基于EXPRESS-G的BAS信息模型拓扑结构浅析

基于智能建筑中典型的BAS,在CAD设计的基础上,将EXPRESS-G图形语言运用在BAS设计过程中,以达到在设计与施工过程中减少重复劳动,简化设计过程,降低成本的目的。建立一个包含设备列表、网络拓扑结构、以及点表和操作序列的BAS信息模型,基于此模型可以在建筑的全生命周期中使BAS模型在符合IFC标准的前提下保持单向传递性,利用创建出的模型可以直接使用能耗仿真及维修管理系统等的应用程序,并且能在调试和使用过程中直接从中提取各自所需的数据信息。

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

异位嗅觉受体的功能及其作为药物靶点的研究进展

嗅觉受体(olfactory receptors,ORs)是一类主要在鼻上皮嗅觉感觉神经元中分布的跨膜蛋白,介导气味向大脑传递实时感觉信号而产生嗅觉。近年来研究发现,ORs也可在鼻腔外组织或器官中表达,且与多种生物过程密切相关,如精子趋化性、伤口愈合、糖脂代谢及肠道分泌等。此外,ORs还与前列腺癌、乳腺癌及结直肠癌等多种恶性肿瘤关系密切,通过调节细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等过程影响肿瘤的发生发展。本文概述了异位ORs对人体组织器官功能的影响,并评估它们作为治疗疾病的药物靶点的潜在价值。

RNA干扰PhCatC 1/2基因对波纹龙虾相关免疫基因表达的影响

初步研究RNA干扰PhCatC 1/2基因对波纹龙虾(Panulirus homarus)相关免疫基因表达的影响,采用qPCR技术检测PhCatC 1/2、PhTlr 13、PhLys和Phβ-G基因的表达,并观察肝胰腺组织的变化情况。结果表明:注射PhCatC 1-dsRNA后,PhCatC2表达量比对照组显著下降(P<0.05),与对照组相比PhTlr 13基因表达量在前期呈现显著升高,后下降的趋势,PhLys和Phβ-G基因的表达量均随dsRNA干扰时效的增加而增加;沉默PhCatC 2基因后PhTlr 13和Phβ-G基因的表达量随dsRNA干扰时效的增加而增加,PhCatC 1基因表达量呈现下上调交替的趋势,PhLys基因表达量表现出先下调后上调的趋势。通过PhCatC 1/2基因沉默后的分析初步推测,波纹龙虾可能通过促进Toll样受体和溶酶体通路来参与免疫应答,得出PhCatC 1/2基因具有免疫功能。

大口黑鲈弹状病毒G蛋白胞外区原核表达及多克隆抗体制备

【目的】获得能特异性识别大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus, MSRV)G蛋白的多克隆抗体,为后续MSRV双抗夹心法胶体金试纸条的研制提供材料。【方法】根据GenBank上MSRV G蛋白的基因序列(GenBank登录号:OK272491.1)设计扩增其胞外区的特异性引物,以感染MSRV的GS细胞的cDNA为模板,通过PCR扩增获得目的序列,双酶切后连接至pET-28a(+)表达载体构建重组质粒pET-28a-ΔG,将重组质粒转化大肠杆菌Trans5α感受态细胞。挑取测序正确的阳性克隆提取重组表达质粒pET-28a-ΔG,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,再次挑取阳性克隆,测序正确后用IPTG诱导表达。目的蛋白经Ni-NTA树脂层析柱纯化后免疫BALB/c雌性小鼠,4次免疫后眼眶采血获得抗MSRV G蛋白的多克隆抗体,最后通过ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定多克隆抗体的效价和特异性。【结果】PCR结果显示,获得大小为1 323 bp的目的条带。SDS-PAGE结果显示,构建的重组表达质粒可高效表达目的蛋白,Ni柱纯化后获得单一目的蛋白,分子质量在48.5 ku左右,与预期相符,且纯度符合免疫原要求。ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别不同批次的MSRV G蛋白。IFA结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别天然状态下的G蛋白。【结论】本研究利用MSRV G蛋白的胞外区重组蛋白成功制备出能特异性识别MSRV G蛋白的多克隆抗体,为后续MSRV的免疫检测和疫苗开发奠定了基础。

