白藜芦醇通过铁死亡途径逆转食管癌细胞Eca109/DDP化疗耐药

背景白藜芦醇不仅具有抗肿瘤作用,其还能增强多种化疗药物的化疗敏感性,但其对食管癌耐药细胞的顺铂敏感性的作用尚不清楚.目的探讨白藜芦醇逆转食管癌细胞Eca109/DDP的耐药效应并从铁死亡的角度分析其潜在的作用机制.方法采用MTT法确定白藜芦醇和顺铂的最佳作用时间和浓度;检测细胞增殖、细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及铁离子的水平;Western blot检测铁死亡相关调控因子酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl coenzyme A synthetase long chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)的蛋白表达情况.结果MTT检测结果显示,相较于单用顺铂,联用白藜芦醇对Eca109/DDP细胞的生长抑制作用较为显著(P<0.05).此外,白藜芦醇和顺铂联用可显著降低Eca109/DDP细胞克隆形成数(P<0.05),增加细胞内铁离子、MDA和ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05).铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和铁离子螯合剂(deferoxamine,DFO)可部分逆转白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用(P<0.05).Western blot的结果显示相较于其他组,白藜芦醇和顺铂联用组的FTH和GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05),而ACSL4和P53的蛋白表达显著增加(P<0.05).结论白藜芦醇可通过铁死亡抑制Eca109/DDP细胞的增殖并逆转顺铂耐药.

冰片对Eca109/DDP细胞耐顺铂的逆转作用

目的观察冰片对食管癌细胞Eca109/DDP耐顺铂(DDP)的逆转作用,并探讨其机制。方法 MTT法检测冰片单用及与DDP联用对Eca109/DDP细胞增殖的影响,观察冰片对Eca109/DDP细胞耐DDP的逆转作用,计算耐药逆转指数;Western blot法检测Eca109/DDP细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达水平。结果 0.195、0.390、0.780、1.560μg/mL冰片对Eca109/DDP细胞无明显毒性作用(P>0.05),但与1μg/mL的DDP联用能浓度依赖性增加DDP对Eca109/DDP细胞的毒性(P<0.05),降低DDP对Eca109/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)(P<0.05),耐药逆转指数高达5.31,并能下调Eca109/DDP细胞P-gp的表达水平(P<0.05)。结论冰片能逆转Eca109/DDP细胞对DDP的耐药,其作用与下调Eca109/DDP细胞P-gp的表达有关。

二十二碳六烯酸逆转食管癌Eca109/DDP细胞对顺铂耐药的机制

目的:构建食管癌耐药细胞株,探讨二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)逆转人食管癌Eca109/顺铂(cisplatin,DDP)细胞对DDP的耐药作用及其机制.方法:采用递增顺铂药物质量浓度持续作用诱导法建立耐顺铂细胞株;MTT法检测DHA对Eca109/DDP细胞增殖影响,计算耐药逆转作用,Western blot检测Eca109/DDP细胞膜P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达水平.结果:历经6 mo的诱导,Eca109细胞能在含1 g/mL DDP的培养基中稳定生长,耐药指数(resistant index,RI)为15.9;DHA浓度在1.560 g/mL以下,对Eca109/DDP细胞的生长无显著抑制作用(P>0.05),但与DDP联合应用能增加DDP对Eca109/DDP细胞的毒性且呈浓度依赖性(P<0.05);1 g/mL DDP对Eca109/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)为3.50g/mL±1.04 g/mL,当分别与0.195、0.390、0.780、1.560 g/mL的DHA联合应用时,对Eca109/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)从1.99g/mL±0.11 g/mL降低到0.83 g/mL±0.22g/mL(P<0.05),提高逆转指数,并能显著抑制Eca109/DDP细胞P-gp表达水平,P-gp相对表达量从0.99±0.12降至0.52±0.08(P<0.05).结论:DHA与DDP联合应用通过下调Eca109/DDP细胞P-gp的表达水平逆转对DDP的耐药,促进DDP对耐药细胞的杀伤作用.

miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的:探讨miR-216b-5p对食管癌Eca109细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-216b-5p在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109和耐药细胞Eca109/DDP中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic及mimic NC、自噬相关蛋白5(ATG5)过表达质粒转染到Eca109/DDP细胞中,用CCK-8、EdU法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况,WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果:miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109和Eca109/DDP细胞中均呈低表达(均P<0.05)。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP细胞的增殖并诱导凋亡(均P<0.05),减少细胞中自噬小体数量(P<0.05),下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62蛋白水平(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达(P<0.05),过表达ATG5可使miR-216b-5p mimic对Eca109/DDP细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱(均P<0.05),自噬相关蛋白P62表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1表达升高(均P<0.05)。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论:miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。

