鸡堆型艾美耳球虫新基因的克隆与生物信息学分析

试验旨在对堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊新基因EST序列进行克隆与生物信息学分析。通过RACE技术扩增从E．acervulina cDNA表达文库中筛选获得的EST序列，得到EST全长cDNA序列，利用多种生物信息学分析软件对其编码蛋白进行分析和预测。结果表明，该EST序列为E．acervulina孢子化卵囊阶段新基因，GenBank登录号为EU590120；该基因含1个492 bp的开放阅读框，编码163个氨基酸，理论分子质量为17．049 ku，等电点为6．69，酸性氨基酸8个，碱性氨基酸8个，分子式为C761H1223N199O219S12总平均亲水性（GRAVY）为0．731；该蛋白有信号肽，为分泌性蛋白；具有4个跨膜结构，在105～115、28～32和132～138位之间有很强的疏水性；具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、4个N端豆蔻酰基化位点。因此根据生物信息学全面预测和分析，发现该基因所编码的蛋白具有较多的生物学功能位点和潜在的抗原表位区域。

堆型艾美耳球虫子孢子和鸡十二指肠上皮细胞的共同抗原的研究

以抗堆型艾美耳球虫子孢子的单抗EASP-3G3作为工具,对鸡各段消化道上皮细胞切片和子孢子进行免疫组化染色,并利用蛋白质印迹技术来检测单抗所识别子孢子可溶性抗原的分子量,来确定子孢子和十二指肠上皮细胞之间是否存在共同抗原.结果表明单抗只与十二指肠上皮细胞发生反应,而与其他肠段无染色反应.而且单抗所识别的可溶性抗原分子量为35～48 ku.抗子孢子的单抗同时与十二指肠上皮细胞和子孢子反应,而不与其他肠段反应,证明堆型艾美耳球虫寄生的位点特异性与十二指肠上皮细胞表面的某种抗原分子有内在的关系.