基于敏捷制造的产品检验信息数据描述方法研究

论述了敏捷制造的产品检验信息的框架。分析了产品检验信息所涉及的范围和产品检验信息模型的IDEF0模型。在此基础上 ,开发出了基于STEP标准的用EXPRESS和EXPRESS G描述的产品检验信息模型 。

重组链球菌蛋白G的SUMO融合表达策略和活性表征

目的:链球菌蛋白G(Streptococcus Protein G,SPG)是一种能够和多种哺乳动物的IgG相结合的蛋白质,广泛用于重组蛋白和抗体的纯化,目前市场产品主要为His-SPG,本研究拟采用类泛素蛋白修饰分子(Small Ubiquitin-Like Modifier,SUMO)融合表达SPG,以提高SPG产量,降低纯化柱料的生产成本。方法:将SPG基因分别连接至pET28a和pSmartⅠ质粒,经大肠杆菌重组表达两种蛋白,并比较产量、纯度和活性的差异。结果:His-SUMO-SPG产量为12.5 mg/L,较His-SPG(8.4 mg/L)提高约49%;包被两种SPG于96微孔板作为固定相,检测其捕获兔多抗和鼠单抗能力,His-SUMO-SPG的检测信号(OD_(450))较His-SPG更高,具有更高载量;生物素化His-SPG对小鼠的IgG1、IgG2a、Ig2b以及兔IgG最低检测浓度分别为0.703 pmol/L、0.098 pmol/L、0.524 pmol/L和0.927 pmol/L,生物素化His-SUMO-SPG最低检测浓度分别为0.887 pmol/L、0.084 pmol/L、0.667pmol/L和0.865 pmol/L,两种SPG最低检出限接近。结论:His-SUMO-SPG和His-SPG在检测性能方面比较接近,His-SUMO-SPG结合IgG载量略高于His-SPG,且His-SUMO-SPG产量更高,SUMO融合表达蛋白G方法为工业大规模生产提供了一种有效策略。

电压门控钾通道亚家族G成员1在肺癌中的表达及生物学作用

目的:探讨电压门控钾通道亚家族G成员1(potassium voltage-gated channel subfamily G member 1,KCNG1)在人肺癌组织中的表达水平和临床意义以及其在肺癌细胞恶性生物学行为中的作用。方法:通过TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)分析KCNG1 mRNA在人肺癌组织中的表达水平,探究其与肺癌患者临床病理特征及预后的关系;基于KCNG1 mRNA表达水平构建预测肺癌患者预后的列线图模型;采用基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书通路(KEGG)富集分析探究KCNG1潜在的生物学功能;采用基因集富集分析(GSEA)预测KCNG1相关差异表达基因参与调控的相关信号通路。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹分别检测肺癌A549和H1299细胞系以及正常肺上皮细胞中KCNG1 mRNA和蛋白表达水平;通过转染siRNA构建KCNG1敲减的细胞株,分别采用EdU,Transwell,Matrigel Transwell,细胞划痕愈合及血管生成拟态实验检测细胞株生物学行为变化。结果:KCNG1 mRNA在肺癌组织中显著高表达且与肺癌患者不良预后密切相关(P均<0.05);列线图模型初步证实KCNG1可能是肺癌潜在的生物标志物,并具有良好的预后评价功能;GO及KEGG富集分析提示KCNG1在调节激素分泌、离子转运、神经肽信号通路及细胞间黏附等生物学过程中发挥重要作用;GSEA结果提示KCNG1相关差异表达基因主要富集在KRAS,MTORC1,MYC,P53及WNT信号通路;KCNG1敲低的肺癌细胞增殖、迁移、侵袭和成管能力明显受到抑制(P均<0.05)。结论:KCNG1 mRNA在肺癌中显著高表达且与患者不良预后密切相关;siRNA介导的KCNG1敲低可显著抑制肺癌细胞的恶性生长。