对映-贝壳杉烷型二萜化合物Pseurata H对人食道癌ECA-109细胞生长的影响

为了研究对映-贝壳杉烷型二萜化合物Pseurata H对人食道癌ECA-109细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用,利用倒置显微镜观察法和CCK-8检测Pseurata H对ECA-109细胞生长的影响;利用考马斯亮蓝染色法和吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染法检测药物对细胞的张力纤维损伤和细胞核形态的影响.结果显示,用浓度分别为3.125μmol/L、6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L的Pseurata H作用ECA-109细胞24 h后,ECA-109细胞生长均受到抑制,Pseurata H对ECA-109细胞的半抑制浓度值(IC 50)为3.22μmol/L,当浓度6.25μmol/L的药物作用细胞24 h后,细胞数量减少、形态开始变圆脱落、微丝减少且核仁凝结,随着浓度增加,现象越明显.由此可见,二萜化合物Pseurata H在体外能抑制食道癌ECA-109细胞生长,具有时间-剂量依赖效应.

冰片与顺铂联用对Eca109(DDP^r)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P>0.05),但与1μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P<0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变、细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P<0.05),S期细胞、G2期细胞明显减少(P<0.05),细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期、增加细胞凋亡有关。

右美托咪定对食管癌Eca-109细胞LINC00982表达及生物学行为的影响

目的:探讨右美托咪定对食管癌Eca-109细胞LINC00982表达及生物学行为的影响及其可能作用机制。方法:以0、25、50、100μg/L右美托咪定处理的Eca-109细胞分别为对照组和右美托咪定低、中、高浓度组。pcDNA、pcDNA-LINC00982分别转染至Eca-109细胞,作为pcDNA和pcDNA-LINC00982组;si-NC、si-LINC00982分别转染至Eca-109细胞后加入100μg/L右美托咪定处理24 h,作为右美托咪定+si-NC组和右美托咪定+si-LINC00982组。分别应用CCK-8法、流式细胞术、平板克隆形成实验、划痕和Transwell实验检测各组细胞增殖、凋亡、克隆形成、迁移及侵袭情况;采用Western blot检测各组细胞Bax、E-cadherin、Bcl-2和N-cadherin蛋白的表达。采用qRT-PCR检测各组细胞LINC00982的表达。结果:与对照组比较,右美托咪定低、中、高浓度组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白以及LINC00982表达水平升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平降低(P均<0.05);与pcDNA组比较,pcDNA-LINC00982组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平降低(P均<0.05);与右美托咪定+si-NC组比较,右美托咪定+si-LINC00982组Eca-109细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax、E-cadherin蛋白表达水平降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,划痕愈合率和Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平升高(P均<0.05)。结论:右美托咪定可能通过上调LINC00982的表达而抑制食管癌细胞增殖、迁移及侵袭,并促进细胞凋亡。

ATP/P2X7轴介导的K^(+)外排促进NDV感染的ECA109细胞中NLRP3炎性小体激活

目的探究新城疫病毒(NDV)感染食管癌ECA109细胞后,NLRP3炎性小体是否激活、其激活是否与K^(+)外排有关及ATP/P2X7轴对NLRP3炎性小体激活的影响。方法Western blot检测NLRP3和IL-1β表达情况;ELISA检测上清液中IL-1β含量;荧光免疫技术检测ASC斑点的形成情况;荧光探针技术检测细胞内K^(+)浓度变化;使用ATP酶、ATP及P2X7受体抑制剂进行干预,研究其在NLRP3炎性小体激活中的作用。结果与control组比较,NDV F3感染细胞后,细胞内NLRP3、IL-1β和ASC蛋白表达上调;胞内钾离子浓度随感染时间延长而降低(P<0.05)。P2X7受体抑制剂干预后,胞内K^(+)外流受阻,随抑制剂浓度的增加,K^(+)外流在10 mol/L处受最大抑制(P<0.05)。ATP酶及ATP干预结果显示,ATP酶抑制K^(+)外流,ATP促进K^(+)外流。Western blot结果显示,与control组比较,抑制P2X7受体,NLRP3和IL-1β蛋白表达下调;ATP酶干预细胞后,NLRP3和IL-1β表达降低;ATP干预细胞后,NLRP3、IL-1β蛋白表达上调(P<0.05)。结论NDV F3感染ECA109细胞能激活NLRP3炎性小体,其机制可能与ATP/P2X7轴有关。

