Ⅱ型限制性内切酶EcoR Ⅰ中非特异性核酸内切酶杂质测试技术研究

非特异性核酸内切酶杂质是影响II型限制性内切酶质量的重要因素,该文以EcoR I为例对II型限制性内切酶中非特异性核酸内切酶杂质进行了测试方法研究,以ΦX174 RF I型DNA作为底物,结果显示90U EcoR I中未检出非特异性核酸内切酶杂质,并对测试方法进行了方法学考察,显示该方法的重复性、稳定性佳,90U EcoR I可检测到0.1 U的Pst I。

胃癌患者L-myc基因的EcoR Ⅰ多态性

L-myc是一个核癌基因，它在癌生成的晚期被激活。有记录表明L-myc基因的EcoRⅠ多态性与个体对恶性肿瘤的易感性有关。一些研究提示癌症患者出现S等位基因和转移危险性较高相关。尽管已有很多研究，但是此情况是否见于胃癌仍不清楚。我们研究的目的是明确白人中L-myc多态性是否与胃癌的易感性相关，并且就癌组织学、分期和位置以及患者的年龄及性别评价胃癌患者中S等位基因的存在。我们研究100名胃癌患者和65a健康人。

家蚕线粒体基因组EcoRⅠ2.0kb片段的克隆及序列分析

对家蚕线粒体基因组EcoRⅠ 2 .0kb片段进行了克隆和序列分析 ,结果表明该片段包含完整的丝氨酸转移RNA基因、NADH氧化还原酶亚基Ⅰ基因、细胞色素氧化酶b亚基基因的部分序列。与果蝇 (Drosophilamelanogaster)的mtDNA进行了同源性比较 ,并根据无脊椎动物线粒体基因组密码子表 ,推定氨基酸序列。

灰斑古毒蛾核型多角体病毒EcoRⅠ-U片段的克隆与序列分析

【目的】分析灰斑古毒蛾核型多角体病毒（Orgyia ericae nucleopolyhedrovirus，OrerNPV）EcoRⅠ-U片段分子生物学特征，为研究其分子特性及其在OrerNPV感染周期中的功能提供科学依据。【方法】克隆、分析OrerNPV EcoRⅠ-U片段所包含的若干基因，并应用生物软件对OrerNPV泛素基因（Ubi基因）进行了进化分析。【结果】OrerNPV EcoRⅠ-U片段包含Ubi基因、AcORF34同源基因和39K基因部分序列，在该区域中编码Ubi基因的开放阅读框（ORF）由246个核苷酸组成，可以编码81个氨基酸，预汁蛋白质分子质量为8．9ku。OrerNPV Ubi基因与苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）、家蚕核型多角体病毒（BmNPV）、薄荷灰夜蛾核型多角体病毒（RaouM-NPV）的同源性最高，均达92％，与小菜蛾颗粒体病毒（Plutella xylostella granulovirus，PxGV）的同源性最低，为62％。OrerNPV与AcMNPV、BmNPV和RaouMNPV的亲源关系最近。EcoR Ⅰ-U片段＋M13端含有编码39K基因（pp31）的部分序列，该多肽与10种NPV的39K序列有48％～52％的同源性。【结论】明确了OrerNPV EcoRⅠ-U片段的序列特征及OrerNPV Ubi在泛素蛋白家族中的进化关系。

限制性内切酶KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切条件的优化

目的探讨KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的优化条件。方法 KpnⅠ和EcoRⅠ不同的酶切体系,酶切含有上述两种限制性内切酶酶切位点的载体pEGFP-Ano2,DNA琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果,以获取KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的优化条件。结果 50μL酶切体系,KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切的适宜条件:首先在1×L缓冲液情况下,应用1μL KpnⅠ酶切1μg质粒1 h,再加入1×H缓冲液和0.01%BSA,应用1μL EcoRⅠ继续酶切1 h。结论获取KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切质粒的适宜条件,为今后应用KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切实验提供科学的参考依据。

16S rRNA基因及外膜蛋白基因分析在鸭疫里默氏菌鉴定中的应用

本实验对鸭疫里默氏菌(包括6个血清型)、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌进行了16S rRNA基因片段的扩增和测序,并将测序结果进行了同源性比较和酶切分析；同时根据标准血清2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白的基因序列设计一对引物进行扩增。根据16S rRNA的测序结果及EcoRⅠ和HaeⅢ酶切片段分析,可将鸭疫里默氏菌与其它临床症状易混淆的细菌感染相区别,而外膜蛋白基因序列的特异性也为鸭疫里默氏菌的鉴别诊断提供了一种快速、准确的PCR鉴定方法。

