壮药苦丁茶和罗汉茶提取物的体外抗肿瘤活性实验

目的考察苦丁茶叶和罗汉茶叶两种壮药70%乙醇提取物的体外抗肿瘤活性,为这两种壮药的综合应用研究提供实验依据。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测苦丁茶叶和罗汉茶叶的提取物对SGC-7901、SK-OV-3、7404、CNE-1及H460 5种肿瘤细胞株的抗肿瘤增殖作用,计算抑制率。结果苦丁茶叶和罗汉茶叶提取物对5种肿瘤细胞株均无明显的抑制作用,其抑制率均低于50%。结论此研究结果为苦丁茶叶和罗汉茶叶的应用评价提供活性研究基础方面的依据。

黄杞叶总黄酮的提取纯化工艺优化及3种有效成分的含量测定

目的:优化黄杞叶总黄酮的提取与纯化工艺,并建立其中3种有效成分的含量测定方法。方法:以落新妇苷的提取转移率为指标,采用单因素试验对提取工艺中的提取溶剂、提取方式、渗漉溶剂乙醇的体积分数、渗漉料液比、渗漉前浸泡时间、渗漉速度和AB-8树脂纯化工艺中洗脱剂乙醇的体积分数进行考察,并采用正交试验优化提取工艺。采用高效液相色谱法对纯化后黄杞叶总黄酮中3种有效成分(落新妇苷、花旗松素、黄杞苷)进行含量测定。结果:优化后的黄杞总黄酮的提取工艺为以70%乙醇体积为提取和渗漉溶剂,采用渗漉法提取,渗漉前浸泡8 h,渗漉料液比1∶16(g/ml),渗漉速度30 ml/(min·kg);纯化工艺为取渗漉液加水稀释至0.5 g(生药)/ml,乙酸乙酯萃取,萃取液蒸干后以50%乙醇溶解,AB-8树脂上样,50%乙醇洗脱,浓缩、干燥;验证试验中落新妇苷提取转移率>80%(RSD=0.42%,n=3)。纯化后黄杞叶总黄酮中落新妇苷、花旗松素、黄杞苷的含量分别为57.94%、3.72%、2.83%,三者含量之和占总黄酮的64.00%。结论:建立的提取和纯化工艺稳定、合理、可靠;黄杞叶总黄酮中3种有效成分的含量测定方法准确、简单、重复性好。

高效液相色谱法测定罗汉茶中落新妇苷的含量

目的建立高效液相色谱测定药材罗汉茶中落新妇苷含量的方法。方法选用色谱柱为L ichrospher C-18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-0.3%醋酸水溶液(v/v,45∶55);检测波长291 nm;流速1.0 mL.m in-1;柱温25℃。结果落新妇苷进样量在0.182~1.093μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9995,n=6);落新妇苷的加样回收率为98.60%(RSD=2.49%)。结论该法简便、准确、可靠,可用于罗汉茶药材的质量控制。

HPLC-一测多评法同时测定壮药罗汉茶中6种黄酮类成分及多元统计分析

目的:建立同时测定罗汉茶中新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、槲皮苷和黄杞苷含量的方法,并进行多元统计分析。方法:采用高效液相色谱-一测多评法。色谱柱为Phenomenex SuperLu C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(19∶81,V/V),检测波长分别为254 nm(新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、黄杞苷)、291 nm(槲皮苷),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL。以落新妇苷为内参物,计算其他5种成分的相对校正因子,再根据相对校正因子计算各成分的含量,并与外标法进行比较;采用SPSS 22.0软件进行聚类分析和主成分分析。结果:新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、槲皮苷和黄杞苷检测进样量的线性范围分别为0.007~0.311、0.871~18.184、0.002~0.119、0.052~1.251、0.105~2.202、0.020~2.319μg(r>0.999);精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于3%;平均加样回收率分别为97.32%、94.89%、97.15%、96.90%、97.52%、97.53%(RSD为1.09%~2.60%,n=6)。新落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、槲皮苷、黄杞苷相对于落新妇苷的平均相对校正因子分别为1.2526、1.1983、0.9586、0.8071、1.1381。一测多评法测得新落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、槲皮苷、黄杞苷等5种成分的含量分别为0.3942~2.0672、0.1391~0.8047、2.8648~8.5548、4.5812~11.3711、1.0289~13.4015 mg/g;外标法测得新落新妇苷、落新妇苷、新异落新妇苷、异落新妇苷、槲皮苷和黄杞苷等6种成分的含量分别为0.3672~1.9253、46.3611~126.3421、0.1381~0.7988、2.9662~8.8578、4.6425~11.5233、0.9706~12.6419 mg/g;两种方法含量测定结果的相对误差均不高于3.55%。聚类分析结果显示,9批罗汉茶样品可聚为两类,S8聚为一类、其余聚为一类。主成分分析结果显示,前2个主成分的累计方差贡献率为84.745%,分类结果与前者一致。结论:所建高效液相色谱-一测多评法准确、可行,重复性良好,可用于罗汉茶中6种黄酮类成分的同时测定,并可为其质量控制提供参考。

