著低于NS组(P<0.01)。与NS组相比,CIS组与CIS+L-Arg组可明显促进SHR肾脏组织NO的生成(P<0.01),抑制组织AngⅡ的产生(P<0.01),同时p-ERK1的表达在CIS组与CIS+L-Arg组明显降低(P<0.05)。结论复合离子盐与普通食盐比较,长期同等量摄入时可通过改变肾皮质中AngⅡ、NO含量,改善其功能平衡,还可使ERK1/2信号传导通路发生改变,这可能改善盐诱导的靶器官损害作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞ERK1/2和cAMP反应元件结合蛋白的表达

目的:探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs)ERK1/2和cAMP反应元件结合(CREB)蛋白表达的影响。方法:原代培养大鼠胸主动脉VSMCs;用Western blot法检测ERK1/2,p-ERK1/2,CREB和p-CREB蛋白表达。结果:AngⅡ可增加VSMCsp-ERK1/2和p-CREB蛋白表达,而不增加ERK1/2和CREB蛋白表达;F2(10-8,10-7和10-6mol/L)剂量-依赖地降低AngⅡ刺激的p-ERK1/2和p-CREB蛋白表达。结论:F2抑制AngⅡ刺激VSMCsERK1/2和CREB蛋白磷酸化,这可能是其抑制VSMCs增殖的机制。

血管紧张素Ⅱ通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化

目的探讨血管紧张素II通过ERK1/2通路促进血管钙化的病理生理学机制。方法体外培养HUVECs 5 d后,用不同浓度梯度血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞,筛选出诱导血管内皮细胞钙化的最适浓度。用血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞不同时间点(0、15、30、45、60 min),检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路磷酸化水平。用血管紧张素Ⅱ诱导5 d的钙化内皮细胞分为4组:对照组(用5%胎牛血清的ECM培养液)、血管紧张素Ⅱ组(100 nmol/L AngⅡ)、氯沙坦组(100 nmol/L AngⅡ+1μmol/L Losartan)、U0126组(100 nmol/L AngⅡ+U01261μmol/L)。通过Western blot、ELISA检测骨形态发生蛋白-2、4(BMP2、BMP4)钙化因子表达来探讨血管紧张素Ⅱ对血管内皮钙化的影响及其信号通路。结果血管紧张素Ⅱ增加人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的BMP2、BMP4钙化因子表达(P<0.05);而血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂和ERK1/2通路抑制剂U0126可下调血管紧张素Ⅱ对血管内皮BMP2、BMP4的表达(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ可诱导HUVECs钙化,其途径是通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化。

miR-148a通过抑制Ca^(2+)/钙调蛋白依赖激酶Ⅱα(CaMKⅡα)减少小鼠肝缺血再灌注损伤

目的探讨miR-148a通过抑制Ca2+/钙调蛋白依赖激酶Ⅱα(Ca MKⅡα)对肝缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其机制。方法建立小鼠肝I/R模型,采用实时定量PCR检测miR-148a、Ca MKⅡα、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达,Western blot法检测肝脏组织Ca MKⅡα的表达;HE染色观察各组肝组织的形态学变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况。结果肝I/R后miR-148a表达上调,与Ca MKⅡα表达水平呈负相关;外源性miR-148 a模拟物处理肝I/R损伤小鼠后,Ca MKⅡα、TNF-α、IL-1βmRNA的表达水平下降,肝脏组织炎性细胞浸润及肝实质细胞坏死减少,肝细胞凋亡降低。结论 miR-148a可通过抑制Ca MKⅡα的表达而缓解肝I/R损伤。