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大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ基因的克隆及表达 被引量:5
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作者 梁东春 郭刚 +1 位作者 左爱军 张镜宇 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1063-1067,共5页
以大鼠染色体DNA为模板 ,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因外显子 2编码区和外显子 3编码区 ,并使外显子 2编码区的 3′端与外显子 3编码区的 5′端有相同的 4 0个碱基。采用外显子拼接法 ,以两种扩增产物为模板再次进行PC... 以大鼠染色体DNA为模板 ,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因外显子 2编码区和外显子 3编码区 ,并使外显子 2编码区的 3′端与外显子 3编码区的 5′端有相同的 4 0个碱基。采用外显子拼接法 ,以两种扩增产物为模板再次进行PCR ,得到 2 10bp的大鼠IGF Ⅰ基因全编码序列。将此序列克隆入pUC18质粒进一步构建表达型重组质粒pGEX IGF Ⅰ ,并在大肠杆菌DH5α中进行诱导表达。表达产物经SDS PAGE分析及Westernblot检测 ,并经体外实验证明其具有刺激细胞增殖的生物活性。 展开更多
关键词 大鼠 胰岛素样生长因子 外显子拼接 基因克隆 表达
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大额牛HSL基因外显子Ⅰ部分片段的序列测定及分析 被引量:7
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作者 常怀普 钟金城 +6 位作者 陈智华 胡汉傈 马志杰 李子良 杨蓉生 陈玉红 张亚美 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第3期11-15,共5页
对大额牛HSL基因外显子Ⅰ部分序列进行PCR扩增、测序及氨基酸预测,并同其它牛种的资料进行了比对分析,构建了分子系统进化树。结果表明:大额牛其核苷酸序列与牦牛、普通牛、瘤牛、水牛间的同源性分别为99.6%、99.4%、99.2%、97.0%。相... 对大额牛HSL基因外显子Ⅰ部分序列进行PCR扩增、测序及氨基酸预测,并同其它牛种的资料进行了比对分析,构建了分子系统进化树。结果表明:大额牛其核苷酸序列与牦牛、普通牛、瘤牛、水牛间的同源性分别为99.6%、99.4%、99.2%、97.0%。相应的氨基酸序列大额牛与水牛的同源性为97.6%;与普通牛、瘤牛、牦牛的同源性均为99.4%,仅在第33位有1个氨基酸变异,即大额牛为异亮氨酸,而其它3个牛种均为缬氨酸,这是由该基因片段的第97位碱基发生转换(A←→G)造成的。从分子系统进化树看,瘤牛和普通牛先聚为一类,再依次与牦牛、大额牛、水牛相聚,这与传统的牛种分类结果一致。 展开更多
关键词 大额牛 HSL基因 外显子
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测序反应中PCR产物纯化方法的比较 被引量:6
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作者 张华 府伟灵 +1 位作者 黄庆 郭颖 《华南国防医学杂志》 CAS 2006年第3期1-3,共3页
目的寻找最佳的PCR产物纯化方法,建立稳定的重亚硫酸盐直接测序技术平台。方法应用过柱、乙醇/醋酸钠及SAP-Exon Ⅰ 3种纯化方法,对10例PCR产物进行纯化。结果经配对资料t检验,乙醇/醋酸钠和过柱纯化与SAP-Exon Ⅰ纯化法比较,纯化后PC... 目的寻找最佳的PCR产物纯化方法,建立稳定的重亚硫酸盐直接测序技术平台。方法应用过柱、乙醇/醋酸钠及SAP-Exon Ⅰ 3种纯化方法,对10例PCR产物进行纯化。结果经配对资料t检验,乙醇/醋酸钠和过柱纯化与SAP-Exon Ⅰ纯化法比较,纯化后PCR产物损失量均有极显著性差异(P<0.01),测序结果也有显著性差异(P<0.05)。结论应用SAP- Exon Ⅰ纯化法,PCR产物损失量低,测序结果明显优于另外两种方法。 展开更多
关键词 脱氧测序法 虾碱性磷酸酶 核酸外切酶I 测序图谱
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Preliminary study on the molecular structure of 3' region of Duchenne muscular dystrophy (DMD) gene in Chinese
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作者 余龙 赵寿元 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1996年第1期17-27,共11页
Number and order of HindⅢ exon-containing fragments (Hd) at 3' region of DMD gene were studied systematically using 16 partly-overlapping cDNA subprobes which were produced from dystrophin cDNA 9- 14 with each of... Number and order of HindⅢ exon-containing fragments (Hd) at 3' region of DMD gene were studied systematically using 16 partly-overlapping cDNA subprobes which were produced from dystrophin cDNA 9- 14 with each of 9 restriction endonudeases. There are 25 Hd fragments corresponding to cDNA 9 -14 in DMD gene. Since then, the exact length and the new order of Hd fragments are established. A new 2.1 kb fragment (Hd 55) is revealed, a 5.2 kb fragment (formely designated as Hd 59) is excluded and the existence of a controversial 3.2 kb fragment (Hd 64) is confirmed. Besides, three new exons were revealed by comparing the PvuⅡ and the XbaⅠ hybridization patterns with the Hindlll hybridization patterns for these cDNA subprobes. It is concluded that there are at least 66 Hd fragments, or 79 exons in DMD gene basing on the discovery of three additional exons. The corresponding relationship between the 66 Hd fragments and the SfiⅠ large scale physical map has been studied, and at least 17 Hd fragments or 19 exons were shown to be distributed in the last fragment (LI fragment) of the SfiⅠ map of DMD gene. 展开更多
关键词 DMD GENE molecular structure of 3’ REGION Hind exon-containing FRAGMENT Sfi map.
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