EXT2基因突变引起的多发性骨软骨瘤的遗传学及表型分析

目的:对2个多发性骨软骨瘤(multiple exostoses)小家系中的先证者进行致病基因EXT1和EXT2编码序列的突变检测,寻找致病性突变。方法:应用PCR扩增EXT1和EXT2基因的编码区及外显子-内含子交界区,对产物进行直接测序。在50个正常对照中进行新发现突变位点的PCR测序分析,以排除多态性。结果:家系1的先证者检测到1个EXT2基因的已知突变c.668G>C(p.Arg223Pro),该错义突变使精氨酸变成脯氨酸;家系2的先证者于EXT2基因中检测到1个国际数据库中尚未报道的新突变c.950delT(p.Phe317SerfsX15),患者父母均未检测到此突变,故此突变为一个de novo突变。该突变引起开放阅读框架移位,提前引入终止密码子,导致蛋白质分子的截断,即部分exostosin结构域和全部glyco-transf-64结构域的丢失。结论:本文发现的EXT2基因的新生及已知突变是引起本研究中多发性骨软骨瘤患者发病的分子机制,可用于临床的分子诊断。

EXT2基因多态性与南方人2型糖尿病的相关性研究(英文)

目的:探讨EXT2基因多态性与2型糖尿病及其代谢指标的相关性。方法:研究对象均来自于上海地区,其中糖尿病患者共286例,正常人300例。RFLP法检测基因位点rs3740878,rs11037909和rs1113132的多态性。Hardy-Weinberg平衡法检测基因型的频率,同时对糖尿病组和正常组的代谢指标进行比较。结果:对于rs3740878位点:2型糖尿病组A等位基因和AA基因型的频率分别为71%,53.5%,显著高于正常组(65.3%,47.3%,P<0.01或P<0.05),A等位基因携带者患2型糖尿病的风险是G等位基因携带者的1.30倍(OR=1.30,95%CI:1.017-1.665,P=0.036),AA基因型患糖尿病的风险是GG基因型的1.68倍(OR=1.68,95%CI:1.022-2.773,χ2=4.233,P=0.04);同样对于位点rs11037909:2型糖尿病组TT基因型的频率为56.70%显著高于正常组46.3%(χ2=18.262,P<0.000 1),2型糖尿病组T基因的频率74.7%显著高于正常组65.7%(χ2=20.467,P<0.000 1)。杂合体CT基因型和纯合体TT基因型患2型糖尿病的风险分别是CC基因型的1.9倍(OR=1.9,95%CI:1.063-3.405,χ2=4.776,P=0.029)和2.497倍(OR=2.497,95%CI:1.419-4.369,χ2=10.482,P=0.001)。但是并没有发现这两个基因位点多态性与代谢指标之间有相关性,同样对于rs1113132位点来说,基因型与等位基因的分布在正常组和糖尿病组并没有显著的统计学差异。结论:基因EXT2两个多态性位点(rs3740878)和(rs11037909)中的等位基因A和T与中国南方人的2型糖尿病有显著的相关性,而位点rs1113132的多态性可能与中国南方人的2型糖尿病无关。

变性梯度凝胶电泳在遗传性多发性外生性骨疣基因诊断中的应用

目的:采用检测遗传性多发性外生性骨疣(hereditary multiple exostoses,HME)患者EXT2基因的突变,分析该方法的敏感性及用于HME基因诊断的可行性。方法:收集5个HME家系和3个HME散发患者,利用变性梯度凝胶电泳方法对EXT2基因的所有编码外显子及其旁侧内含子序列进行检测,并对出现异常构象的片段进行DNA测序分析。结果:在两个家系中分别发现了一种A313T的无义突变和一种319insGT的移码突变。结论:在HME患者中发现了2个EXT2基因致病突变,DGGE可作为基因诊断理想的候选方法。

