纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

软骨藻酸检测方法研究进展

综述了软骨藻酸的检测方法,包括酶联免疫吸附法、高效液相色谱法以及高效液相色谱-串联质谱法等方法的原理及优缺点,同时介绍了软骨藻酸在贝类、拟菱形藻、血液、尿液等样本的检测方法及其应用,生物传感器法、分子印迹法等新型技术也被用于软骨藻酸的检测,近年来长期慢性低剂量摄入软骨藻酸对生物体的影响受到广泛关注,可作为今后研究重点。

早期推拿后大鼠24 h内疼痛变化特点的研究

目的通过机械、温度伤害感受变化评价早期推拿镇痛启动后,慢性压迫性神经损伤(minor CCI)模型大鼠24 h内疼痛变化情况及疗效最优时间点,为推拿镇痛启动疗效提供支撑。方法将49只SD大鼠随机分为7组,即假手术组、模型组、推拿后即刻组、推拿后6 h组、推拿后12 h组、推拿后18 h组与推拿后24 h组。模型组和推拿各亚组建立minor CCI模型。推拿各亚组在造模后7 d进行1次三法三穴干预;模型组与假手术组进行抓握束缚。干预结束后对推拿各亚组、模型组及假手术组先后进行冷敏阈值(CST)、机械缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(TWL)测试不同性质痛觉的变化;取血清进行ELISA测试白介素-10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化;取造模侧背根神经节(DRG)进行qPCR检测;观察TNF-α、TRPV1和TRPA1基因表达的变化。结果行为学检测显示CST、PWMT、TWL均有不同程度的降低或延长;ELISA检测大鼠血清IL-10、TNF-α显示明显降低;qPCR检测显示TNF-α、TRPV1、TRPA1基因表达均减少,但三种检测方法结果显示指标变化显著时间点均不相同。结论对于CST、PWMT、TWL三种不同伤害性感受阈值,推拿干预后24 h内的镇痛疗效显著时间点不同;推拿可通过降低IL-10、TNF-α、TRPV1和TRPA1的表达发挥即刻镇痛和持续镇痛作用。

比较化学发光法与酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测乙肝两对半的结果分析

目的探讨化学发光法与酶联免疫吸附试验(ELISA法)在乙肝两对半检测上的结果。方法选取2023年1月至2023年12月本院就诊的100例乙型肝炎病毒携带者,均对就诊患者进行血清标本采集,并分别实行化学发光法与ELISA法检测乙肝两对半。以病理结果为金标准,对比两种检查结果。结果ELISA法的乙肝两对半阳性率比化学发光法低,差异明显(P<0.05);ELISA法检测结果22例阳性,78例阴性;化学发光法检测结果69例阳性,31例阴性。化学发光法在乙肝两对半阳性抗体上的灵敏度、准确性和阳性预测值比ELISA法高(P<0.05),其特异度、阴性预测值较ELISA法差异无统计学意义(P>0.05)。结论对乙肝两对半检测上选择化学发光法比酶联免疫吸附试验法更具有良好优势,而且化学发光法作为一种半定量检验,更具临床检测价值和推广意义。

化学发光免疫法与酶联免疫吸附法对乙型病毒性肝炎诊断效能的对比

目的 对比分析乙型病毒性肝炎应用化学发光免疫法与酶联免疫吸附法的诊断效能。方法 采用目的抽样法选取2022年1月—2023年8月高密市人民医院收治的220例疑似乙型肝炎患者为研究对象。均使用化学发光免疫法和酶联免疫吸附法进行检测,将荧光定量PCR(fluorescent quantitative polymerase chain reaction PCR, qPCR)检验结果作为金标准,比较两种方法的诊断效果及两种方法的血清学指标阳性率。结果qPCR检测133例为阳性,87例为阴性。化学发光免疫法的准确度、灵敏度、特异度与酶联免疫吸附法对比,差异无统计学意义(P均>0.05)。化学发光免疫法的HBsAg阳性率为97.74%(130/133)、HBeAg阳性率为96.99%(129/133)及HBeAb阳性率为97.74%(130/133),均高于酶联免疫吸附法的78.95%(105/133)、78.95%(105/133)、91.95%(109/133),差异有统计学意义(χ^(2)=22.821、20.462、18.179,P均<0.05)。结论 化学发光免疫法在灵敏度、特异度和自动化程度方面通常具有明显优势,尤其适用于大规模检测和高通量实验室。

