Elafin 表达水平与食管癌切除术患者预后的相关性

目的分析Elafin表达水平与食管癌切除术患者预后的相关性。方法选取2020年1月至2022年1月就诊于我院外科的食管癌患者200例。监测患者人白细胞弹性蛋白酶特异性抑制剂(Elastase specific inhibitors,Elafin)表达水平,并行食管癌切除术。随访1年后根据预后情况分为不良预后组和对照组。比较两组患者临床资料、Elafin表达水平等情况。应用多因素Logistic回归分析Elafin表达水平等因素与食管癌切除术患者预后的相关性。应用ROC曲线分析相关因素预测食管癌切除术患者预后的价值。结果纳入研究的200例患者中有12例病例脱落。剩余188例患者中有41例纳入不良预后组,147例纳入对照组,预后不良发生率为21.81%(41/188)。两组患者年龄、葡萄糖等临床资料对比,差异无统计学意义(P>0.05)。但不良预后组临床分期Ⅲ期、低分化和有淋巴结转移所占的比例均大于对照组(P<0.05),不良预后组Elafin水平低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,临床分期(OR=5.898)、分化程度(OR=3.012)和淋巴结转移(OR=4.876)是影响食管癌切除术患者预后的独立危险因素,Elafin水平(OR=0.117)是影响食管癌切除术患者预后的保护性因素。ROC曲线显示,Elafin水平预测食管癌切除术后预后的诊断效能高于临床分期、分化程度和淋巴结转移,其中Elafin水平的最佳截点为0.49 ng/mL,此时敏感性为92.0%,特异性为80.9%。列线图预测食管癌切除术患者预后不良的一致性指数(C-index)为0.927(95%CI:0.873~0.951)。结论临床分期越高、分化程度越低和有淋巴结转移是影响食管癌切除术患者预后的危险因素,而Elafin表达水平则是保护性因素,早期监测有助于调整治疗方案、改善预后。

Elafin的功能及在肿瘤中的研究进展

Elafin是一种人内源性蛋白,具有抑制弹性蛋白酶的作用。在炎症过程中,它可以抑制中性粒细胞释放的弹性蛋白酶等对机体的过度损伤。既往的文献主要研究了elafin在控制炎症反应、抵抗微生物等方面的影响。近期有研究证明elafin在肿瘤中参与相关信号通路的调控从而介导肿瘤细胞的增殖迁移并影响患者预后。在本综述中,我们分析了癌症和人elafin蛋白之间存在关系的相关证据,并讨论了elafin在肿瘤进展中的潜在作用。本文就elafin的结构、功能及在肿瘤中的作用进行综述。

转染Elafin对百草枯诱导的肺泡上皮凋亡的影响

目的:探讨转染Elafin对百草枯(Paraquat,PQ)诱导的肺泡上皮凋亡的影响及可能机制。方法:电穿孔法转染p EGFP-C1-Elafin进入A549细胞,培养24 h后,RT-PCR检测Elafin mRNA在A549细胞中的表达情况;并给予生理盐水、不同浓度PQ(5、50、100μmol/L)作用后,Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测A549细胞凋亡率、活性氧类物质(Reactive oxygen species,ROS)含量。Western blot检测核因子相关因子2(Nuclear factor erythroid like-2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达情况。结果:转入A549细胞Elafin成功表达。PQ呈浓度依赖性导致A549细胞凋亡;PQ可使ROS含量明显增加,Nrf2、HO-1表达下调。Elafin可抑制PQ诱导的细胞调亡,上调Nrf2、HO-1蛋白表达。结论:Elafin可以一定程度抑制PQ诱导的A549细胞凋亡,其机制可能与其上调抗氧化蛋白Nrf2等有关。

天然内生抗菌多肽elafin真核表达载体的构建及在真核细胞的表达

采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因,通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N 1-elafin,再转染至肺上皮细胞A 549,荧光显微镜观察pEGFP-N 1-elafin在细胞中表达及定位,采用N orthern杂交、EL ISA检测法分别从转录及蛋白质水平分析表达情况,最后通过酶切电泳鉴定证实真核表达载体pEGFP-N 1-elafin构建成功,其转染细胞中有elafin的基因表达,且细胞上清液中elafin含量证实其主要是分泌性表达。E lafin基因cDNA真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值。

