血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。 方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2 0 0分子筛纯化 ;通过体外内皮细胞 (ECV30 4)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜 (CAM)新生血管实验检测其抑制活性。 结果 :Endo-statin在 DH5α中的表达率为 2 8.5 % ,纯化后纯度可达 90 .5 %。 Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,IC5 0 为 72μg/ m l;2 0μg/ ml时使细胞于 48h发生明显凋亡 ;2 0 0μg/ ml的 endostatin可使 CAM新生血管化率下降 30 %。结论 :研究结果表明 endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用 。

重组人Endostatin/MBP融合蛋白片段的构建及体外抑制内皮细胞增殖活性

为了寻找人,endostatin基因的核心作用片段,先用PCR方法从人的肝脏cDNA文库克隆出人endostatin基因。然后,利用限制性内切酶酶切得到5个不同的endostatin基因片段,并将它们构建到大肠杆菌表达载体pMAL-c2上。经转化并由大肠杆菌表达得到rh Endo-statin/MBP 6个不同片段的融合蛋白,用亲和层析技术分离纯化,并分别作用于体外培养的牛肾上腺毛细血管内皮细胞(BCE),检测它们 对内皮细胞增殖的影响。rh Endostatin/MBP不同片段的融合蛋白对经bFGF刺激引起的BCE细胞的快速增殖有不同程度的抑制作用。Endostatin作用的活性片段位于Endostatin蛋白N端的第55-96氨基酸位置内。