酶联免疫法和金标法对HIV抗体的检测结果比较

目的 探讨酶联免疫法和金标法对HIV抗体的检测结果,明确针对艾滋病更为有效的临床筛查手段。方法选取264例疑似艾滋病患者,采集入组患者静脉血并进行酶联免疫法与金标法检测HIV抗体。以临床诊断结果为准,比较酶联免疫法和金标法与临床检查结果的一致性;比较酶联免疫法和金标法对艾滋病的诊断效能。结果 264例疑似艾滋病患者中,经临床筛查试验和确证试验确诊225例。κ检验分析结果显示,酶联免疫法检查结果与临床诊断结果具有高度一致性(κ=0.897, P <0.05);金标法检查结果与临床诊断结果具有高度一致性(κ=0.902, P <0.05)。酶联免疫法与金标法诊断艾滋病的灵敏度、特异性与准确率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 酶联免疫法和金标法对HIV抗体均具有较好的检出效果,可为艾滋病临床诊断提供较为准确的数据参考,临床检测中可根据患者自身情况选择相应的检测方法,必要时还可进行联合检测。

电化学发光法和酶联免疫法在乙型肝炎病毒血清学检验中的应用效果分析

目的:探究电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫法(ELISA)在乙型肝炎病毒(HBV)血清学检验中的应用效果。方法:选取2022年3月—2023年3月西宁市第三人民医院收治的108例疑似乙型肝炎(简称乙肝)患者作为研究对象。所有研究对象行ECLIA、ELISA检验,以实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)为“金标准”,比较两种检验方法的诊断效能。结果:108例疑似乙肝患者经qPCR确诊79例。ECLIA灵敏度与准确率高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);两种检验方法特异度比较,差异无统计学意义(P=0.640)。ECLIA乙肝E抗体(HBeAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝E抗原(HBeAg)、乙肝核心抗体(HBcAb)阳性检出率高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);两种检验方法乙肝表面抗体(HBsAb)阳性检出率比较,差异无统计学意义(P=0.524)。79例确诊病例中HBsAg阳性42例。HBsAg 1.01~3.00 IU/mL时,两种检验方法HBsAg检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);HBsAg 0.06~1.00 IU/mL时,ECLIA HBsAg检出率高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ECLIA在HBV血清学检验中的应用效果优于ELISA,诊断效能及低水平HBsAg检出率更高。

酶联免疫法测定甘精胰岛素中单链前体残留研究

目的 建立酶联免疫法检测甘精胰岛素中单链前体残留,为甘精胰岛素药物质量控制和安全性评价提供新方法。方法采用双抗夹心酶联免疫法,以甘精胰岛素原为标准品,建立单链前体残留检测方法,验证方法的重复性、准确度、范围和精密度,并应用该方法检测9批甘精胰岛素原料药。结果在0.156~10.00 ng·mL^(-1)浓度范围内,对甘精胰岛素原标准品进行四参数曲线拟合,曲线相关系数R~2大于0.99,方法准确度较高、重复性良好。重复检测3批甘精胰岛素原料药,平均加标回收率在104%~113%范围内,RSD%小于10%,方法精密度良好。9批样品中单链前体残留量均小于1 ng·mg^(-1)。结论建立的酶联免疫法可用于甘精胰岛素及其他重组人胰岛素类似物中单链前体残留量的质量控制和安全性评价。