Elafin基因重组气道上皮调节脂多糖诱导的人气道黏液高分泌

目的探讨天然内生多肽Elafin对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的调节机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-N1-Elafin,转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,激光共聚焦扫描显微镜检测Elafin蛋白含量,Western blot法检测IκBα蛋白含量;荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NF-κB)活性;RT-PCR检测Elafin和黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平;ELISA法分析MUC5AC蛋白相对含量。结果成功构建内生多肽Elafin真核表达载体pEGFP-N1-Elafin并转染HBE16细胞。转染重组Elafin后Elafin蛋白含量及mRNA水平明显增加。与对照组相比,LPS刺激组IκBα蛋白含量降低,NF-κB相对活性明显增强,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也显著增加。转染重组Elafin后再予以LPS刺激,与单纯LPS刺激组相比,IκBα蛋白含量明显增加,NF-κB相对活性显著降低,MUC5AC蛋白含量及mRNA水平也明显降低。结论天然内生多肽Elafin重组气道上皮可下调NF-κB的活性,降低脂多糖诱导的气道黏液高分泌。

弹性蛋白酶保护因子——Elafin结构基因腺病毒载体穿梭质粒的构建、鉴定及表达

构建能表达弹性蛋白酶保护因子———elafin基因腺病毒表达载体的穿梭质粒,为进一步包装能高效表达结构蛋白的腺病毒载体做准备.以含有elafin基因的真核质粒pEGFP-N1-Elafin为模板,PCR扩增elafin基因,PCR产物以SalⅠ、EcoRⅤ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中CMV启动子下游SalⅠ与EcoRⅤ位点之间,获得重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-Elafin,通过SalⅠ及EcoRⅤ双酶切、PCR及插入片段序列测定对该质粒进行鉴定,将pAdTrack-CMV-Elafin转染293细胞,以RT-PCR及Western-Blot检测其在293细胞中的瞬时表达.结果表明:双酶切、PCR及测序鉴定证实,pAdTrack-CMV-Elafin穿梭质粒的插入片段为elafin基因,用pAdTrack-CMV-Elafin穿梭质粒转染293细胞后可见绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR和Western-blotting表明其可在293细胞中瞬时表达.

弹性蛋白酶特异性抑制因子elafin基因重组腺病毒载体的构建、鉴定与表达

目的:构建elafin基因高效表达重组腺病毒载体Ad-elafin。方法:抽提人肺总RNA进行逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)扩增elafin基因,PCR产物双酶切后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上;在BJ5183细菌内与pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定;PacⅠ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,获得腺病毒载体Ad-elafin;继之在293细胞内扩增,利用报告基因GFP监测病毒滴度和感染效率,Western blot检测elafin蛋白的表达,ELISA鉴定elafin蛋白对弹性蛋白酶活性拮抗作用。结果:酶切、PCR、蛋白表达测定及拮抗弹性蛋白酶活性初步鉴定证实弹性蛋白酶特异性抑制因子elafin基因重组腺病毒载体Ad-elafin构建成功。结论:成功构建了重组腺病毒载体Ad-elafin,为进一步深入研究慢性阻塞性肺疾病的发病机制奠定了技术基础。

核转录因子-κВ在中性粒细胞弹力酶诱导肺A549细胞Elafin表达中的作用

目的 探讨在中性粒细胞弹力酶 (NE)诱导肺上皮细胞表达Elafin过程中核转录因子 κВ(NF κВ)的信号传导作用。方法 肺上皮细胞株A5 4 9传代培养后分 3组行条件孵育 ,分别为正常组、加精制猪胰NE孵育的对照组以及同时加酶和NF κВ抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)孵育的实验组。孵育 2h后的细胞涂片行免疫荧光细胞染色法检测NF κВ的表达 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测孵育 2 4h上清液的Elafin水平。结果 加入NE孵育的细胞上清液中的Elafin和NF κВ的表达强度与空白对照组比较均有显著性差异 (P <0 0 1) ;同时加入NE和PDTC孵育细胞的上述指标与NE组比较也存在显著性差异 (P <0 0 5 )。培养细胞NF κВ的表达强度与上清液中的Elafin呈显著正相关 (r=0 6 6 ,P <0 0 1)。结论 NE诱导肺上皮细胞Elafin表达的作用可能是通过激活NF

