子痫前期患者血浆对人脐静脉内皮细胞增殖及Edg4表达的影响

目的:探讨子痫前期(PE)患者血浆对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及溶血磷脂酸(LPA)受体蛋白Edg4表达的影响。方法:体外培养HUVEC,取对数生长期的细胞分为对照组、正常晚孕组、轻度PE组和重度PE组4组,分别用RPMI1640培养液、含体积分数20%正常晚期孕妇血浆、20%轻度PE患者血浆和20%重度PE患者血浆的RPMI1640培养液继续孵育48h。应用MTT比色法检测细胞增殖能力,应用免疫细胞化学SP法和RT-PCR检测细胞Edg4蛋白及其mRNA表达水平。结果:4组细胞增殖抑制率及Edy4蛋白、mRNA的表达差异均有统计学意义(F=104.200,χ2=32.941,F=5803.360,P均<0.05)。与对照组和正常晚孕组相比,轻度和重度PE组HUVEC增殖抑制率增大,Edg4蛋白及mRNA表达明显升高,且重度PE组较轻度PE组升高更明显(P<0.05)。结论:PE患者血浆LPA水平升高可能是引起血管内皮细胞损伤的原因之一。

益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4及其下游髓样分化因子88、肿瘤坏死因子受体相关因子-6表达的影响

目的研究益气活血复方含药血清对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,从mRNA和蛋白水平探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高、中、低浓度(1.6、0.8、0.4g/mL)组,每组5只。各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养HUVECs,随机分为6组,即空白对照组、模型组、西药对照组、中药高、中、低浓度组,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法和Western blotting法分别测定TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的表达。结果用LPS刺激HUVECs后,引起TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA和蛋白的高表达(与模型组比较,P<0.01,P<0.05)。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,抑制下游NF-κB以及各种相关基因表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。

益气活血复方对内皮细胞TLR4及其下游MyD88、TRAF-6、TRAM、TRIF mRNA表达的影响

目的研究益气活血复方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路元件髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体相关的干扰素活化子(TRIF)表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只。以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7d。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用Real ti me PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA的高表达(与空白对照组比较,P<0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6 mRNA的高表达(与模型组比较P<0.05或P<0.01),对TRAM及TRIF作用不明显。结论益气活血复方可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,而对MyD88非依赖性途径作用不明显,因此益气活血复方主要是通过阻断MyD88依赖性途径来发挥其抗动脉粥样硬化的作用。

子痫前期患者血浆对人脐静脉内皮细胞生长活性及Edg4表达的影响

目的:探讨子痫前期患者血浆对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)生长活性的影响以及与溶血磷脂酸受体蛋白内皮分化基因-4(Edg4)的关系。方法:体外培养HU-VECs,取对数生长的细胞,分组实验:对照组,正常晚孕组,轻度子痫前期组,重度子痫前期组。用MTT比色法和流式细胞仪检测各组细胞增殖及凋亡情况,免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞Edg4蛋白及mRNA表达水平。结果:(1)子痫前期组HUVECs增殖减少,细胞凋亡增加;各组间细胞增殖率及细胞凋亡率差异显著(P<0.05);(2)Edg4蛋白主要表达于HUVECs的细胞浆和细胞膜,子痫前期病情越重,其血浆诱导的HUVECs Edg4蛋白表达越强;(3)子痫前期组Edg4 mRNA表达明显升高,与对照组和正常晚孕组相比显著差异(P<0.05);重度子痫前期组Edg4 mRNA表达较轻度组显著升高(P<0.05)。结论:子痫前期患者血浆可诱导HUVECs Edg4蛋白表达增强,并抑制HUVECs细胞增殖,促进细胞凋亡,提示子痫前期患者溶血磷脂酸升高可能与血管内皮细胞功能异常有关。

联合血清人附睾分泌蛋白4、血管内皮细胞生长因子、白细胞分化抗原147检测在肺癌诊断及淋巴结转移监测中的价值

目的分析联合血清人附睾分泌蛋白4(HE4)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、白细胞分化抗原147(CD147)检测诊断肺癌的价值。方法我院收治的112例肺癌患者(肺癌组),同期62例健康体检者(健康组)。比较两组及肺癌淋巴结是否转移患者HE4、VEGF、CD147水平。分析影响肺癌患者淋巴结转移的危险因素及HE4、VEGF、CD147诊断肺癌的价值。结果肺癌组HE4、VEGF、CD147水平高于健康组,转移组HE4、VEGF、CD147水平高于未转移组(P<0.05);HE4、VEGF、CD147均是肺癌患者淋巴结转移的影响因素(P<0.05);HE4、VEGF、CD147联合检测肺癌的AUC、敏感度、特异度分别为0.913、0.825、0.820,均高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论HE4、VEGF及CD147在肺癌中呈高表达,检测上述因子可评估淋巴结转移情况,且联合检测有助于提高肺癌诊断价值。