福林酚法高通量测定牛奶中蛋白酶活力的优化

[目的]优化福林酚法测定牛奶中蛋白酶活力的试验条件,解决检测结果重复性差、检测效率不高等问题。[方法]用酶标仪测定牛奶中蛋白酶活力,同步对比各试验条件对测定结果的影响。[结果]酶标仪测定时,显色保温时间15 min以上、取样350μL、福林试剂浓度0.33~0.5 mol/L时,牛奶中蛋白酶活力测定结果重复性好,检测效率高。[结论]酶标仪测定牛奶中蛋白酶活力是一种检测效率高、结果重复性好的方法,更适合乳品企业大批量筛查牛奶中蛋白酶活力。

两种IgM抗体检测方法诊断儿童肺炎支原体感染的比较研究

目的探讨酶联免疫吸附试验IgM抗体(enzyme-linked immunosorbent assay immunoglobulin M,ELISA-IgM)和胶体金-IgM抗体检测方法诊断儿童肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)感染的应用价值。方法选取2019年6月28日至12月31日首都儿科研究所附属儿童医院呼吸科住院治疗的社区获得性肺炎患儿550例,采用ELISA-IgM抗体和胶体金-IgM抗体检测方法检测患儿MP,比较两种方法的一致性、在不同年龄段患儿的MP阳性率及准确度。结果550例患儿中,胶体金-IgM抗体检测方法的MP阳性率高于ELISA-IgM(61.8%比52.0%),差异有统计学意义(P<0.01);两种方法的总一致率为83.3%,Kappa值为0.662(P<0.01);不同年龄组两种方法MP阳性率的分布差异均有统计学意义(P<0.01)。550例患儿中有355例MP确诊患儿,不同年龄组两种方法MP阳性率的分布差异均无统计学意义(P>0.05);MP确诊患儿的平均病程为(8.30±3.43)d,不同病程两种方法MP阳性率的分布差异均有统计学意义(P<0.01);发病5~<8 d和8~<10 d时,胶体金-IgM抗体检测方法的MP阳性率均高于ELISA-IgM(78.4%比57.7%,95.7%比86.1%),差异均有统计学意义(P<0.05)。胶体金-IgM抗体检测方法的灵敏度、阴性预测值和约登指数高于ELISA-IgM(0.88比0.75,0.79比0.67,0.73比0.66),特异性和阳性预测值低于ELISA-IgM(0.85比0.91,0.91比0.94)。结论两种IgM抗体检测方法对于诊断儿童MP感染都有较高的应用价值,且一致性较好。对于病程早期的患儿,胶体金-IgM抗体检测方法的敏感性明显优于ELISA-IgM抗体检测方法。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附试验检测外周血γ-干扰素诊断结核分枝杆菌感染的结果分析

目的对化学发光免疫分析法(CLIA)检测外周血γ-干扰素(IFN-γ)结果为阴性、灰区、弱阳性、不确定和阳性标本进行分析,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行复测,同时对γ-干扰素释放试验(IGRA)辅助诊断结核分枝杆菌(MTB)感染的临界值设定及应用价值进行探讨。方法将行CLIA-IGRA检查的患者标本共299例纳入研究,根据检测结果分为3组,A组(T-N<14 pg/mL)118例,B组(T-N:14~50 pg/mL)138例,C组(T-N>50 pg/mL)43例,T为测试培养管,N为本底对照培养管。利用ELISA进行复测,比较两种检测方法的结果一致性。计算不同临界值下的灵敏度和特异度,Kappa检验评价两种检测方法的一致性、灵敏度、特异度;ROC曲线分析两种检测方法的诊断性能。结果两种检测方法对于A组和C组样本的检测结果一致性较高,符合率分别为96.61%和93.02%,与B组样本检测得到的IGRA阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=142.04,P<0.001)。CLIA和ELISA检测确诊结核患者、潜伏性MTB感染患者、非结核患者的阳性率分别为68.97%、72.60%、49.23%和44.83%、32.88%、14.21%,两者对潜伏性MTB感染和非结核患者检测的阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。当以40 pg/mL为临界值时,两种检测方法的特异度均较高,分别为88.80%和91.37%,一致性较好(总符合率94.60%,Kappa=0.779)。结论两种检测方法在检测MTB感染的样本具有较好的一致性,但对于易与结核混淆的非MTB感染者标本需要提高临界值来判定IFN-γ的结果,CLIA检测具有检测时间短、自动化优势,在MTB感染筛查方面具有较高的临床应用价值。