血清松弛素、弹性纤维及elafin与女性盆底功能障碍性疾病

盆腔脏器脱垂危险因素主要是支持盆底器官的盆底肌肉组织结构和功能异常。最近有关盆底支持组织的成分和基因改变的研究倍受关注。血清松弛素具有松弛盆腔韧带的作用,盆底支持组织中结缔组织的主要成分是细胞外基质,包括弹性纤维、弹性蛋白等,elafin作为弹性蛋白酶抑制因子,可维持上皮细胞的完整性。弹性纤维的代谢及相关成分的改变会引起组织弹性降低,使盆底支持结构薄弱。本文将弹性血清松弛素、弹性纤维及其相关成分,elafin在盆底功能障碍性疾病发病机制中作用的研究结果做一综述。

转染重组人Elafin基因保护NCI-H292细胞系

目的探讨转染重组人白细胞弹性蛋白酶抑制剂内生多肽(Elafin)基因保护气道上皮的分子机制。方法构建人Elafin重组质粒pEGFP-C1-Elafin,并转染入人气道黏膜上皮细胞系NCI-H292细胞,将其与多形核粒细胞(PMN)共孵育,经脂多糖(LPS)刺激24 h后,用Western blot检测细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1的表达及MTT法测定细胞与胶原的附着能力。结果经LPS刺激后,Western blot及MTT法发现,与对照组和转染重组质粒组相比,转染空载体的NCI-H292细胞中ZO-1的表达及细胞与胶原附着能力均明显降低(P<0.01);而与对照组相比,转染重组质粒的细胞中ZO-1的表达及细胞与胶原附着能力均未见明显下降。结论通过转染重组人Elafin可保护气道上皮,增强气道抵抗炎性损伤能力。

转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用

目的:研究转染重组Elafin对炎症状态下巨噬细胞表面受体CD14的保护作用。方法:重组质粒pEG-FP-C1-Elafin转染入离体培养巨噬细胞株,与多形核中性粒细胞(polymorphonuclear granulocyte,PMN)、脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)共作用4 h后,倒置荧光显微镜观察重组Elafin胞内表达,流式细胞仪检测巨噬细胞表面受体CD14表达情况。同时,转染重组质粒的巨噬细胞与凋亡PMN共孵育1 h后,观测结合凋亡PMN的巨噬细胞百分比。结果:pEGFP-C1-Elafin转染入巨噬细胞后被成功表达,其表面受体CD14数量明显升高,结合凋亡PMN的巨噬细胞的数量的增加。结论:通过转染重组人Elafin,可保护炎症状态下巨噬细胞表面凋亡相关受体CD14,促进PMN凋亡。

Elafin重组腺病毒载体在气道上皮细胞中表达的时相性变化研究

为研究elafin重组腺病毒表达载体Ad～elafin转染气道上皮细胞的特性，探讨其在上皮细胞中表达的时相性变化，运用①应用原代培养技术培养人气道上皮细胞；②Ad—elafin表达载体转染气道上皮细胞；③在转染后不同的时相中，采用荧光显微镜观察报告基因GFP的表达，ELISA法单克隆抗体检测细胞上清液elafin蛋白的表达，Northern膜杂交检测elafin基因mRNA的表达量等方法进行研究．发现：①原代培养人气道上皮细胞约5d即可作为靶细胞。②转染Ad—elafin24h时，荧光显微镜下可见上皮细胞内有少量的GFP表达，随着时间的延长，细胞内荧光逐渐增加，96h时GFP荧光阳性的细胞约为80％。③转染24～96h，实验组细胞上清液elafin的含量高于对照组（p〈0．01）；同时elafinmRNA的水平高于对照组（P〈0．05，0．01），且elafin表达及elafinmRNA水平在一定时间内呈时间依赖性关系。结论：Elafin重组腺病毒表达载体Ad—elafin成功转染人气道上皮细胞，目的基因不仅能在上皮细胞中表达，而且elafin蛋白具有细胞外分泌作用．