扎那纹胸鮡g型溶菌酶的cDNA克隆及组织表达分析

目的鉴定扎那纹胸鮡g型溶菌酶(GzLysG)编码序列,分析其在宿主免疫系统中的作用。方法通过巢氏PCR技术克隆了GzLysG cDNA序列,通过ExPASy、SignalP 5.0、CDD、Clustal Omega等在线软件对GzLysG蛋白进行生物信息学分析,利用RT-qPCR技术分析了GzLysG mRNA在不同组织中的表达情况。结果GzLysG cDNA的开放阅读框全长558 bp,编码185个氨基酸,其蛋白序列分子量为20478.20 u,理论等电点为9.16,是一种稳定的碱性亲水性蛋白质。该蛋白无信号肽,含有g型溶菌酶典型的催化活性位点、GEWL结构域和SLT结构域。高级结构分析发现,GzLysG蛋白以α螺旋和无规则卷曲结构为主,其分子表面有一条与溶菌酶活性密切相关的狭长裂缝。系统进化分析表明溶菌酶在物种进化过程中较为保守,且GzLysG与斑马鱼来源的溶菌酶表现出较近的亲缘关系。组织表达谱分析发现,GzLysG mRNA在免疫保护相关的皮肤、肌肉和鳃组织中具有较高表达量。结论GzLysG在扎那纹胸鮡固有免疫防御中可能发挥重要作用。

国内外装备综合保障标准数据模型分析

装备综合保障标准在产品设计、制造和维护各阶段发挥着非常重要的作用,是推进各行业尤其是航空航天业发展的关键力量。采用对比分析法,从当前国内外装备综合保障标准入手,阐述了装备综合保障的发展过程,对MIL-STD-1388-2B、GJB 3837-99、GEIA-STD-0007标准所采用的数据模型进行对比分析。研究表明,MIL-STD-1388-2B、GJB 3837-99采用树结构数据模型,GEIA-STD-0007采用EXPRESS语言与EXPRESS-G表达法建立数据模型。其中GEIA-STD-0007标准数据模型在数据库建立以及电子技术手册生成方面有较大优势。最后,针对中国装备综合保障研究现状,给出对国军标GJB3837-99改进的建议。

呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一个重组痘苗病毒中的表达

在使用痘苗病毒启动子P11k、P25k和P7.5k研究呼吸道合胞病毒(RSV)糖蛋白F和G表达效率的基础上,构建成功同时表达BSV F和G糖蛋白的重组痘苗病毒(VMS11G75F)。结果表明,11k和7.5k启动子可以象单独表达RSV F或G一样有效地同时表达RSVF和G。荧光检测显示,RSV F和G主要分布于细胞膜表面,部分RSVF分布于胞浆近核膜处。这种荧光分布特征在RSV F和G单独表达和同时表达的重组痘苗病毒中无明显差别。Westernblot表明,痘苗病毒表达的RSV糖蛋白G具有一条分子量约为90kD的弥散带,与RSV感染细胞产生的RSV G相同;RSVF除具有与RSV感染细胞产生的F1(48kD)和F2(20kD)相同的两种形式外,尚有少量未被蛋白酶水解的F0(6skD)。RSVF和G同时表达的重组痘苗病毒VMS11G75F经传15代后,在表达水平和基因组水平上都具有良好的遗传稳定性。

开发EXPRESS数据模式的方法

随着ＳＴＥＰ标准应用的逐步广泛和深入，用ＥＸＰＲＥＳＳ语言描述的数据模式将广泛地应用在计算机集成制造系统（ＣＩＭＳ）中，因此，研究ＥＸＰＲＥＳＳ数据模式开发方法就具有十分重要的意义。本文提出了一种开发ＥＸＰＲＥＳＳ数据模式的具体方法。它综合了多种建立信息模型方法的特点，对ＩＤＥＦ１Ｘ的功能进行了扩充，增加了定义域约束（ＤｏｍａｉｎＣｏｎｓｔｒａｉｎｔ）的概念和实体关系断言的图形表示方法，有力地支持了ＥＸＰＲＥＳＳ数据模式的开发。

重组人粒细胞集落刺激因子在Escherichia coli中的表达研究

根据人天然粒细胞集落刺激因子 (G -CSF)基因序列设计出引物 ,通过RT -PCR从人外周血单个核细胞mRNA获得G -CSFcDNA片段 .将该片段与原核表达载体 pT 7构建成重组体 ,导入大肠杆菌后发现天然G -CSFcD NA表达量并不理想 .这可能是由于天然hG -CSF 5’端G +C的比例过高 ,使转录后的mRNA很容易形成二级结构而影响翻译起始 ,因此在大肠杆菌中很难获得高效表达 .根据密码子简并性原则 ,在不改变编码氨基酸顺序的前提下 ,通过重新设计PCR引物 ,将hG -CSF的前 3个氨基酸密码子中的几个GC碱基作了改动 ,获得了新的cDNA突变体 ,将其与pT 7的重组体导入大肠杆菌 。