化学发光法与酶联免疫吸附测定法在乙型肝炎病毒感染血清标志物检验中的应用效果比较

目的比较化学发光法与酶联免疫吸附测定法(ELISA)在乙型肝炎病毒(HBV)感染血清标志物检测中的应用效果。方法选取2018年6月至2021年3月本院收治的82例疑似乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均采取化学发光法及ELISA检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法作为金标准,比较两种检测方法的诊断价值、阳性检出率、重复性。结果PCR共检出阳性53例,阴性29例;化学发光法阳性52例,阴性30例;ELISA检出阳性51例,阴性31例。化学发光法检测HBV感染血清标志物的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光法HBeAb、HBeAg、HBsAg阳性检出率均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA比较,化学发光法检测HBV感染血清标志物效果更好,诊断价值、阳性检出率均较高,值得临床推广应用。

在艾滋病检验中人类免疫缺陷病毒抗体酶联免疫吸附法筛查结果的研究及临床价值分析

目的:探究酶联免疫吸附法(ELISA)在检验艾滋病(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的临床应用价值。方法:选择2018年1月—2020年5月开封市第二中医院收治的130例疑似HIV感染者作为研究对象,以蛋白印迹检测法结果作为诊断HIV抗体阳性的“金标准”,分析胶体金法、ELISA法在HIV阳性中的诊断价值,另分析两种方法与蛋白印迹检测法在HIV抗体阳性诊断中的一致性。结果:经蛋白印迹检测法的HIV抗体阳性检出率为47.69%,胶体金法的HIV抗体阳性检出率为41.54%,ELISA法的HIV抗体阳性检出率为46.92%,三种方法在HIV抗体阳性检出率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.179,P>0.05);ELISA法在HIV抗体阳性检出中灵敏度、准确度及阴性预测值均高于胶体金法,差异有统计学意义(χ^(2)=8.052、9.596、6.890,P<0.05);两种方法在特异度及阳性预测值比较中,差异无统计学意义(χ^(2)=0.831、1.114,P>0.05)。kappa检验显示:ELISA法与蛋白印迹检测法结果的一致性良好(kappa=0.954,P<0.001);胶体金法与蛋白印迹检测法的一致性尚可(kappa=0.752,P<0.001)。结论:ELISA法在AIDS中HIV抗体阳性筛查中具有较高的临床应用价值,灵敏度、准确度均较高,可作为HIV感染初期筛查的重要方法。

化学发光与酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用对比

目的对比ECLIA(ECLIA)与ELISA(ELISA)用于临床乙肝病毒血清学检验中的价值。方法选择2021年1月—2022年12月本院治疗的乙肝患者100例作为研究对象,分别通过ECLIA、ELISA检验进行乙肝病毒血清学检验,记录两种检验方式乙肝五项指标检测结果,对比组间统计学差异。计算两种检验方式检测乙肝五项指标阳性率。结果ECLIA与ELISA检验乙肝五项指标中HbsAb、HbcAb值组间比较差异无统计学意义(P>0.05),ECLIA检测乙肝五项指标中HbeAg、HbsAg及HbeAb结果均高于酶联免疫吸附法(P<0.05)。计算结果显示,ECLIA检测乙肝五项指标中HbeAg、HbsAg及HbeAb阳性率明显高于ELISA(P<0.05)。结论临床可通过ECLIA与ELISA方法进行乙肝病毒血清学检验工作,具有较高的准确性,二者相比,ECLIA准确率更高,能提供更准确的数据参考,值得运用推广。

