启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散,每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液,用旋转蒸发仪浓缩药液,浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取,获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/ml的启膈散提取物共培养,MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度(IC35)、50%抑制浓度(IC50)和70%抑制浓度(IC70)的启膈散提取物共培养,采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率与启膈散提取物浓度拟合曲线方程为Y=-1.835×10^(-5)X2+0.006X+0.185,R2=0.996,概率法计算IC35为22.8μg/ml,IC50为81.8μg/ml,IC70为162.2μg/ml。显微镜下观察,随着启膈散提取物浓度的增加,细胞变圆、变小,贴壁细胞数目逐渐减少,细胞间隙增大,细胞碎片增多。IC35、IC50和IC70启膈散提取物对Eca9706细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)。激光共聚焦显微镜下显示,启膈散提取物作用于Eca9706细胞后,部分细胞膜呈绿色,提示早期凋亡;部分细胞膜呈绿色,且细胞核呈红色,细胞体积变小、变圆,形成凋亡小体,提示晚期凋亡细胞。结论启膈散乙酸乙酯提取物可抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。

大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706增殖及凋亡基因表达的影响分析

目的研究分析大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增殖及对凋亡基因表达的影响。方法不同浓度的大蒜素前药分为A1组(10μg/mL)、A2组(20μg/mL)、A3组(40μg/mL)、A4组(生理盐水,0μg/mL)共4组,分别作用于食管癌细胞Eca9706,在培养1、2、3 d后,用MTT比色法(噻唑蓝)检测细胞增殖情况,实时荧光定量(RT-PCR法)检测4组细胞p53基因在mRNA水平表达情况。结果大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增值抑制的最佳浓度为20μg/mL,最佳抑制时间为2 d,其对食管癌细胞Eca9706基因水平的抑制呈剂量依赖性。结论大蒜素前药可以有效抑制食管癌细胞Eca9706的增值,通过对凋亡相关基因的调控可以控制食管癌细胞增殖,从而达到消除肿瘤细胞的目的。

敲除DNA聚合酶β基因的人食管癌Eca9706细胞系的建立及其细胞生物学特性分析

目的：建立敲除DNA聚合酶β（ DNA polβ）基因的人食管癌Eca 9706细胞株，观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法：采用同源重组基因敲除方法，首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体，并将其导入Eca9706细胞，构建DNA polβ基因敲除细胞株。 PCR、RT-PCR、Western blot法检测DNA polβ基因敲除区段DNA存在及表达情况。流式细胞术和MTT法检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度。结果：筛选得到具有neo抗性的DNA polβ基因敲除Eca9706细胞，其基因组中DNA polβ基因区段已被敲除；RT-PCR和Western blot 检测不到DNA polβmRNA和蛋白表达。敲除DNA polβ基因的细胞生长速度缓慢，G2～M期细胞增多，S期细胞减少（ t＝3．882、3.869，P均＜0．05）。结论：成功构建了食管癌Eca9706 DNA polβ基因敲除细胞模型。

食管癌Eca9706细胞中KRT19基因的甲基化及表达

背景与目的:KRT19基因位于17q21.2,编码CK19蛋白。KRT19基因启动子的甲基化在肾癌、神经母细胞瘤中已有报道,而在食管癌中鲜见相关报道。本文研究甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对食管癌Eca9706细胞株生长活性的影响,并探讨5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞株KRT19基因甲基化及其表达的影响。方法:用MTT比色法检测不同浓度5-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞的生长活性;用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bi sulfite restriction analysis,C0BRA)检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的的KRT19基因甲基化状态;用Western blot法检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的KRT19基因蛋白的表达情况。结果:5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞系的增殖有抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;食管癌Eca9706细胞株存在KRT19基因启动子区的甲基化;对照组无KRT19蛋白的表达,应用5-Aza-CdR后可以恢复其蛋白表达。结论:5-Aza-CdR抑制食管癌Eca9706细胞的增殖;5-Aza-CdR可以逆转KRT19基因启动子区的甲基化,恢复其蛋白表达,KRT19基因启动子区的甲基化可能是其失表达的重要机制。这为食管癌诊疗提供了一个新的靶点。

食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建

目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β(DNA polβ)基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物(UP1/UP2和DOWN1/DOWN2),通过PCR扩增获得上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN),其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN)2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。

艾克清胶囊体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察艾克清胶囊对人肺腺癌细胞(A549)、食管癌细胞(Eca9706)增殖的抑制作用。方法:采用A549细胞及Eca9706细胞为实验对象,用四氮唑(MTT)法检测二者的生存率,用公式计算细胞抑制率,在倒置显微镜下观察二者的细胞形态学改变。结果:①艾克清胶囊能显著抑制A549细胞及Eca9706细胞的增殖,并且有显著的量效关系。②艾克清胶囊低剂量对A549细胞的增殖抑制与对照组相比有一定的抑制作用,但无统计学意义,其对细胞的形态学有一定的影响;在低剂量下,Eca9706细胞增殖速度较快;③艾克清胶囊高剂量能显著影响A549细胞的形态,有直接杀死此两种肿瘤细胞的作用。结论:艾克清胶囊对A549细胞及Eca9706细胞的增殖有明显的抑制作用。抑制机制可能是通过影响细胞的增殖周期或促进了细胞的死亡。

