Embelin逆转白血病耐药细胞株K562/D对柔红霉素的耐药性

目的证明酸藤子酚(embelin)可以逆转白血病耐药细胞株K562/D对柔红霉素(DNR)的耐药性。方法应用MTT法求出embelin作用于K562/D24h后的IC10以及K562/D对DNR的耐药指数和逆转倍数;应用annexinⅤFITC/PI复染流式细胞仪检测细胞凋亡;应用JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψm)。结果K562/D细胞对DNR耐药,耐药指数为7.72;小剂量embelin(5μg/ml)可以逆转K562/D细胞对DNR耐药性,逆转倍数为7.46;embelin(5μg/ml)与DNR(0.1μg/ml)联合作用于K562/D细胞6h后△Ψm即出现明显去极化,细胞凋亡率呈时间依赖性升高,与对照组比较有统计学差异。结论embelin可以通过促进细胞凋亡逆转K562/D对DNR的耐药性,并且在凋亡早期△Ψm已经出现明显去极化,说明凋亡不可逆转。

Embelin对大肠癌细胞株SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的研究Embelin对大肠癌细胞株SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法 SW480细胞在一系列浓度Embelin处理48 h以后,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞仪分别定量测定细胞增殖抑制率和凋亡率,Western blot检测Cyclin D1、survivin和XIAP的表达水平。结果 Embelin可显著抑制SW480的细胞增殖和诱导凋亡,其作用呈浓度依赖性,作用48 h时半数抑制浓度(IC50)为37.02μM;20μM时细胞凋亡率为(15.3±2.5)%,与40μM时和80μM时细胞凋亡率相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。但相同浓度的Embelin作用时,细胞的凋亡率低于增殖抑制率。增殖抑制作用可能与下调Cyclin D1蛋白的表达有关。结论 Embelin可显著抑制SW480的细胞增殖和诱导细胞凋亡,并可作为一个潜在的具有抗肿瘤活性的化学药物。

Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素耐药与P-gp及MDR1 mRNA无关

目的:探讨XIAP抑制剂Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的机制以及与P-gp及MDR1 mRNA的关系。方法:应用MTT法检测不同浓度DNR及联合Embelin对K562及K562/D细胞增殖抑制情况的影响;应用Annexin V-FITC/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用Western blot方法检测XIAP、Caspase-3、P-gp、BCL-2及BAX的蛋白表达情况;用RT-PCR检测XIAP、MDR1、BCL-2及BAX的mRNA表达情况。结果:DNR作用于K562与K562/D细胞系24 h的IC_(50)值分别为2.177μg/ml和69.43μg/ml,耐药指数为31.89;分别用浓度为3、10、30、100及300μg/ml的Embelin作用于K562/D细胞系24 h,其增殖抑制率分别为2.70%±1.08%、10.92%±4.89%、28.13%±2.09%、36.56%±3.24%及43.59%±1.16%;用0.1、1、10及100μg/ml DNR联合10μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24 h,细胞增殖抑制率分别为31.92%±3.29%、49.57%±6.87%、55.16%±0.78%和71.94%±3.89%,其IC_(50)值为2.11μg/ml,逆转指数为32.91。用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡率。单独应用0.1μg/ml DNR作用于K562/D细胞系24 h的细胞凋亡率为12.06%±0.95%,而联合10和30μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24 h的细胞凋亡率分别为27.54%±0.59%和39.59%±1.57%;Western Blot结果显示,DNR联合Embelin后,Caspase-3的表达明显下降(P<0.05),且用抑制剂Z-VADFMK可以抵消药物联合应用对细胞的增殖抑制作用。同时,XIAP和BCL-2蛋白表达明显下降(P<0.05),BAX蛋白表达明显升高(P<0.05),而P-gp的表达无改变;RT-PCR结果显示,DNR联合Embelin后,XIAP和BCL-2 mRNA表达明显下调(P<0.05),BAX mRNA表达明显上调(P<0.05),MDR1 mRNA表达无明显变化(P>0.05)。结论:降低XIAP表达有助于增强DNR对K562/D细胞的作用;Embelin逆转K562/D细胞对DNR耐药机制与P-gp及MDR1 mRNA无关。