生殖器疱疹病毒抗原ELISA与PCR检测结果的对比研究

目的:研究对比酶联免疫吸附法(ELISA法)及聚合酶链反应法(PCR法)在生殖器疱疹病毒抗原检测中的应用价值。方法:随机选取2017年1月至2022年10月在临沂市皮肤病医院进行诊治的疑似生殖器疱疹患者87例,采集患者标本并分别应用ELISA法及PCR法进行单纯疱疹病毒抗原检测。以病毒培养法检测结果作为金标准,分析ELISA法及PCR法在生殖器疱疹病毒抗原检测中的应用效果。结果:两种检测方法对HSV-1感染、HSV-2感染、混合感染的检出率以及总阳性检出率的差异均无统计学意义(P>0.05)。以病毒培养法检测结果为金标准,ELISA法检测与PCR法检测诊断生殖器疱疹灵敏度、准确度、特异度、阳性预测值、阴性预测值的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:ELISA法及PCR法在生殖器疱疹病毒抗原检测中的应用价值均较高,但是ELISA法具有经济实用、操作简单等特点,更加适合基层医院推广和应用。

间接竞争酶联免疫分析法快速检测决明子中黄曲霉毒素B_(1)的研究

目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑制曲线,然后以显色值和灵敏度为评价指标筛选样品的提取和稀释方法。对所建立的方法进行方法学考察,最后用于实际样品检测。结果:经过优化,确定样品的最佳提取溶剂为乙腈-甲醇溶液(90∶10,v/v),稀释溶液为甲醇-PBS溶液(10∶90,v/v),稀释倍数为20倍。方法的半数抑制浓度为0.078 ng/mL,线性范围为0.016~0.25 ng/mL,回收率为85.00%~109.2%,RSD为0.45%~9.08%。采用所建立的方法对25批决明子进行了检测,经液相色谱-串联质谱法确证,超过限量标准的样品的假阳性率小于5%。结论:本文所建立的ic-ELISA灵敏、简便,适用于决明子中AFB_(1)的快速筛查,但仍存在一定的假阳性率,后续还需要对产生干扰的基质因素进行研究并消除,进一步提高检测的准确度。

A sensitive and convenient enzyme-linked immunosorbent assay method in serum MG7 antigen detection in gastric cancer

Objective To explore a highly sensitive and highly specific method to detect the serum MG7 antigen(Ag)level for early gastric cancer diagnosis.Methods The serum MG7-Ag level was detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method in 116 preoperative gastric cancer patients,63 postoperative gastric cancer patients,41 patients with precancerous lesion,37 pa-

三种梅毒抗体筛查方法的比较

目的比较无偿献血者梅毒抗体筛查方法甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、双抗原夹心法的酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)的特性。方法以卫生部临床检验中心梅毒抗体血清盘标本40份为质评标本,用TRUST、TP-ELISA和确认试验TPPA对质评标本作盲法筛查。结果TRUST、TP-ELISA、TPPA试剂盒的灵敏度分别为80.6%、97.7%、100.0%,特异性分别为77.8%、94.4%、100.0%,重复试验符合率分别为87.2%,98.3%,100.0%。结论TP-ELISA双抗原夹心法无论在灵敏度、特异性及重复试验结果上都与确认试验TPPA差异无统计学意义(P>0.05),且明显高于TRUST法;TP-ELISA法具有敏感性高、特异性好、结果客观、自动化程度高等优点,适用于无偿献血者大批量的血液筛查。

新霉素ELISA检测方法的建立

目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结果:新霉素抗血清和庆大霉素的交叉反应率为2.04%,和卡那霉素的交叉反应率为0.02%,和氨苄青霉素、红霉素、四环素的交叉反应率均小于0.01%。初步测试新霉素间接竞争ELISA法的准确性和回收率。板内误差小于4%,板间误差小于11%,回收率为135.5%～191.3%。直接竞争和间接竞争ELISA方法的检测极限分别为28.58ng/mL和51.74ng/mL,达到了国家对新霉素规定的500μg/kg MRL检测限。结论:建立了直接竞争和间接ELISA吸附检测方法,条件优化更成功的间接竞争ELISA可用于开发新霉素检测试剂盒。

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min。对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%。