代谢综合征痰证的危险因素:EXT2基因rs11037909/rs1113132/rs3740878-T等位基因、BMI与TG

目的 探讨EXT2基因的单核苷酸多态性(SNPs)对代谢综合征(MS)痰证易感性的影响。方法 选择2013年11月—2020年12月福建中医药大学附属第三人民医院治未病中心、体检中心,福建中医药大学附属晋江市中医院内分泌科就诊的MS患者849例,运用证素辨证方法将MS患者分成MS痰证组(641例)和非痰证组(208例),采用SNPscan多重SNP分型技术检测EXT2的rs11037909、rs1113132、rs3740878基因型,对EXT2基因的SNPs、体重指数(BMI)和甘油三酯(TG)进行Logistic回归分析。结果 (1)MS痰证组的BMI、TG与痰证素呈正相关(P<0.05)。(2)携带EXT2基因rs11037909、rs1113132、rs3740878基因型(CT/TC或CT+CC)、(CC或CG+CC)、(CC或CT+CC)者患痰证的风险是携带TT、GG、TT基因型者的0.562或0.666倍、0.559或0.645倍、0.561或0.650倍。(3)携带EXT2 rs11037909 CT/TC+CC、rs1113132 CG/GC+CC、rs3740878 CT/TC+CC基因型的超重肥胖者患痰证的风险是携带TT、GG、TT基因型的超重肥胖者的0.642、0.618、0.624倍。(4)携带EXT2 rs11037909 CT/TC+CC基因型的高TG者患痰证的风险是携带TT基因型的高TG者的0.544倍;携带EXT2 rs1113132 CG/GC+CC、rs3740878 CT/TC+CC基因型的无高TG者患痰证的风险是携带GG、TT基因型的高TG者的0.524、0.531倍。(5)携带EXT2 rs11037909/rs1113132/rs3740878 CT/TC+CC或CG/GC+CC基因型的无超重肥胖、无高TG者患痰证(轻)的风险是携带TT或GG基因型的超重肥胖、高TG者的0.102倍。结论 以T/G等位基因为参照,EXT2基因rs11037909/rs1113132/rs3740878-C等位基因与非痰证相比是MS痰证的保护因素,EXT2基因rs11037909/rs1113132/rs3740878-T等位基因、BMI与TG均是MS痰证的危险因素,会增加痰证的易感性,三者交互作用后患痰证的风险比无危险因素者高。

一个遗传性多发性骨软骨瘤家系EXT2基因的突变分析

目的对1个遗传性多发性骨软骨瘤（hereditary multiple exostosis, HME）家系候选致病基因EXTj和EXT2的编码序列进行突变分析，寻找该HEM家系的致病突变，为HME疾病的研究提供分子遗传学证据。方法对山东临沂1个HEM家系进行调查，并进行临床体格检查及影像学检查。提取家系成员外周血DNA，应用PCR技术扩增EXTl、EXT2的全部编码序列并进行直接测序分析。结果该HME家系呈常染色体显性遗传。EXTl、EXT2外显子测序结果显示，该家系中6例患者EXT2基因第2外显子均存在e．244delG杂合缺失突变，导致移码突变从而产生一个只有110个氨基酸的EXT2截短蛋白（P．Asp81 IlefsX30），而正常个体未出现该突变，即家系中该突变与疾病共分离。结论EXT2基因e．244delG突变是导致该家系的致病原因。

山西汉族遗传性多发性骨软骨瘤家系EXT1及EXT2基因突变研究

目的对山西一个汉族遗传性多发性骨软骨瘤家系的EXTl和EXT2基因的全部外显子序列进行分析，以寻找致病突变。方法用PCR扩增先证者EXTl和EXT2基因的全部外显子，将PCR产物送直接测序分析。结果发现EXT1基因2种同义突变（P477P、E587E）、3种内含子突变（C．1537－48A〉G、C．1721＋203A〉G、c．1722－1。3c〉G）。EXT2基因共发现5种内含子突变（C．－29－148A〉T、C．1080－18T〉A、C．1336－93C〉T、C．1526－166C〉T、C．1526－195C〉T）。其中，EXTlP477P、EXTlE587E和EXT2C．1080－18T〉A为多发性骨软骨瘤突变数据库已收录的多态位点，其余7个位点尚未见报道。结论对该家系EXT1、EXT2基因全部外显子的测序分析未发现明确的致病突变，该家系遗传性多发性骨软骨瘤的发生是否由除EXTl、EXT2外的其它EXT相关基因引起尚需进一步的连锁定位分析。

两个遗传性多发性软骨瘤家系EXT1及EXT2基因的突变检测

目的 对两个遗传性多发性软骨瘤(hereditary multiple exostosis,HME)家系致病基因EXT1和EXT2的编码区进行突变分析.方法 应用二代测序(next-generation sequencing,NGS)对两名先证者进行检测,对疑似突变采用Sanger双向测序对其家系成员和200例健康对照进行验证,并应用qPCR定量或多重连接探针扩增(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在其家系成员中进行缺失或重复验证.结果 在两个家系中分别发现了EXT1和EXT2基因的突变.家系1先证者及父亲均携带EXT2基因c.337 338insG突变,既往未见报道.在该家系的健康成员和200例健康对照中均未检测到上述突变.家系2先证者及母亲均携带EXT1基因的缺失,其父亲未携带相同的缺失.结论 EXT1、EXT2基因的突变是两个家系的致病原因.NGS结合Sanger测序、qPCR定量分析以及MLPA可以快速准确地对HME进行基因诊断.