白术内酯对IEC-6细胞及食管癌细胞ECA9706增殖能力的影响

目的:观察白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对IEC-6细胞及食管癌细胞ECA9706增殖能力的影响。方法:细胞种植于96孔板,24h后分别加入白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ200、100、50、25、12.5、6.25μg/m L,放置培养箱48h后,MTT法检测白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不同剂量对IEC-6细胞及ECA9706细胞增殖能力的影响。结果:白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ随着剂量的增加,呈现从增殖到抑制的作用,其中以白术内酯Ⅰ50μg/m L对IEC-6细胞增殖率效果最佳,白术内酯Ⅱ小剂量对IEC-6细胞作用不明显,但是随着剂量的增加,呈现抑制作用;白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ200、100、50μg/m L均能抑制ECA9706细胞的增殖,其中以白术内酯Ⅱ效果明显。结论:白术内酯Ⅰ可能是白术健脾的有效成分,而白术内酯Ⅱ可能是抑制肿瘤细胞增殖的主要成分之一。

甘草次酸对人食管癌Eca9706细胞生长的抑制作用及机制

目的：研究甘草次酸对人食管癌细胞生长的抑制作用及对细胞凋亡的影响。方法：Eca9706细胞接种于96孔板，每孔10^4个细胞／100μL，培养24h贴壁，分别加入含不同浓度甘草次酸的培养液100μL，质量浓度分别为95，114，138，166，200mg·L^-1，另设对照孔（加培养液100μL和与溶解药物等量的DMSO），每组设8个复孔。细胞培养48h，MTT法检测甘草次酸对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制，用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。结果：在95-200mg·L^-1质量浓度甘草次酸能有效抑制Eca9706细胞增殖，且呈剂量依赖性，（P〈0.05）。83，108，133mg·L^-1的甘草次酸作用Eca9706细胞48h，细胞凋亡率明显增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0.01）。激光共聚焦显微镜下对照组细胞膜绿色荧光，以早期凋亡为主，甘草次酸高、低剂量组细胞膜绿色荧光、核红色荧光较多，既有早期凋亡，义有晚期凋亡。结论：甘草次酸可能通过诱导细胞凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。

人参皂苷Rg3通过干预细胞周期和诱导凋亡影响人食管癌Eca9706细胞生长

目的：研究人参皂苷Rg3对人食管癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法：MTT法检测人参皂苷Rg3对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪分别检测细胞周期和凋亡情况。结果：在25~200μg/ml范围内,不同浓度人参皂苷Rg3能抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性。53μg/ml、86μg/ml、141μg/ml人参皂苷作用Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例明显增多,细胞凋亡率明显增加。结论：人参皂苷Rg3可能通过干预细胞周期和凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。

用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞增殖的抑制作用

目的：研究六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞增殖的影响。方法：MTT法检测六君子乙酸乙酯部位对食管癌Eca9706细胞株生长抑制作用,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡小体。结果：在6.25~200μg/ml范围内,不同浓度六君子乙酸乙酯部位能有效抑制Eca9706细胞增殖。用27.66μg/ml、93.00μg/ml、133.70μg/ml的六君子乙酸乙酯部位作用Eca9706细胞48小时,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义,并且在激光共聚焦显微镜下观察到凋亡小体。结论：六君子乙酸乙酯部位能显著抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制有待进一步研究。

旋覆归连方对ECa9706细胞致瘤裸鼠组织形态及蛋白表达的影响

目的观察旋覆归连方对ECa9706细胞致瘤裸鼠组织形态及蛋白表达的影响。方法制作裸鼠肿瘤模型,观察给药后裸鼠瘤体生长情况,瘤体病理形态变化及对STAT3、P-STAT3蛋白表达的影响。结果旋覆归连方能够抑制肿瘤的生长,促进肿瘤细胞坏死,抑制STAT3、P-STAT3蛋白的表达。结论旋覆归连方醇提液可抑制ECa9706细胞致瘤裸鼠肿瘤的生长,其抑制作用可能与调节STAT3信号通路有关。

旋覆归连方对食管癌ECa9706细胞致瘤裸鼠瘤体形态及血管生成的影响

目的观察旋覆归连方对ECa9706细胞致瘤裸鼠瘤体生长、超微结构及血管生成的影响。方法制作裸鼠肿瘤模型,观察给药后裸鼠瘤体生长情况,瘤体电镜下形态变化及血清IL-6,CD34蛋白表达的影响。结果旋覆归连方能够抑制肿瘤的生长,改变肿瘤细胞形态,抑制IL-6活性及CD34蛋白的表达。结论旋覆归连方可抑制ECa9706细胞致瘤裸鼠肿瘤的生长,其抑制作用可能与抑制炎症因子及抑制血管生成有关。

大豆皂甙Bb对食管癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨大豆皂甙Bb(SSBb)抑制人食管癌细胞Eca-9706生长、诱导凋亡的效应及其机制。方法用噻唑蓝比色法测不同浓度SSBb对Eca-9706细胞生长的抑制率;缺口末端标记法检测Eca-9706细胞的凋亡率;免疫组织化学染色法和免疫印迹法检测人食管癌Eca-9706细胞在SSBb作用下c-met、VEGF、cyclinD1、NF-κB、PTEN、HDAC1、caspase3蛋白表达的变化。结果与对照组相比,SSBb处理的Eca-9706细胞的生长抑制率、凋亡率增加,caspase3、PTEN的免疫反应性和印迹信号增强,cyclinD1、c-met、VEGF、NF-κB、HDAC1的免疫反应性和印迹信号减弱(P<0.01)。结论 SSBb对人食管癌Eca-9706细胞增殖有抑制作用,可降低Eca-9706细胞中的c-met和VEGF恶性标志的过高表达,并通过抑制HDAC1、NF-κB,激活PTEN和caspase3信号传导途径诱导食管癌细胞凋亡。