汉族人载脂蛋白B基因EcoRⅠ MspⅠ多态性与冠心病的关系研究

目的 探讨我国北方地区汉族人载脂蛋白B(apoB)基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性与冠心病的关系。方法 应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,检测了 12 0名对照组和 137例冠心病组apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性基因型和等位基因频率分布。研究了apoB基因多态性对血脂、脂蛋白和载脂蛋白水平的影响。结果 冠心病组与对照组apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性基因型和等位基因频率分布差异无显著性 ,且与性别、家族史、吸烟史、体重指数及冠脉病变程度无明显关系。两组间罕见的E -和M -等位基因存在连锁不平衡。冠心病组中E -等位基因携带者血清血清总胆固醇 (TC)、低密度脂蛋白 (LDL C)明显高于仅含E +等位基因者。M -等位基因与各项血脂水平无明显相关性。结论 apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性对人群血脂水平有一定影响 ,但不是我国北方地区汉族人冠心病发生的独立危险因素。

区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法的建立

根据GenBank登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白(NS)基因特征,本研究设计1对特异性引物对GPV和MDPV基因组DNA进行PCR扩增,目的片段大小均为810bp,并对PCR产物进行切胶回收。用EcoRⅠ酶对GPV和MDPV特异性胶回收产物进行酶切鉴定,结果显示MDPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段为2段,大小为530和280bp;而GPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变。本研究建立了一种快速区别GPV和MDPV感染的检测方法,可对番鸭感染水禽细小病毒的情况进行快速鉴别诊断。

两种双酶切组合在细鳞鱼AFLP体系中的比较分析

采用Tru9Ⅰ/EcoRⅠ和TaqⅠ/PstⅠ两种限制性内切酶酶切组合对细鳞鱼Brachymystax lenok pallas的遗传多样性进行研究,探索适合其AFLP的双酶切体系。每种双酶切组合体系分别选用20对选择性扩增引物进行扩增。结果表明：采用Tru9Ⅰ/EcoRⅠ组合共扩增出了739个位点,其中多态性位点为336个,每对引物组合扩增的位点为21-45,位点多态性百分比为45.47%,平均Shannon氏指数为0.2739;而采用TaqⅠ/PstⅠ组合共扩增出了759个位点,多态性位点为405个,每对引物组合扩增的位点为29-53,位点多态性百分比为53.36%,平均Shannon氏指数为0.3144。表明,对细鳞鱼进行AFLP分析时,TaqⅠ/PstⅠ的酶切体系呈现出更大的多态性,能提供更多的可供分析研究的数据,更适用于细鳞鱼基因组分析。

基因重组免疫毒素白细胞介素18-PE38融合基因治疗类风湿性关节炎的初步研究

目的 构建白细胞介素18(interleukin18,IL- 18) - PE38融合基因的真核表达载体,并研究其在小鼠软骨细胞及3T3细胞中的表达,探讨类风湿性关节炎的基因治疗方法。 方法 经限制性内切酶双酶切从质粒PRKL4 5 9K- IL18- PE38中获取IL- 18- PE38融合基因,将其与真核表达载体Psec Tag2 B连接,转化感受态菌,挑取单克隆培养并提取质粒,Eco R 单酶切鉴定。脂质体转染法将构建的真核表达载体转染入3T3细胞及小鼠软骨细胞中,分别设置空载体对照,通过荧光免疫细胞化学法鉴定转染后瞬时表达情况。 结果 Eco R 单酶切后电泳鉴定显示,所构建的真核表达载体Psec Tag2 B- IL- 18- PE38片段长度约为6 0 0 0 bp。荧光免疫细胞化学法、荧光显微镜摄片均显示转染融合基因组荧光表达强,空载体对照组荧光表达微弱。 结论 IL- 18- PE38融合基因真核表达载体构建成功,并在小鼠软骨细胞及3T3细胞中表达,为类风湿性关节炎的基因治疗研究奠定基础。

读者·作者·编者

本刊外文书写正斜体的要求生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：EcoRⅠ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

本刊外文书写正斜体的要求

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichia coli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：EcoRⅠ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

本刊外文书写正斜体的要求

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichia coli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：EcoRⅠ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

本刊外文书写正斜体的要求

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：EcoRⅠ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。

本刊外文书写正斜体的要求

生物学中的属名、种名（包括亚种、变种）用拉丁文斜体,属的首字母大写,余用小写,如：Helicobacter pylori,Escherichiacoli。属以上的名称用拉丁文正体。限制性内切酶前3个字母用斜体,后面的字母和编号用正体,如：EcoRⅠ,HindⅢ,XbaⅠ,Sau3AⅠ。耐热DNA聚合酶用斜体表示,首字母大写,如：Taq、Pfu、TthDNA聚合酶。

限制性内切酶EcoRI的分离纯化

以大肠杆菌ＲＹ＿（１３），Ｋ＿（１２１１００）为酶源菌株，采用聚乙烯亚胺分离纯化了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，并对λ－ＤＮＡ有５个专一的切割位点，将λ－ＤＮＡ切割成６个分子量不同的片段，经琼脂糖凝胶电泳后，可得６个迁移位置不同的条带。这些特性使它特别适合于作为ＤＮＡ结构功能等方面研究的工具酶。在遗传工程研究中，限制酶更起了决定性作用。

重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。