β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109的抑制作用

目的探究β-榄香铜酸对人食管癌细胞Eca-109增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制。方法使用不同浓度的β-榄香铜酸(0、20、40、60μmol/L)处理Eca-109细胞,首先进行MTT、平板克隆、细胞划痕、transwell迁移、transwell侵袭实验检测β-榄香铜酸对Eca-109的细胞增殖、迁移、侵袭的影响;之后在60μmol/L浓度组使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预探索其作用机制。使用试剂盒检测Eca-109细胞中Fe^(2+)、ROS、lipid ROS、GSH、MDA含量,使用Western blot实验检测Eca-109细胞中GPX4、PTGS2和4-HNE的蛋白表达。结果β-榄香铜酸可呈剂量依赖性抑制Eca-109的细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭,激活Eca-109中铁死亡通路蛋白PTGS2和4-HNE,导致GPX4失活,出现铁依赖性的脂质过氧化。Ferrostatin-1可抑制整个进程,从而减少Eca-109细胞的铁死亡。结论β-榄香铜酸可通过铁死亡通路抑制人食管癌细胞Eca-109,有望成为潜在抗食管癌的药物。

芝麻酚通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路调控食管鳞状细胞癌Eca109细胞的自噬和凋亡

目的:探讨芝麻酚(SEM)通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子1(SIRT1)/核因子κB(NF-κB)通路影响食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞自噬和凋亡的机制。方法:用不同浓度的SEM(0、1.5625、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)分别处理Eca109细胞、人食管上皮细胞HEEpiC 48 h,CCK-8法检测细胞增殖率,筛选适宜的SEM浓度用于后续实验。将Eca109细胞分为对照组(CK组,0μmol/L)、低剂量SEM组(SEM-L组,25μmol/L)、中剂量SEM组(SEM-M组,50μmol/L)、高剂量SEM组(SEM-H组,100μmol/L)、高剂量SEM+Compound C(AMPK抑制剂)组(SEM-H+Compound C组,100μmol/L+10μmol/L),所有各组Eca109细胞在对应的药物浓度下处理48 h后,CCK-8法检测Eca109细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察Eca109细胞内自噬小体,WB法检测Eca109细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、p-AMPK、SIRT1、p-NF-κB p65的表达。结果:通过预实验选择SEM实验浓度为25、50、100μmol/L用于正式研究。在SEM处理下,与CK组比较,SEM-L组、SEM-M组、SEM-H组Eca109细胞的增殖水平(24、48 h)和Bcl2、p-NF-κB p65蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率和自噬小体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、BAX、p-AMPK、SIRT1蛋白表达显著升高,且呈剂量依赖性(均P<0.05);与SEM-H组比较,SEM-H+Compound C组Eca109细胞增殖水平(24、48 h)和Bcl2、p-NF-κB p65蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和自噬小体数量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、BAX、p-AMPK、SIRT1蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:SEM可能通过激活AMPK/SIRT1信号通路而抑制NF-κB活性来促进Eca109细胞自噬与凋亡。

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

目的探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后，用原位杂交、免疫组织化学及ＲＮＡ、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ、Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、突变型ｐ５３等基因的表达，增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达。结论８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长。

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法测定0g/L、2g/L、4g/L、8g/L、16g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24h、48h、72h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16g/L仙鹤草水提液作用72h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示16g/L仙鹤草水提液作用48h和72h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16g/L仙鹤草水提液作用72h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调。结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关。

丹皮酚体内外抗人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的研究丹皮酚(paeonol,Pae)在体内外对人食管癌细胞Eca-109的抑瘤作用及其对细胞凋亡的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)体外试验法和灌胃给药体内抗肿瘤试验。光镜及电镜观察各组的肿瘤组织的形态学变化。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定细胞凋亡指数。结果丹皮酚在体外对Eca-109细胞有明显的细胞毒作用,半数抑制浓度(IC50)为0.342mmol·L-1;体内灌胃给予丹皮酚25、50、100和200mg·kg-1对裸鼠移植人食管癌Eca-109的抑制率分别为10.67%、23.54%、27.91%和34.46%;顺铂5mg·kg-1组抑瘤率为58.71%;丹皮酚在100mg·kg-1剂量下与顺铂5mg·kg-1联合用药抑制率为77.91%。光镜下用药组可见较多凋亡的肿瘤细胞。透射电镜下可见肿瘤细胞核染色质浓缩边聚、胞质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。用药组凋亡指数较对照组明显增加。结论丹皮酚在体内外具有抑制人食管癌Eca-109细胞增殖及诱导其凋亡作用。

香加皮三萜类化合物抑制食管癌Eca109细胞裸鼠成瘤及其机制

目的:研究香加皮三萜类化合物(triterpenes compounde xtracted from cortex periplocae,TCCP)对荧光素酶(luciferase)标记的人食管鳞癌细胞株Eca109(Eca109-luc细胞)在裸鼠体内成瘤的作用及其机制。方法:Eca109-luc细胞经皮下接种裸鼠,构建Eca109-luc细胞裸鼠移植瘤模型,观察TCPP治疗后移植瘤体积和质量的变化,应用活体成像系统观察移植瘤生长情况,H-E染色观察移植瘤组织形态学变化,流式细胞仪检测移植瘤细胞的凋亡,Westernblotting检测移植瘤组织中survivin的表达。结果:TCPP在体内能明显抑制裸鼠Eca109-luc移植瘤的生长,移植瘤体积和质量明显减少,抑瘤率为40.7%。TCPP治疗组小鼠移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润及肿瘤细胞坏死,移植瘤细胞的凋亡率明显高于大豆油对照组(P<0.05),移植瘤组织中survivin蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:TCCP在体内能抑制人食管癌Eca109细胞的生长,其作用机制可能与下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。

戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的机制研究

目的探讨特异选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡及其作用机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布；电子显微镜进一步检测细胞凋亡；采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定Eca109细胞的LDH含量；流式细胞术检测p-p38MAPK及凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果戊地昔布（25—400μmol·L^-1）可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡，凋亡率由（2．95±0．83）％增力口到（48．46±0．73）％；50—400μmol·L^-1时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低，G0／G1期的细胞比例增加；同时，流式细胞术显示，25μmol·L^-1戊地昔布即可上调人食管癌Eca109细胞p-p38MAPK蛋白的表达，并随剂量的增加而增强；50—400μmol·L^-1的戊地昔布可上调Eca109细胞Fas及FasL的表达。结论戊地昔布可诱导人Eca109细胞凋亡，其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK／Fas、FasL途径实现的。

RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响

目的探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制。方法设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响。结果Si Grp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P<0.05);Si Grp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中。

CHFR基因CpG岛甲基化对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究CHFR基因启动子甲基化状态与食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别用不同浓度(2、5、10μmol/L)5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Eca109细胞,未经药物处理的细胞为对照组。甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测CHRF基因CpG岛的甲基化状态,RT-PCR检测CHFR mRNA的表达情况,MTT法及流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖及凋亡的影响。结果:对照组Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,5-Aza-CdR处理后CHFR CpG岛可发生不同程度的剂量依赖性的去甲基化。对照组Eca109细胞无CHFR mRNA表达,5-Aza-CdR处理组(2、5、10μmol/L)CHFR mRNA相对表达量显著增加(0.174±0.010、0.221±0.013、0.356±0.014)。不同浓度5-Aza-CdR处理后,Eca109细胞增殖受到抑制[作用72 h时的抑制率分别为(30.87±0.74)%、(44.60±0.79)%、(56.67±0.35)%],细胞凋亡显著增加[(7.46±1.46)%、(16.27±1.61)%、(25.29±2.25)%vs(1.83±0.41)%,P<0.01]。结论:食管癌Eca109细胞经5-Aza-CdR处理后,CHFR基因CpG岛发生部分去甲基化,出现CHFRmRNA表达,并抑制Eca109细胞增殖和促进细胞凋亡。

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞周期及凋亡的影响

目的 :观察 8 Br cAMP和槲皮素 (quercetin)对Eca 10 9细胞周期及凋亡的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。 3组在同等条件下继续培养 4 8h。采用流式细胞仪检测细胞的周期 ,采用TUNEL法检测细胞凋亡百分率 ,采用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA降解情况。结果 :2实验组细胞中G2 M期细胞比例较对照组显著上升 (P <0 .0 1)。细胞凋亡百分率 :2实验组显著高于对照组 (P <0 .0 1) ;Br组和Q组相比 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。DNA琼脂糖凝胶电泳中Br组和Q组皆呈DNA“梯样型”带 ,对照组未呈现DNA降解。结论 :8 Br cAMP和槲皮素皆可阻滞Eca 10 9细胞于G2 M期 ,并进一步诱导Eca 10 9细胞凋亡。

IL-27基因修饰Eca109细胞的体外体内凋亡作用的研究

目的研究IL-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在体外和体内对细胞凋亡的影响,从而探讨其抗肿瘤作用及其机制。方法基因转染的方法建立稳定表达IL-27基因的人食管癌细胞株(Eca109/IL-27),观察Eca109/IL-27细胞生长情况、移植瘤的生长情况及生存期,用流式细胞技术检测体外和体内的细胞凋亡率和Fas的表达,采用Western blot检测Survivin的表达。结果成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有mIL-27p28和EBI3亚基基因表达,而Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P<0.01),IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长和细胞凋亡,Fas和Survivin的表达无变化(P>0.05);但体内Eca109/IL-27移植瘤生长较Eca109和Eca109/LXSN滞后,生存时间延长(P<0.05),肿瘤组织细胞凋亡率增高(P<0.05),细胞表面Fas的表达增加(P<0.05),Survivin表达降低(P<0.05)。结论IL-27在体外不影响细胞凋亡,体内可能通过降低Survivin的表达,上调Fas的表达,诱导细胞凋亡产生抗肿瘤作用。