中性粒细胞弹性蛋白酶和elafin蛋白与皮肤肿瘤

皮肤肿瘤组织中浸润的中性粒细胞及瘤细胞可以合成、分泌中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂elafin蛋白,共同参与了皮肤肿瘤的分化。中性粒细胞弹性蛋白酶能够促进瘤细胞增殖、扩散及转移,中性粒细胞弹性蛋白酶/ela-fin失衡可能参与了皮肤肿瘤的生长调控。中性粒细胞弹性蛋白酶和elafin在皮肤肿瘤中的作用机制值得深入研究。

Elafin在肿瘤坏死因子-α诱导的炎性反应中的抗炎机制

目的探讨Elafin的抗炎机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE细胞,将已构建好的pEG-FP-N1-Elafin载体转染到细胞中,并以空质粒载体作其对照,以外源性肿瘤坏死因子(TNF)-α作为刺激物共同孵育。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性,ELISA检测细胞上清液中炎性介质(选取IL-1β、IL-8作为代表)的含量,免疫共沉淀法结合Western blot检测小泛素样修饰蛋白(SU-MO)-1-p-IκBα含量。结果重组质粒组的细胞中NF-κB的活性和IL-1β、IL-8的生成量与空质粒载体组细胞相比明显降低,而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著升高(P<0.01)。结论Elafin能够通过促进IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,下调前炎性介质的生成,从而发挥其抗炎作用。

Elafin在人支气管上皮细胞系16HBE胞质内对黏蛋白5AC生成的影响

目的探讨Elafin在胞质内对表皮生长因子(EGF)诱导的黏蛋白(MUC)5AC生成的影响及其作用机制。方法体外培养人支气管上皮细胞系16HBE,将已构建好的pEGFP-N1-Elafin载体通过LipofectamineTM2000转染到16HBE细胞中,以转染空质粒载体的16HBE细胞作为对照,均给予外源性EGF作为刺激物共同孵育。以RT-PCR和ELISA分别检测细胞内黏蛋白(MUC)5AC mRNA水平和MUC5AC含量。间接免疫荧光细胞化学法结合激光共聚焦显微镜检测细胞核中核因子(NF)-κB的活性。免疫共沉淀法结合Western blot检测SUMO-1-p-IκBα含量。结果转染重组质粒的细胞中MUC5ACmRNA水平、MUC5AC的含量(0.36±0.09)以及NF-κB的活性显著低于转染空载体的对照组细胞(MUC5AC的含量0.55±0.07)(P<0.01),而SUMO-1-p-IκBα的含量则显著高于后者(P<0.01)。结论 Elafin能够通过促进p-IκBα的类泛素化阻止NF-κB的活化,从而下调MUC5AC的生成。

COPD患者气道中性粒细胞弹力酶活性与肺组织Elafin表达的关系及意义

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者气道中性粒细胞弹力酶与肺组织 Elafin表达的关系及意义。方法 通过底物检测法、EL ISA法及 Dot- Blot印迹杂交分别检测正常肺组织和 COPD患者肺组织支气管肺泡灌洗液 (BAL F)中性粒细胞弹力酶 (NE)活力、Elafin含量及肺组织 Elafin m RNA水平。结果 COPD组 BAL F中 NE活力单位与正常组相比较明显增高 (P<0 .0 5 ) ,COPD组 Elafin m RNA与正常组相比较亦见明显增高 (P<0 .0 1) ,NE活力单位与 Elafin m RNA呈显著正相关 (r=0 .6 1,P<0 .0 5 )。但 COPD组 BAL F中 Elafin含量与正常组相比并未见明显升高 (P>0 .0 5 )。结论 NE可引起 COPD患者肺组织中 Elafin转录水平增加 ,由于 NE可与游离的 Elafin结合 ,这种消耗使得 BAL F中 Elafin蛋白水平未见明显提高。