XIAP小分子抑制剂Embelin对胃癌细胞株SGC7901的作用研究

目的:观察XIAP小分子抑制剂Embelin对肿瘤细胞株SGC7901的作用。方法:实验分SGC7901,SGC7901+Embelin两组,采用RT-PCR,Western blot分别测定XIAP mRNA和蛋白水平;MTT法检测SGC7901对VCR,Embelin,VCR+Embelin的敏感性,并计算合用指数CI;体内观察抑瘤情况。结果:体外实验显示Embelin诱导后SGC790的XIAP mRNA基因和蛋白水平均明显高于SGC7901+Embelin组,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT显示VCR IC_(50)=0.0458μmol;Embelin IC_(50)=6.3691μmol;联合用药IC_(50)=0.039 9μmol。合用指数CI在抑制率为90%时的抑制率开始大于1。体内实验:VCR组,Embelin组及联合用组分别为重量抑瘤率分别是90.719 2,93.514 4,96.592 3。结论:XIAP小分子抑制剂Embelin对SGC7901有效。联合常规化疗药物VCR作用表现为小剂量协同,大剂量拮抗。

XIAP抑制剂Embelin对人T淋巴瘤细胞Jurkat增殖抑制作用

目的:研究XIAP抑制剂Embelin体外对人T淋巴瘤细胞Jurkat增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:应用MTS法分析不同浓度Embelin对人T淋巴瘤细胞增殖的影响;光学显微镜下观察经Embelin处理后细胞形态学的改变;经Annexin V/PI双染后用流式细胞术检测Embelin对Jurkat细胞凋亡的影响;Western blot方法检测Embelin作用后细胞XIAP、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-xl、Bel-2表达的变化。结果:Emebeli对人白血病细胞具有显著增殖抑制作用(P<0.05);Caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk,Caspase-9抑制剂Ac-LEHD-CHO能显著下调这种增殖抑制作用经不同浓度Emebelin处理24 h后,Jurkat细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较有显著性差异(P<0.01);经Emebelin处理24 h后,Jurkat细胞出现PARP、Caspase3、9裂解片段,且Bax蛋白表达上调,Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达水平下调结论:Embelin在体外可明显抑制人T淋巴瘤细胞Jurkat的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase依赖性的细胞凋亡内源途径而诱导Jurkat细胞发生凋亡。

Embelin通过PI3K/Akt信号途径抑制甲状腺癌细胞增殖

目的探讨Embelin对甲状腺癌细胞增殖的影响并探讨相关机制。方法体外培养甲状腺癌细胞,经Embelin处理后,RT-PCR和Western印迹检测XIAP m RNA和蛋白的表达水平;MTT法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测PI3K、Akt蛋白表达水平。结果 Embelin处理甲状腺癌细胞48 h后,XIAP m RNA和蛋白表达水平明显降低。在高剂量组中,MTT法检测其细胞生长抑制率为42.78%±4.29%,明显高于对照组(t=20.14,P<0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞凋亡率为37.94%±2.29%,明显高于对照组(t=42.09,P<0.01);流式细胞仪检测高剂量组细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.23%±2.13%,明显高于对照组(t高剂量组=5.70,P<0.01);检测PI3K、Akt蛋白在高剂量组中的表达水平,发现p Akt蛋白表达水平明显低于对照组(t高剂量组=6.47,P<0.05)。结论 Embelin下调XIAP表达可抑制甲状腺癌细胞增殖,其作用机制可能与PI3K/Akt信号途径相关。

Embelin对HL-60细胞MMP-9 mRNA、NF-κB及VEGF表达的影响

目的:研究Embelin对人类髓系白血病HL-60细胞株基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA、血管内皮生长因子(VEGF)及NF-κB表达的影响,并探讨相互之间的关系。方法:应用RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达,Western blot检测VEGF及NF-κB的表达。结果:Embelin可以抑制NF-κB、MMP-9 mRNA及VEGF的表达,且具有浓度依赖性。结论:Embelin可通过抑制NF-κB降低MMP-9 mRNA及VEGF表达,从而可能降低白血病细胞的侵袭性。