EXT1基因1633-26(C→A)突变可能致多发性外生性骨疣

目的研究1例散发多发性外生性骨疣患者的基因突变情况,确定其致病基因。方法采用聚合酶链反应结合DNA直接测序法检测EXT1以及EXT2基因的突变热点区域;并应用错配引物PCR扩增引入酶切位点结合限制性片段长度多态性方法检测和鉴定突变。结果经测序证实在患者EXT1基因的第7内含子3′剪接位点上游26bp处发现一杂合突变,此杂合突变不存在于其表型正常的父母双亲中,是一个新生突变;错配引物扩增与限制性片段长度多态性分析结果表明在150名家系外正常对照者中没有此突变。结论EXT1基因1633-26(C→A)突变可能是导致这个患者发生多发性外生性骨疣的致病突变。

遗传性多发性骨软骨瘤的基因诊断及产前诊断

目的 研究家族遗传性骨软骨瘤病（hereditary multiple exostoses，HME）的致病基因及产前诊断。方法应用连锁分析方法对一个HME家系EXT1、EXT2和EXT3基因进行分析。致病基因定位后，用PCR-测序法进行了突变分析。结果在该家系中EXT2基因第6外显子发生1个新的无义突变（c．1006C〉T），该突变导致第336位编码谷氨酰胺的密码子CAA变为终止密码子TAA（G1n336X）。根据上述结果配合遗传咨询进行了产前诊断，结果显示胎儿正常。结论在家族遗传性骨软骨瘤家系中发现一新的EXT2基因突变，并应用于产前诊断。

五个遗传性多发性骨软骨瘤家系的基因变异分析和产前诊断

目的对5个遗传性多发性骨软骨瘤(multiple osteochondromas,MO)家系进行EXT1和EXT2基因变异分析,明确其致病原因,为家系的遗传咨询和产前诊断提供依据。方法应用二代测序(next generation sequencing,NGS)对5个MO家系的先证者进行MO相关致病基因EXT1、EXT2外显子检测,发现可疑致病位点后,应用Sanger双向测序对家系成员和200名正常个体进行变异位点的验证分析,应用多重连接探针扩增技术(multiple ligation-dependent probe amplification,MLPA)检测对家系成员和20名正常个体进行基因缺失变异验证分析,确定致病变异后,对其中2个家系的高危胎儿进行孕中期产前诊断。结果5个MO家系均检出EXT基因变异,分别为EXT1基因第2~3外显子缺失、EXT1基因c.1468dupC(p.Leu490ProfsX31)、EXT1基因c.2084delC(p.Pro695LeufsX11)、EXT2基因c.187delT(p.Phe63SerfsX29)、EXT2基因c.1362T>G(p.Tyr454X),其中EXT1基因第2~3外显子缺失、EXT1基因c.2084delC(p.Pro695LeufsX11)、EXT2基因c.187delT(p.Phe63SerfsX29)为尚未报道的新变异,在家系正常成员和正常对照中均未发现该变异。产前诊断结果显示家系1胎儿携带EXT1基因第2~3外显子杂合缺失变异,家系5胎儿携带EXT2基因c.1362T>G(p.Tyr454X)杂合变异。结论EXT1、EXT2基因变异是5个MO家系的致病病因,致病基因的检出为家系的产前基因诊断提供了依据。

一例遗传性多发性骨软骨瘤患者的基因突变分析

目的对1例遗传性多发性骨软骨瘤患者进行相关基因的突变检测,以寻找致病位点。方法采集患者及其家系成员的外周血标本,提取其全基因组DNA,用PCR对EXT1和EXT2基因的所有外显子进行扩增并测序,测序结果在Gen Bank上比对分析。结果患者:EXT1基因中发现一种内含子突变(c.1721+203T>TC),EXT2基因中发现三种内含子突变(c.1526-195C>T、c.1807-51T>C、c.1936-41T>C)。父亲:EXT1(c.1721+203T>TC)、EXT2(c.1526-195C>T、c.1807-51T>C、c.1936-41T>C),母亲:EXT2(c.1807-51T>CT),妹妹:EXT2(c.1807-51T>C)。结论通过对患者进行EXT1、EXT2基因的所有外显子扩增并测序分析,未发现明确的致病位点,该患者的发病是否由除EXT1、EXT2基因以外的其他相关基因突变引起,还需进一步的连锁定位分析。

