小干扰RNA抑制ΔNp63α表达对人食管鳞癌细胞生物学特性的影响

目的通过腺相关病毒介导的小干扰RNA(siRNA)抑制人食管鳞癌细胞Eca109中ΔNp63α的表达,观察其对食管鳞癌细胞生物学特性的影响。方法构建H1启动子驱动的表达针对ΔNp63α的siRNA重组腺相关病毒AAV-ΔNp63αshRNA并感染Eca109细胞。同时以感染空腺相关病毒AAV-Null的细胞及不加腺相关病毒的细胞分别作为对照组和空白对照组,观察siRNA干扰ΔNp63α表达在体外及体内对Eca109细胞生长、增殖、致瘤及凋亡的影响。结果与对照组和空白对照组比较,Eca109细胞感染AAV-ΔNp63αshRNA后ΔNp63α蛋白表达下降(P均<0.05),细胞生长速度减慢(P均<0.05),细胞增殖指数(proliferation index,PI)降低(P均<0.01),裸鼠瘤体质量减轻(P均<0.05),细胞凋亡增加(P均<0.05)。结论腺相关病毒介导的siRNA干扰能显著抑制Eca109细胞ΔNp63α的表达,减慢肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。方法采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果。结果宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加,Eca109G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞明显减少(P<0.05);经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高(P<0.01);经宝藿苷Ⅰ(15mg/kg)治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01),生长抑制率达(60.9±0.16)%。结论香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关。

通莲Ⅰ号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究通莲Ⅰ号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。方法:将Eca109细胞以1×106个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10%小牛血清DMEM培养液培养,37℃,5%饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～3 200 mg.L-1倍比梯度的通莲Ⅰ号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。结果:T,Q,H的IC50值分别为386,771,729 mg.L-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。结论:通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞株裸鼠成瘤的影响

自噬是一个进化上保守的溶酶体降解途径,激活自噬可以降解有缺陷的细胞器而发挥抑制肿瘤的作用,Beclin 1是关键的自噬和肿瘤抑制基因。该研究检测了Beclin 1蛋白在食管癌组织中的表达情况,构建Beclin 1的重组质粒并转染人食管癌Eca109细胞株。分别以电子显微镜观察自噬体的形成和Eca109细胞的自噬性死亡情况,RT-PCR检测Beclin 1基因的mRNA表达,Westernblot法检测Beclin 1及Bcl-2、P53的表达水平,裸鼠成瘤实验检测Beclin 1基因对Eca109细胞体内增殖的影响。结果显示,Beclin 1蛋白在食管癌组织中相对于癌旁正常食管组织低表达(P<0.05);成功构建了Beclin 1重组质粒并将其转染到Eca109细胞中,电子显微镜观察到自噬体形成,RT-PCR和Western blot显示Beclin 1基因过表达。升高Beclin 1蛋白的表达水平能降低Bcl-2表达和上调P53蛋白,使Eca109细胞的体内致瘤性减弱。过表达Beclin 1基因对食管癌有很好的抑制作用,这将为食管癌的靶向治疗奠定基础。