脓毒症细菌内毒素诱导血管内皮细胞损伤与Toll样受体和钙信号的相关性研究

目的探讨Toll样受体4（TLR4）、髓质分化蛋白2（MD2）、基质相互作用蛋白1（STIM1）对细菌内毒素（LPS）诱导血管内皮细胞钙超载损伤及炎症反应的影响。方法DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。①高保真反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测LPS刺激前及刺激后0.5、1、6、12、24 h的TLR4、MD2、核转录因子-κB（NF-κB）表达。②用psiSTIM、psiTLR转染细胞，激光共聚焦检测其对LPS刺激HUVEC钙内流的影响。③ psiTLR转染12 h后用LPS刺激6 h，免疫共沉淀法检测抗TLR4抗体沉淀细胞裂解液中MD-2、STIM1、NF-κB蛋白表达。④在LPS刺激HUVEC基础上，给予NF-κB抑制剂PDTC 0.1 mg/L或1 mg/L以及转染psiTLR表达载体1 h或12 h，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平，RT-PCR检测STIM1、NF-κB的mRNA表达。结果① LPS刺激HUVEC后，上清液中TLR4、MD2、NF-κB的mRNA表达水平（2-ΔΔCt）逐渐升高，均于6 h达峰值，分别为23.52±2.88、17.43±3.43、18.13±2.99；与LPS刺激前（分别为7.02±2.81、5.19±3.22、8.11±1.42）比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）。② psiSTIM可显著抑制LPS诱导细胞外钙离子内流峰值（Peak[Ca2＋]）显著升高（nmol/L：62.61±14.12比108.13±22.33，P〈0.05）；psiTLR也可显著抑制LPS诱导Peak[Ca2＋]显著升高（nmol/L：50.78±8.05比109.43±20.21，P〈0.01）；而共同抑制TLR、STIM1表达则可使Peak[Ca2＋]进一步降低（nmol/L：39.31±6.42比109.43±20.21，P〈0.01）。③非LPS处理组免疫共沉淀法能检测到抗TLR4抗体沉淀细胞中MD2蛋白表达，LPS处理组MD2蛋白表达增强，psiTLR＋LPS组MD2蛋白表达显著减弱；而3组均未检测到STIM1、NF-κB蛋白表达。④与LPS组比较，PDTC 1 mg/L组TNF-α水平显著降低（ng/L：0.60±0.24比1.77±0.66，P〈0.01），PDTC 0.1 mg/L和1 mg/L组及psiTLR 12 h组IL-6水平显著降低（ng/L：232.10±63.54、134.32±37.23、284.23±56.14比510.22±89.23，均P〈0.05），PDTC 1 mg/L组和psiTLR 12 h组NF-κB、STIM1的mRNA表达水平均明显下降〔NF-κB mRNA（2-ΔΔCt）：17.22±2.35、13.24±3.54比30.16±2.06，STIM1 mRNA（2-ΔΔCt）：12.57±2.43、12.21±2.46比25.12±2.02，均P〈0.05〕。结论TLR4、MD2、NF-κB信号及STIM1可调节LPS刺激HUVEC细胞Ca2＋内流及炎性介质水平；下调TLR4、NF-κB、STIM1能有效抑制LPS诱导血管内皮细胞钙超载损伤及炎症反应。

溶血磷脂酸受体2

溶血磷脂酸受体2(lysophosphatidic acid receptor 2,LPA2),也称内皮分化基因受体4(endothelial differentiation gene receptor 4,EDG4),是溶血磷脂酸G蛋白偶联受体类的一种,对溶血磷脂酸有较高亲和力,可介导多种细胞活动。近年研究发现,LPA2/EDG4在卵巢癌细胞中过表达,同时与乳腺癌、结直肠癌、动脉粥样硬化、呼吸道疾病、妊娠性高血压等有着密切关系。