EDAG-1在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达

背景与目的:EDAG-1(embryonicdevelopassociatedgene1,EDAG-1)定位于9q22,在造血细胞特异表达,并与造血调控关系密切。本研究通过检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞中的表达和编码区基因结构,探讨EDAG-1与白血病和淋巴瘤发病的关系。方法:选用白血病或淋巴瘤细胞株共15种,采用RT-PCR法检测表达EDAG-1基因的细胞株,并回收该基因cDNA编码区片段,构建相应的重组质粒并测序分析编码区突变情况。通过Northernblot和Westernblot分别确证EDAG-1mRNA和蛋白在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达情况,利用Southernblot检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞株中基因重排和扩增情况。结果:红系(K-562、HEL)、巨核系(DAMI、MEG-01)、Jurkat细胞在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG-1,但其编码区结构未发现异常,也没有EDAG-1基因组的扩增和重排。发现HL-60细胞缺失EDAG-1,HuT78细胞EDAG-1发生重排。结论:EDAG-1可能与红系、巨核系白血病的发病机制有关,该基因激活的机制可能与编码区突变无关。

DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制小鼠肾小球内皮细胞转分化和肾纤维化

目的 基于分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)通过转化生长因子β/Rho相关激酶1(TGF-β/ROCK1)信号通路探讨对肾小球内皮细胞转分化的保护机制。方法 将小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,每组6只。除假手术组外,其余组建立UUO模型。空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,于第0天(UUO后立即)在超声系统的引导下每侧肾脏注射10μL(108个嗜菌斑形成单位[PFU])空载体或DEC2载体。术后14 d处死小鼠,HE染色检测肾组织学病变情况、 Masson染色检测肾纤维化情况,Western blot法检测肾组织DEC2、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、 Rho相关激酶1(ROCK1)的蛋白表达。正常人肾小球内皮细胞(GEnC),采用ROCK1抑制剂Y-27632处理或转染DEC2, Western blot法检测暴露于TGF-β的GEnC中ROCK1、 α-SMA、 DEC2、 E-cadherin表达影响。通过免疫荧光细胞化学染色检测GEnC中ROCK1和DEC2定位,并通过免疫共沉淀实验验证二者的相互作用关系。结果 与假手术组相比,UUO组在第14天出现显著的肾纤维化和胶原蛋白积聚。在UUO组中,小鼠肾组织中DEC2和E-cadherin的表达显著降低,α-SMA的表达显著增加。与空载体处理的UUO组相比,过表达DEC2的UUO组小鼠肾纤维化和胶原蛋白积聚程度降低,并且小鼠肾组织中ROCK1、 α-SMA表达降低和DEC2、 E-cadherin表达增加。TGF-β以时间依赖性方式增强GEnC中ROCK1和α-SMA表达,并且DEC2、 E-cadherin水平降低。用ROCK1抑制剂Y-27632处理可部分消除TGF-β诱导的ROCK1、 α-SMA表达增加和DEC2、 E-cadherin表达降低。此外,在TGF-β刺激前,将GEnC转染DEC2降低细胞中ROCK1、 α-SMA表达,并增加DEC2、 E-cadherin表达。免疫荧光染色显示DEC2在GEnC中与ROCK1共定位,并且免疫共沉淀结果显示DEC2与ROCK1相互拉低。结论 DEC2在纤维化肾组织中下调,上调DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制GEnC的上皮肌纤维母细胞转分化及肾纤维化。

金钱鱼IGF-1和IGF-2的克隆及其在胚胎发育过程的表达

【目的】克隆金钱鱼IGF-1和IGF-2基因,研究二基因在金钱鱼胚胎发育过程中的表达。【方法】采用实时荧光定量PCR,以不同发育时间点的金钱鱼(Scatophagus argus)胚胎为实验材料,分析IGF-1和IGF-2基因在鱼类胚胎发育过程中的表达图式。【结果】金钱鱼IGF-1和IGF-2的蛋白全序列分别为186和215个氨基酸。序列分析表明,IGF-1和IGF-2均有胰岛素样生长因子蛋白典型结构,含有N端信号肽、B、C、A、D和E结构域,且有6个保守的半胱氨酸,与其他鲈形目鱼类花鲈的IGF-1和IGF-2相似性较高(95%和91%)。IGF-1从受精卵到出膜的胚胎发育过程中表达量逐渐上调;IGF-2在受精后至囊胚期表达量极低,而在原肠胚期和神经胚期表达量显著上调至最高水平,在神经胚期后表达量显著降低并维持稳定。【结论】IGF-1和IGF-2序列保守性低,与鲈形目同源性高,在金钱鱼胚胎发育过程中起不同调控作用。

尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用

为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。

赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1作用机制及其生物学功能的研究进展

与其他化学修饰,如乙酰化、磷酸化、泛素化等相似,组蛋白赖氨酸甲基化是一个可以逆转的组蛋白修饰,是一个动态调节的过程。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)是一个黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinulcleotide,FAD)依赖性胺氧化酶,它能够特异性脱去H3K4和H3K9位点上的单甲基化和二甲基化的甲基基团。LSD1参与调控核受体介导的基因转录,并分别维持染色质的活性和非活性状态,被誉为细胞深处的基因"开关"。LSD1的功能失衡可引发多种重要生命现象的改变。主要综述LSD1的结构、作用机制及其在肿瘤发生、胚胎发育、体细胞重编程的调控、细胞分裂和造血等过程中生物学功能的研究新进展。

DEC1、LXRβ在动脉硬化性脑梗死患者血清中的水平及其临床意义

目的探讨分化型胚胎软骨发育基因1(differentiation type embryonic cartilage development genes 1,DEC1)、肝X受体β(Liver X receptorβ,LXRβ)在动脉硬化性脑梗死患者血清中的水平及其临床意义。方法选择2013年3月~2015年12月本院的60例急性脑梗死患者为研究对象,选择2013年3月~2015年12月健康人群60例为对照组,检测入组对象血清DEC1、LXRβ水平。结果脑梗死组血清DEC1水平高于对照组(P<0.01),脑梗死组血清LXRβ水平低于对照组(P<0.01)。随着脑梗死患者病情的加重,血清DEC1水平呈不断升高趋势(P<0.05);随着患者功能障碍程度的加重,血清DEC1水平不断升高(P<0.05)。随着急性脑梗死患者脑梗死病情的加重,血清LXRβ水平不断降低(P<0.05);随着急性脑梗死患者功能障碍程度的加重,血清LXRβ水平不断降低(P<0.05)。急性脑梗死患者血清DEC1水平与LXRβ水平呈负相关(r=-0.331,P=0.009)。结论 DEC1、LXRβ可能参与了急性脑梗死的发病及病情进展,且DEC1可能通过负向调控LXRβ进而在急性脑梗死发病、病情加重、功能障碍程度加重过程中发挥作用。

宫颈鳞癌组织中MTA1蛋白的表达及其意义

目的探讨MTA1蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展及浸润转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测49例宫颈癌组织及其相应的30例癌旁非典型增生组织和49例正常组织中MTA1蛋白及的表达。结果①伴有淋巴结转移组MTA1蛋白阳性表达率高于无淋巴结组,两组间相比差异有统计学意义(P<0.05)。②浸润至外膜MTA1蛋白的阳性表达率高于深肌层及浅肌层,差异有统计学意义(P<0.05);浸润至深肌层组MTA1蛋白的阳性表达率稍高于浅肌层组,两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。③癌组织MTA1蛋白阳性表达率均高于相应的癌旁非典型增生组织及正常宫颈黏膜组织,三者两两相比差异有统计学意义(P均<0.05)。结论MTA1蛋白在宫颈鳞癌组织表达明显升高,MTA1于宫颈鳞癌的形成及浸润转移密切相关。

2023年生命科学热点回眸

2023年,生命科学多个领域的研究取得突破性进展。重点回顾其中一部分已经、正在和未来非常可能改变人类对生命科学研究的前沿热点:人工智能正越来越成为生命科学和医学应用的有力且重要工具;基于GLP-1激动剂的出现和空前的广泛应用;相分离、体外胚胎模型、神经科学、发育生物学等领域新的技术的进一步优化和应用;针对β-淀粉样蛋白的抗体疗法、干细胞及免疫疗法、mRNA疫苗、CRISPR基因编辑疗法等新的临床治疗手段的出现和初步临床应用。这些研究进展不但进一步拓展人类对生命本质奥秘的理解,也正在为阿尔兹海默症、肿瘤、病毒感染等一系列重大人类疾病的患者带来福音。