补骨脂酚对ESF-1细胞抗衰老基因调控机制研究

目的:通过研究补骨脂酚对人真皮正常成纤维细胞(ESF-1)增殖活性以及抗老化相关蛋白mRNA表达水平的影响,探讨补骨脂酚延缓皮肤衰老的机制。方法:将体外培养的正常ESF-1细胞分为空白对照组、雌二醇(10-3μmol/L)阳性对照组及补骨脂酚高、中、低剂量(100、10、1μmol/L)组,采用MTT法检测细胞活性,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测药物作用后细胞中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)mRNA的表达水平。结果:雌二醇和中剂量补骨脂酚能促进ESF-1细胞的增殖,显著上调ColⅠ、ColⅢ、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达,下调MMP-1 mRNA的表达。结论:补骨脂酚能促进ESF-1细胞的增殖,促进胶原蛋白和基质金属蛋白酶抑制剂mRNA的表达,并能抑制基质金属蛋白酶mRNA的表达,从而发挥抗皮肤衰老的作用。

绿原酸对紫外线致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究绿原酸抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,初步探讨其作用机制。方法:采用40J/cm2的UVA或70mJ/cm2的UVB照射ESF-1细胞后,立即加入不同浓度的绿原酸,24h后MTT法测定细胞活性,试剂盒法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果:绿原酸300mg/L和400mg/L的浓度能使UVA诱导的光老化细胞活性明显增强(P<0.05),细胞培养液中LDH活力降低(P<0.05),其中300mg/L绿原酸能使细胞培养液中MDA含量降低(P<0.05)、SOD活力升高(P<0.05);200、300、400mg/L的绿原酸能使UVB诱导的损伤细胞活性增强,其中200mg/L的绿原酸能使细胞培养液中SOD活力升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05),LDH活力降低(P<0.05)。结论:绿原酸具有光保护作用,提高SOD活力可能是其减轻紫外线辐射损伤的机制之一。

杜仲提取物抗UVA致ESF-1细胞光老化作用的机制研究

目的:探讨杜仲提取物(EE)抗UVA致人真皮成纤维细胞光老化的作用机制。方法:将体外培养的ESF-1细胞通过UVA照射建立细胞光老化模型,给予500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL 4种不同浓度的杜仲提取物,采用ELISA法检测细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的含量。结果:ESF-1细胞接受40J/cm的UVA照射后,细胞培养液中MMP-1、MMP-3含量明显升高(P<0.05),ColⅠ含量明显降低(P<0.05);给予EE后,细胞培养液中ColⅠ含量明显升高(P<0.05),MMP-1含量明显降低(P<0.05),MMP-3含量无明显变化。结论:杜仲提取物能抑制UVA引起的人MMP-1及MMP-3的异常分泌,降低ColⅠ的降解。

桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞MMP-1和TIMP-1表达的影响

目的探讨桃叶珊瑚苷对光老化皮肤成纤维细胞(ESF-1)基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和MMP-1抑制剂(TIMP-1)表达的影响及其对光老化ESF-1细胞的保护作用。方法以不同浓度桃叶珊瑚苷处理用20 J/cm2的UVA照射建立的光老化ESF-1细胞。MTT法检测细胞活力,分别检测细胞中SOD活性、GSH-Px活性和MDA水平。RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平。酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果 UVA照射ESF-1细胞后,其细胞活力、SOD和GSH-Px活性降低、MDA水平升高,ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达水平升高,TIMP-1 mRNA的表达水平降低、MMP-1水平升高、TIMP-1水平降低(P<0.01);1×10-5mol/L和1×10-6mol/L桃叶珊瑚苷能够显著改善ESF-1细胞的光损伤(P<0.05或P<0.01)。结论桃叶珊瑚苷能调节光老化ESF-1细胞MMP-1和TIMP-1的表达,减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。