重组人Elafin对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨重组人Elafin对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,给予不同浓度的重组人Elafin对其进行治疗,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)含量,并对肝脏病理组织学改变进行观察。结果缺血再灌注后大鼠肝组织损害较重,血清ALT、AST及LDH水平明显升高(P<0.001),若手术前给予大鼠一定浓度的重组人Elafin可对肝脏缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。结论重组人Elafin对肝脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

Elafin真核表达载体的构建及其对气道粘液高分泌的调节

目的:构建天然内生多肽Elafin真核表达载体,探讨其对气道粘液高分泌的影响。方法:抽提Elafin行RT-PCR获取Elafin cDNA,双酶切后将片段装载到pMD18-T载体上。以pMD18-T-Elafin为模板行PCR反应,产物胶回收并双酶切后定向克隆至pEGFP-N1上,转化,筛选,双酶切鉴定重组质粒。将pEGFP-N1-Elafin转染正常人支气管上皮细胞HBE16,给予脂多糖(LPS)刺激,Western blot检测细胞内Elafin蛋白的相对含量,RT-PCR检测各组Elafin mRNA和粘蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平,荧光素酶报告基因检测系统测定核转录因子-κB(NFκ-B)的活性;ELISA法分析各组细胞MUC5AC蛋白的相对含量。结果:成功构建Elafin真核表达载体,转染重组Elafin的HBE16细胞成功表达Elafin蛋白。LPS刺激可增强NF-κB的活性,该活性在转染重组Elafin后显著降低;MUC5AC蛋白含量及mRNA水平在LPS刺激后也显著升高,在转染重组Elafin后二者的表达水平明显降低。结论:Elafin真核表达载体成功构建,初步发现Elafin可通过降低NFκ-B的活性来下调MUC5AC的表达,为进一步深入研究其对气道粘液高分泌的调节机制奠定了基础。

重组人Elafin对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨重组人Elafin在大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的保护作用。方法将50只大鼠随机均分为5组,即正常对照组、肝脏缺血-再灌注损伤模型组以及Elafin低、中、高剂量组。对Elafin低、中、高剂量组给予不同浓度的重组人Elafin进行治疗,然后取血液及肝脏标本,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)水平,测定肝组织中髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮(NO)含量,并观察肝脏的病理组织学改变。结果缺血-再灌注后大鼠肝组织损害较重,血清ALT和AST以及LDH水平明显升高(P<0.001),肝组织中MPO和NO含量明显升高(P<0.001);若手术前给予大鼠一定浓度的重组人Elafin,可使ALT,AST,LDH,MPO及NO水平明显降低(P<0.05)。结论重组人Elafin对肝脏缺血-再灌注损伤有一定的保护作用。

天然抗菌多肽elafin重组腺病毒载体构建及气道上皮细胞表达

目的构建天然抗菌多肽elafin基因高效表达载体——重组腺病毒载体,并探讨其在肺上皮细胞中的初步表达。方法提取人肺总RNA,进行elafin基因逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)扩增,PCR产物双酶切后亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上;在BJ5183细菌内和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,PacⅠ酶切线性化后脂质体法转染293细胞进行包装,获得腺病毒载体Ad-elafin;继之在293细胞内扩增,利用报告基因荧光蛋白(GFP)监测病毒滴度和感染效率;重组腺病毒Ad-elafin转染原代培养的气道上皮细胞,24h后荧光显微镜观察GFP表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测培养上清液中elafin的含量。结果测序、酶切及PCR证实天然抗菌多肽elafin基因重组腺病毒载体Ad-elafin构建成功,同时转染气道上皮细胞24h后荧光显微镜可见GFP的表达,且转染组细胞上清液中elafin测定值为(2.4±0.4)ng/ml与对照组(1.9±0.3)ng/ml相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论elafin基因重组腺病毒载体成功构建,有利于elafin生物特性的研究。