Embelin通过上调死亡受体DR4/DR5mRNA表达增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性

目的:探讨Embelin增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的敏感性及可能的作用机制。方法:TRAIL 1、5、10、50及100 ng/ml分别处理HL-60细胞6、12、24及48h,MTT法绘制细胞生长曲线;TRAIL 10 ng/ml±亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,Annexin V/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测24h时Caspase-3、8及9的表达;亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,实时荧光定量PCR检测DR4及DR5 mRNA的表达。结果:TRAIL对HL-60细胞具有增殖抑制作用。亚细胞毒浓度的Embelin联合10 ng/ml TRAIL作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的Caspase-3、8及9的表达也随之增加。结论:亚细胞毒浓度的Embelin可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与上调DR4及DR5 mRNA表达并进而启动凋亡途径有关。

XIAP抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株的抑制效应与机制研究

目的探讨XIAP小分子抑制剂Embelin体外对人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2的抑制效应与机制。方法将生长至第4-12代之间的MIAPaca-2细胞分为DMSO对照组与Embelin实验组,在实验组细胞中加入不同浓度的Embelin共孵育72h,收集细胞并裂解后取上清液用细胞凋亡试剂盒检测组蛋白(凋亡指标)的OD值水平。MIAPaca-2细胞加入不同浓度的Embelin共孵育60h后再加入3H胸腺嘧啶继续孵育12h,取细胞裂解液用同位素γ闪烁计数仪检测3H-CPM数值以判断细胞增殖程度。对DMSO对照组与Embelin实验组的组蛋白OD值与3H-CPM数值分别进行比较分析。结果Embelin实验组的MIAPaCa-2细胞株组蛋白OD值显著高于DMSO对照组而3H-CPM数值明显低于DMSO对照组(P<0.01),且实验组Embe-lin的作用浓度与组蛋白OD值呈正相关(r=0.996,P<0.01),而与3H-CPM数值呈负相关(r=-0.993,P<0.01)。结论Embelin呈剂量依赖性地诱导人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2凋亡并抑制其增殖,有肿瘤抑制效应。

高糖培养的视网膜Muller细胞中embelin对VEGF蛋白质表达的抑制作用

目的研究高糖培养的视网膜Müller细胞中embelin对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质表达的调控作用。方法原代培养的大鼠视网膜Müller细胞在不同糖浓度的培养液中培养,加入X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的特异性抑制剂emblin培养72 h后,利用Western印迹技术检测细胞内VEGF蛋白质的表达情况。结果高糖条件下,在视网膜Müller细胞中VEGF蛋白质表达上调。并且,XIAP的抑制剂emblin加入高糖培养环境后VEGF蛋白质表达下降。结论 XIAP的特异性抑制剂emblin对糖尿病性视网膜病变中VEGF引起的新生血管具有潜在治疗作用。

Self nano-emulsifying drug delivery system for Embelin:Design,characterization and in-vitro studies

CThe objective of the present study was to prepare solid self-nanoemulsifying drug delivery system(S-SNEDDS)containing Capryol-90 as oil phase for the delivery of Embelin,a poorly water soluble herbal active ingredient.Box-Behnken experimental design was employed to optimise the formulation variables,X1(amount of oil;Capryol 90),X2(amount of surfactant;Acrysol EL 135)and X3(amount of co-surfactant;PEG 400).Systems were appraised for visual characteristics for self emulsifying time,globule size and drug release.Optimised liquid formulations were formulated into free flowing granules(S-SNEDDS)by adsorption on the porous materials like Aerosil 200 and Neusilin and thereby compressed into tablet.In vitro dissolution studies of SNEDDS revealed increased in the dissolution rate of the drug.FT-IR data revealed no physicochemical interaction between drug and excipients.Solid state characterization of S-SNEDDS by DSC and Powder XRD confirmed reduction in drug crystallinity which further supports the results of dissolution studies.TEM analysis exhibited spherical globules.Further,the accelerated stability studies for 6 months revealed that S-SNEDDS of Embelin are found to be stable without any significant change in physicochemical properties.Thus,the present studies demonstrated dissolution enhancement potential of porous carrier based S-SNEDDS for poorly water soluble herbal active ingredient,Embelin.

Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的 研究Embelin对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响,并对其作用机制进行初步探讨.方法 用不同浓度的Embelin处理HL-60细胞,采用MTT法绘制生长曲线,通过Annexin V/PI 复染及JC-1染色,观察Embelin对HL-60细胞凋亡的影响 通过流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD33、CD34、CD11b和CD14表达的变化.在对HL-60细胞研究的基础上,选择9例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者的骨髓进行相应的研究.结果 Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性.24 h的,IC50值为429.98 μmoL/L.33.97 μmol/L的Embelin作用HL-60细胞3 d,流式细胞术检测结果 显示CD11b、CD14阳性细胞率均升高（P值均〈0.01） 339.67 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞后12、24及48 h的特异性凋亡率分别为（9.23 ±0.05）%、（25.86 ±0.30）%和（39.03±0.07）%,10.19、33.97、101.90、339.67及1019.02 μmol/L Embelin作用于HL-60细胞24 h后特异性凋亡率分别为（0.07±0.03）%、（7.43±0.30）%、（14.01±0.01）%、（25.52±0.03）%和（39.15±0.01）%,其诱导凋亡的作用呈时间及剂量依赖性.33.97 μmol/L的Embelin作用于ANLL 患者骨髓细胞3 d,3例M3患者骨髓细胞表面分化抗原出现显著性改变 339.67 μmol/L的Embelin作用患者骨髓细胞24 h,9例均发生凋亡.结论 亚细胞毒浓度的Embelin可诱导HL-60细胞向单核细胞分化 高浓度的Embelin对HL-60细胞具有增殖抑制及促进凋亡的作用.其促进凋亡的机制与线粒体凋亡途径有关.亚细胞毒浓度的Embelin对体外培养的M3患者骨髓细胞具有促进分化的作用 339.67 μmol/L的Embelin对ANLL骨髓细胞具有促进凋亡的作用.

X染色体连锁凋亡抑制基因小分子抑制剂Embelin对宫颈癌细胞株HeLa细胞凋亡的影响及分子机制

目的:研究X染色体连锁凋亡抑制基因(XIAP)小分子抑制剂Embelin在体外对宫颈癌细胞株He La生长的影响,并探讨其作用机制。方法:应用CCK-8检测不同浓度Embelin对宫颈癌细胞株He La增殖的影响;利用流式细胞仪检测Embelin对He La细胞凋亡的影响;Western blot方法检测Embelin作用后细胞XIAP、Caspase-3、Caspase-9表达的变化。结果:Embelin对宫颈癌细胞株He La增殖具有显著抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);经不同浓度Embelin处理后,He La凋亡率明显增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);经Embelin作用24 h后,He La细胞Caspase-9,Caspase-3,PARP被激活,表达增加。结论:Embelin在体外可显著抑制He La细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase依赖性的细胞凋亡途径。

X连锁凋亡抑制蛋白小分子抑制剂Embelin对胰腺癌Patu8988细胞株培美曲塞耐药的逆转作用

目的 观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）小分子抑制剂Embelin在体外安全剂量下能否逆转耐药.方法 CCK-8法检测Embelin对亲本株和耐药株增殖的影响及单用培美曲塞和联合Embelin分别对两株细胞的半数抑制浓度（IC50）变化.逆转录-聚合酶链反应（RT-RCR）、Western blot 检测Embelin作用亲本株和耐药株前后XIAP mRNA和蛋白的表达.流式细胞仪分析在耐药细胞中单用培美曲塞组和联合Embelin组凋亡差异.结果 Embelin均能抑制耐药株和亲本株增殖,具浓度依赖性,在浓度＜2.5 mg/L时对细胞基本无不良反应.单用培美曲塞和联合Embelin只在耐药株IC50差异有统计学意义（P＜0.05）.Embelin作用亲本株和耐药株后耐药株XIAP mRNA和蛋白分别下凋33%、25%（P＜0.05）.Embelin流式细胞分析在耐药细胞中联合Embelin 组凋亡比例高于单用培美曲塞组（25.87±2.81）%、（38.73±2.55）%,（P＜0.05）.结论 XIAP在耐药株中表达增高,Embelin能降低其在耐药株中的表达并提高胰腺癌Patu8988耐药细胞株对培美曲塞的敏感性,对亲本珠影响不大.