遗传性多发性骨软骨瘤患者EXT基因突变检测一例

目的对1例遗传性多发性骨软骨瘤患者的EXT1和EXT2基因编码序列进行突变检测,寻找致病突变。方法采集患者及其家系成员外周血,应用PCR技术扩增EXT1和EXT2基因编码区及外显子-内含子交界区,再对产物进行测序。结果发现EXT1基因有7种内含子突变(c.1165-156G>GT、c.1284+66G>GA、c.1536+59G>GT、c.1536+91_99del AGGCTCCCC、c.1537-51A>AG、c.1722+202T>TC、c.1723-103C>CG),发现EXT2基因有6种内含子突变(c.70-80A>AC、c.636-79A>AC、c.1179-18T>TA、c.1595-195C>T、c.1905-51T>TC、c.2035-41T>TC)、1种外显子突变(c.138G>GA,p.E28K)。其中c.1536+91_99del AGGCTCCCC和p.E28K两种突变是新发现的多态位点,其它12种突变均为人类基因突变数据库收率的多态位点。结论未能找到该家系的明确致病基因,该家系的发病是否由EXT1和EXT2基因以外的EXT基因家族突变引起还需进一步的连锁定位分析。

Potocki-Shaffer综合征的临床诊断及文献复习

目的探讨Potocki-Shaffer综合征(PSS)的临床诊断特点和遗传学特征。方法对2021年2月中山大学附属第六医院儿科确诊的1例PSS患儿的临床表现、生化检查及基因检测等临床资料进行回顾性分析,并以"Potocki-Shaffer syndrome"、"ALX4 gene""EXT2 gene""PHF21A gene"为关键词,检索万方数据、中国知网、PubMed数据库自建库至2021年12月收录的文献,并对在线人类孟德尔遗传数据库收录的基因进行检索,总结PSS患者的临床特点和遗传学特征。结果本例患儿,男,5个月21 d,因"发现体重增长过快3月余"入院。患儿表现为智力障碍、运动发育迟缓、过度生长、隐匿性阴茎、听力障碍及肌张力低等。全外显子碱基序列测序发现患儿Chr11:44069455-48188946区域存在杂合缺失变异,其包含常染色体显性遗传基因EXT2、ALX4和PHF21A杂合缺失,临床诊断为PSS。文献检索共收集14篇文献(均为英文),包括本例患儿共36例,其中14例为碱基变异,22例为大片段缺失。涉及PHF21A基因23例(智力障碍22例,运动发育障碍21例,语言发育迟缓18例),涉及EXT2基因22例(外生骨疣13例),涉及ALX4基因19例(双顶骨孔15例);36例中颅面异常27例。结论PSS临床表型与3个常染色体显性遗传基因ALX4、EXT2和PHF21A密切相关,主要表现为智力障碍、颅面异常、语言运动发育障碍、外生骨疣及双顶骨孔等;基因检测有助于PSS的临床确诊,其变异类型以单碱基变异和大片段缺失为主。

一家系6例遗传性多发性骨软骨瘤基因诊断及文献复习

目的研究一家系中国人遗传性多发性骨软骨瘤基因突变状况,并对该家系中无临床症状的患儿进行诊断。方法收集、整理、分析该家系临床资料,应用PCR反应及扩增产物直接测序技术对先证者及其家系成员进行EXT2基因检测,并对相关文献进行回顾。结果家系中6人均发现了EXT2基因c.514C>T突变,其中5例患者有症状,1例患儿生后29小时尚无表现,该突变在中国人中首次发现。该突变位于第2外显子,为无义突变。结论 EXT2基因c.514C>T突变是导该家系发生HME的致病基因。

遗传性多发性外生骨疣一大家系的遗传与治疗研究

目的本文对遗传性多发性外生骨疣(hereditary multiple exostoses,简称EXT或HME)一大家系的家系调查、染色体、致病基因的定位以及中西医结合治疗研究进行了回顾总结。方法作者历时15年对一个HME大家系完成了家系调查,绘制了家系谱,对部分成员外周血淋巴细胞常规培养染色体核型G显带分析、致病基因的定位与测序分析,并对部分患者给予中西药物和手术治疗。结果共调查该家族7代1179人,具有亲缘关系成员646人,发现患者44人,37.32‰,男29人,女15人,男女之比1.933∶1。8例患者染色体G显带核型均正常,40例成员致病基因测序分析后发现,有13例家系成员含有骨疣致病基因EXT2的突变。应用四环素、糖皮质激素、六味地黄丸治疗21例,有效率达80.95%,手术治疗12例,一次治愈无复发。结论对该HME家系研究已取得一定成果,针对基因异常的药物开发和积极优生学措施有待进一步研究。