小鼠Doc-1R基因的克隆及其表达

背景与目的:Doc-1R基因是1999年克隆的一种新的基因,已有的研究表明Doc-1R基因可能是一种潜在的抑癌基因。为了进一步研究此基因的功能,我们首先克隆了小鼠的Doc-1R基因,并对此基因的表达进行了初步的研究。方法:根据小鼠的Doc-1R基因cDNA序列,设计合成基因组特异引物,应用巢式PCR对小鼠基因组步移文库进行扩增。对测序结果进行序列分析及剪接位点的鉴定。另外应用RT-PCR的方法研究了Doc-1R基因在小鼠肝、脾、胰、肾、肺、肠、心、脑、骨、肌肉、膀胱、卵巢、睾丸等13种组织的表达。结果:经二次基因组步移获得了小鼠Doc-1R基因组全长序列。基因组全长2787bp,含4个外显子和3个内含子,外显子与内含子接头符合GT/AG法则。RT-PCR结果表明,Doc-1R基因在小鼠13种组织和器官中均有表达。结论:成功克隆了小鼠Doc-1R基因,为进一步研究此基因的功能奠定了基础。RT-PCR表达结果提示此基因可能是对维持组织器官的功能具有重要的作用的管家基因。

水稻谷蛋白GluA-2基因5′上游序列控制下的UidA基因在转基因水稻胚乳中的表达模式(英文)

为了研究谷蛋白胚乳特异性表达启动子在我国栽培稻品种中的表达模式 ,将UidA基因分别置于水稻谷蛋白GluA 2基因 750bp和 2 3kb上游序列下游 ,利用农杆菌转化法导入栽培稻品种中花 8号并获得转基因植株。Southernblot检测表明 ,UidA基因已经整合到水稻基因组当中并以单拷贝存在。Northernblot检测表明 ,开花后 13～15d和 11～ 13d ,UidA基因和水稻内源的GluA 2基因的表达量分别达到最高 ,随后逐渐降低。对转基因植株种子的GUS染色表明 ,UidA基因仅在胚乳中表达 ,在糊粉层中GUS表达量最高。测定了 2 3kb和 750bp转基因植株种子的GUS活性 ,结果表明前者的GUS活性是后者的 2～ 3倍。序列分析表明 ,位于GluA 2基因转录启始位点上游 2170bp的G

表皮生长因子诱导人成纤维细胞基因表达谱的变化

深入研究EGF对靶细胞的作用有助于揭示细胞增殖、转化、凋亡以及胚胎发育的分子机理。本文采用cDNA微阵列技术,检测EGF持续作用48小时后人胚肺二倍体成纤维细胞基因表达谱的变化。结果显示:EGF长期作用诱导广泛的基因表达变化,在所检测的4096种人类基因中,有855种发生了变化,这些表达变化的基因参与细胞的能量代谢、生物合成、细胞周期调控及受体酪氨酸激酶和G蛋白耦连受体信号转导等细胞反应,其中最显著的变化趋势是GPCR及其相关蛋白基因表达的下调。

重组蛋白sHLA-G1的原核表达与纯化

为了进一步在蛋白质水平对人白细胞抗原HLA-G进行分析,利用已经构建好的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,进一步构建了重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白sHLA-G1在大肠杆菌(E.coli)中得到稳定表达,原核表达的重组蛋白sHLA-G1主要以包涵体形式存在。包涵体蛋白经充分洗涤、尿素溶解后用钴离子树脂纯化,并用SDS-PAGE和Western印迹进行了分析,鉴定结果表明,该蛋白纯度达到90%以上,并能与HLA-G特异性抗体87G反应。该研究结果为进一步的复性工作奠定了基础。

逆转录病毒表达系统及其在外源蛋白高效表达中的应用

逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成,在基因治疗和生物制药领域有很大的应用潜力。逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区;口炎疱疹病毒-G蛋白(vesicular stomatitis virus G,VSV-G)能有效扩大逆转录病毒感染宿主细胞的范围、提高逆转录病毒的感染效率;用高滴度的重组病毒感染细胞,经过简单的筛选即可获得高表达细胞株。就逆转录病毒表达系统的组成、感染的特点和机制及其应用前景作了概述。