XIAPsiRNA、Embelin对TRAIL诱导肝癌细胞生长抑制和细胞凋亡的影响

目的研究X-连锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor of apoptosis，XIAP）siRNA或x1AP拮抗剂Embelin对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necros isfactor-relatedapoptosis—in—ducingligand，TRAIL）所致肝癌细胞HepG2生长抑制和细胞凋亡的影响。方法HepG2细胞转染xIAPsiRNA或者阴性对照，然后给予TRAIL处理。此外，HepG2细胞给予TRAIL、Embelin或者联合处理。XIAP表达水平变化、生长抑制、caspase-3活性分别用Westernblot、MTT测定、caspase-3荧光法检测。切割PARP的表达水平用Westernblot测定。结果XIAP蛋白表达水平在转染XIAPsiRNA后显著下调。与阴性对照相比，XIAPsiRNA显著增强TRAIL在100ng／ml（6．8％4-1．2％比11．8％±4．0％，P〈0．05）和1000ng／ml（18．9％±2．0％比26．6％±1．5％，P〈0．01）的生长抑制作用。在转染xIAPsiRNA后，TRAIL诱导caspase-3的活性和PARP的切割显著增强。此外，Embe—lin显著增强TRAIL对HepG2细胞的生长抑制（P〈0．01）、caspase-3活化（P〈0．01）和PAPR切割。结论XIAPsiRNA或Embelin在肝细胞癌的临床治疗方面具有潜在应用前景。

Embelin对大肠癌细胞株SW480细胞增殖和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体敏感性的影响

Embelin是从植物Embeliaribe中提取的具有抗肿瘤、抗炎等生物活性的化合物，可通过与x连锁凋亡抑制蛋白（Xchromosome-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP）蛋白BIR3功能域的结合阻止XIAP抑制caspase的活性。

蒽贝素对大鼠胶原诱导性关节炎炎症评分及炎症细胞因子的影响

目的探讨蒽贝素对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠炎症评分及炎症细胞因子的影响。方法将50只大鼠随机分为正常对照组(8只)和造模组(42只)。造模组大鼠采用注射牛Ⅱ型胶原(bovine typeⅡcollagen,CⅡ)+完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)乳剂进行初次免疫,1周后注射CⅡ+不完全弗氏佐剂(incomplete Freund’s adjuvant,IFA)乳剂加强免疫,建立CIA模型。将造模成功的32只CIA大鼠随机分为4组:CIA模型组、甲氨蝶呤组(1 mL·100g^(-1)灌胃,2次·周-1)和蒽贝素低剂量、高剂量2组(均以1mL·100g^(-1)灌胃,1次·d-1),每组8只。CIA模型组、正常对照组均以0.5%羧甲基纤维素钠1mL·100g^(-1)灌胃,1次·d-1。分别于实验第14、21、28、35天各组称体质量及对关节炎症进行评分。实验第36天检测各组血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukine-1β,IL-1β)的水平。结果与正常对照组比较,CIA模型组、甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第14、21、28、35天体质量均减轻和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显升高(均P<0.05);与CIA模型组比较,甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第21、28、35天体质量均增加和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显降低(均P<0.05);与甲氨蝶呤组比较,蒽贝素高剂量组实验第28、35天体质量均增加,实验第36天血清IL-1β含量明显降低(均P<0.05)。结论蒽贝素可降低胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子水平,缓解关节炎的症状,具有抗炎作用,可能对类风湿关节炎有一定的疗效。