杜仲对紫外线致ESF-1细胞光老化保护作用的研究

目的:研究杜仲抗紫外线致ESF-1细胞光老化作用,并初步探讨其作用机制。方法:杜仲70%乙醇提取物上D101大孔树脂制备不同浓度乙醇梯度洗脱部位,采用40 J.cm-2的UVA或70 mJ.cm-2的UVB照射ESF-1细胞后,立即加入不同浓度的杜仲50%乙醇洗脱部位,24 h后MTT法测定细胞活性,试剂盒法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)含量。结果:杜仲50%乙醇大孔树脂洗脱部位250,500 mg.L-1的给药浓度能使UVA诱导的光老化细胞活性明显增强(P<0.05),细胞培养液中LDH活力明显降低(P<0.05),其中250 mg.L-1的给药浓度能使细胞培养液中SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05);125,250,500 mg.L-1的给药浓度能使UVB诱导的光老化细胞活性明显增强,其中125 mg.L-1的给药浓度能使细胞培养液中LDH活力明显降低(P<0.05),SOD活力明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05)。结论:杜仲50%乙醇大孔树脂洗脱部位对UVA和UVB致ESF-1细胞光老化具有良好的保护作用,推测其机制为通过提高SOD活力、加速氧自由基的清除和减少氧自由基的产生,使细胞的脂质过氧化损伤程度降低;同时,可能通过抗氧化作用,维持了细胞膜结构和功能的完整性,使LDH的漏出减少。

十精丸含药血清对光老化ESF-1细胞分泌MMP-1、TIMP-1的影响

目的:研究十精丸含药血清对光老化人皮肤成纤维细胞(ESF-1)分泌MMP-1、TIMP-1的影响。方法:制备十精丸含药血清,采用UVA照射ESF-1细胞建立光老化模型,照射后用含不同浓度十精丸的大鼠血清进行干预,24h后采用ELISA方法检测各组细胞分泌MMP-1、TIMP-1的含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞活力降低、MMP-1表达升高、TIMP-1表达降低(P<0.01);与模型对照组比较,十精丸中、高剂量含药血清组细胞活力升高、MMP-1表达降低、TIMP-1表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论:十精丸含药血清通过调节MMP-1、TIMP-1的表达来拮抗UVA对皮肤成纤维细胞的损伤。

绿原酸对光老化ESF-1细胞ERK信号通路的调控研究

目的探讨绿原酸对光老化人皮肤成纤维细胞ESF-1光损伤的保护作用,及其对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响。方法用20 J/cm2的长波紫外线(UVA)照射ESF-1细胞制备光老化模型,以不同浓度绿原酸处理光老化细胞,检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)量,RT-PCR法检测细胞中ERK1、ERK2、基质金属蛋白酶1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)mRNA的表达量,Western blotting法检测p-ERK1/2蛋白的表达,酶联免疫法检测细胞上清液中MMP-1、TIMP-1的量。结果 UVA照射ESF-1细胞后,SOD活性、GSH-Px活性、TIMP-1 mRNA的表达量、TIMP-1的量明显降低,MDA水平、ERK1、ERK2、MMP-1 mRNA的表达量、p-ERK1/2、MMP-1水平明显升高(P<0.01);10.0、1.0μmol/L绿原酸能够显著改善光老化ESF-1细胞的损伤(P<0.05、0.01)。结论绿原酸调控光老化ESF-1细胞ERK信号通路,从而减轻UVA对ESF-1细胞的损伤。

不同砷化合物对人皮肤成纤维细胞系的毒性研究

目的探讨不同砷化合物对人皮肤成纤维细胞系(CCC-ESF-1)的细胞毒性与氧化应激的关系。方法培养的CCC-ESF-1分别暴露于0.0～400.0μmol/L三氧化二砷(As2O3,iAsⅢ)、砷酸氢二纳(Na2HAsO4.7H2Oi,AsⅤ)和二甲基砷酸钠(C2H6AsO2Na.3H2O,DMAV)48 h,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞生存率;检测砷化物对丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响。结果不同剂量范围内的iAsⅢ(≥12.5μmol/L)i、AsⅤ(≥12.5μmol/L)和DMAV(≥50.0μmol/L)均能显著降低CCC-ESF-1的细胞生存率(P<0.05,P<0.01),且在一定剂量范围内具有剂量-效应关系;iAsⅢi、AsⅤ和DMAV暴露48 h的CCC-ESF-1细胞的50%生存率(IC50)分别为16.52μmol/L、55.47μmol/L和>500.0μmol/L;12.5、50.0μmol/L As2O3(iAsⅢ),200.0μmol/L Na2HAsO4.7H2O(iAsⅤ)显著升高MDA含量(P≤0.05);与对照组相比,≥12.5μmol/L As2O3,200.0μmol/L Na2HAsO4.7H2O和≥12.5μmol/LC2H6AsO2Na.3H2O显著降低SOD活力(P<0.01,P≤0.05),1.05、0.0μmol/L Na2HAsO4.7H2O显著升高SOD活力(P≤0.05),其剂量-反应关系呈倒U形曲线。结论不同砷化物对CCC-ESF-1细胞有不同程度细胞毒性,其中As2O3(iAsⅢ)毒性较强,毒性机制之一可能与氧化应激损伤有关。