应用水溶助长剂从酸藤果中提取摁贝素

目的：建立一种用水溶助长剂从酸藤果中提取摁贝素的方法。方法酸藤果经干燥,粉碎,加入异丙苯磺酸钠（ NaCS）水溶液,搅拌,滤过。滤液加酸水稀释到最小助溶浓度（ MHC）以下,静置60 min使摁贝素沉淀,悬液离心分离富含摁贝素提取物。结果最佳提取条件如下,提取温度：25~30℃,药材粉粒度：100目,水溶助长剂浓度：2．0 mol/L,搅拌提取时间：60 min。本法提取率〉90%,摁贝素纯度〉85%。结论采用本方法从酸藤果制备富含摁贝素提取物,方法简单,提取率高,NaCS可重复使用,不会造成环境污染。

蒽贝素对胶原诱导性关节炎大鼠IL-6和IL-17A的影响

目的探讨蒽贝素治疗类风湿关节炎(RA)的可能作用机制。方法选取Lewis雌性大鼠建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型,将造模成功的大鼠随机分为CIA模型组、甲氨蝶呤组、蒽贝素20 mg/kg组、蒽贝素40 mg/kg组4组,另设正常对照组,每组各8只大鼠。其中甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.5 mg/kg、每周2次,蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组分别予每日1次相应剂量蒽贝素灌胃,正常对照组及CIA模型组灌服等体积溶媒。共给药21 d,期间每周评估大鼠足趾肿胀程度,实验结束时行腹主动脉取血,ELISA法测血清IL-6和IL-17A含量,比较各组间的差异。结果治疗第14日,CIA大鼠双侧足趾均较正常对照组大鼠肿胀(P均<0.01);随着治疗时间的延长,甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组大鼠的鼠爪肿胀较CIA模型组明显好转(P均<0.01),甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。影像学观察,CIA模型组出现骨质疏松、关节间隙模糊、狭窄,甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组存在轻度骨质疏松,足趾小关节间隙清楚,尚未变窄。治疗后,甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组血清IL-6和IL-17A水平均低于CIA模型组(P均<0.01),其中甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40 mg/kg组血清IL-6水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05),蒽贝素组20 mg/kg组和40 mg/kg组的血清IL-17A水平均低于甲氨蝶呤组(P均<0.05),但甲氨蝶呤组与蒽贝素20 mg/kg组和40mg/kg组血清IL-6和IL-17A水平与正常对照组比较差异仍有统计学意义(P均<0.05)。结论蒽贝素可能通过抑制Th17细胞分化信号通路中相关靶点,降低血清IL-6和IL-17A,缓解关节炎症状。

基于UPLC-MS/MS的蒽贝素血药浓度测定及其在大鼠体内药动学研究

建立测定大鼠血浆中蒽贝素(Embelin)浓度的方法,并进行药动学研究。选取12只Sprague-Dawley(SD)大鼠灌胃蒽贝素(15.0 mg/kg),分别于给药前及给药后0.083,0.25,0.50,0.75,1,2,3,4,6,8,10,12,24,36,48,72 h时眼底静脉采血,分离血浆,用丙酮-乙酸乙酯混合溶剂萃取后,以大黄素为内标,采用超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定。色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18,流动相为甲醇-0.1%氨水溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min。样品经电喷雾离子源电离为负离子化后,在多反应监测模式下测定蒽贝素(m/z 293.1→96.6)和内标物大黄素(m/z 269.0→225.1)的浓度,并计算药动学参数。研究结果显示:蒽贝素检测血药浓度的线性范围为10—1200 ng/L,定量下限为10 ng/mL,检出限为3 ng/mL,日内和日间RSD均小于10%,准确度为8.8%—14.0%。大鼠灌胃蒽贝素的平均药-时曲线符合二室模型,分布半衰期为(12.60±1.19)h,消除半衰期为(15.95±0.73)h,AUC0-t为(3596.31±271.93)ng·h/L,AUC0-∞为(3717.48±269.82)ng·h/L。蒽贝素在大鼠体内的药动学过程符合二室模型。本研究建立的方法简单、快速、准确、选择性强,可用于蒽贝素血药浓度的测定及药动力学研究。