黄杞叶黄酮类成分的研究

目的研究黄杞叶中的黄酮类成分。方法综合采用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱及制备型高效液相色谱法,对黄杞叶中的黄酮类成分进行分离纯化,根据理化性质并结合UV、HPLC/Q-TOF-ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HMBC数据及文献进行结构鉴定。结果分得了6个化合物,分别鉴定为落新妇苷(化合物Ⅰ)、黄杞苷(化合物Ⅱ)、槲皮苷(化合物Ⅲ)、(2R,3R)5,7,3',4'-四羟基二氢黄酮-3-氧-α-L-鼠李糖(3→1)-β-D-葡萄糖苷(化合物Ⅳ)、(2R,3R)5,7,4'-三羟基二氢黄酮-3-氧-α-L-鼠李糖(3→1)-β-D-葡萄糖苷(化合物Ⅴ)、(2R,3R)-5,7,4',5'-四羟基二氢黄酮-3-氧-(3"-氧-没食子酰基)-α-L-鼠李糖苷(化合物Ⅵ)。结论化合物Ⅴ为首次从该植物中得到,也是新化合物。

广西地产黄杞叶指纹图谱研究

目的建立广西地产黄杞叶指纹图谱检测方法,为提高黄杞叶的质量控制提供依据。方法采用Diamonsil-C18(2)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,C18(4.6 mm×15 mm,5μm)为保护柱,乙腈-0.05%磷酸溶液(19∶81)为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长240 nm,进样量10μL,柱温30℃,分析时长60 min;采用中国药典委员会组织编制的中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版(2004)计算相似度。结果该指纹图谱测定方法具有很好的重复性和稳定性,符合指纹图谱相关要求,且操作简便、快速;11批样品指纹图谱可检测出11个相对位置稳定的共有峰,且各批样品指纹图谱与建立的对照指纹图谱之间的相似度均在0.95以上。结论本方法简便、快速而且准确、可靠,可用于黄杞叶的质量控制。

黄杞叶提取物对小鼠造血系统辐射损伤的防护作用

目的研究黄杞叶提取物对一次性全身4 Gy137Cs γ射线照射导致的小鼠造血系统辐射损伤的防护作用。方法 (1)体外实验。采用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)和2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基体外清除实验检测黄杞叶提取物的体外抗氧化能力。(2)体内实验。①存活实验。将40只无特定病原体(SPF)级雄性C57BL/6小鼠按照区组随机法平均分为4组:照射组、照射+黄杞叶提取物低剂量(20 mg/kg)组、照射+黄杞叶提取物中剂量(40 mg/kg)组、照射+黄杞叶提取物高剂量(80 mg/kg)组, 4组均进行全身一次性7.2 Gy(致死剂量)137Cs γ射线照射, 记录照射后30 d小鼠的存活情况。②造血系统辐射损伤防护实验。将60只SPF级雄性C57BL/6小鼠按照区组随机法平均分为6组:对照组、照射组、黄杞叶提取物高剂量组(80 mg/kg)、照射+黄杞叶提取物低剂量(20 mg/kg)组、照射+黄杞叶提取物中剂量(40 mg/kg)组、照射+黄杞叶提取物高剂量(80 mg/kg)组, 其中对照组和黄杞叶提取物高剂量组不照射, 其余4组均进行一次性全身4 Gy137Cs γ射线照射。照射后第7天处死小鼠, 取外周血进行血常规检测, 取单侧股骨骨髓细胞进行骨髓有核细胞计数, 取另一侧股骨骨髓细胞进行骨髓DNA含量检测, 取胸腺和脾脏计算脏器指数, 取肝脏检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量。体内实验中各组小鼠均于照射前7 d和照射后6 d连续灌胃给药, 其中对照组和照射组给予0.5%羧甲基纤维素钠, 其余各组给予相应剂量的黄杞叶提取物。组间两两比较采用Studentt检验, 存活率采用Kaplan-Meier生存分析。结果 (1)在体外实验中, 当浓度分别为100 μg/ml和200 μg/ml时, 与Trolox相比, 黄杞叶提取物对DPPH自由基的清除率更高(89.83%对69.37%, 90.94%对68.53%);对ABTS自由基的清除率也更高(94.81%对71.35%, 94.46%对71.93%), 且差异均有统计学意义(t=19.58~33.26, 均P<0.001)。(2)在体内实验中, 与照射组相比, 照射+黄杞叶提取物低、中、高剂量组小鼠30 d存活率均明显升高, 且差异均有统计学意义(Kaplan-Meier生存分析, 均P<0.05), 存活天数亦均明显增加[(19.40±7.70)d对(12.50±3.59)d、(20.20±8.48)d对(12.50±3.59)d、(20.90±7.96)d对(12.50±3.59)d ], 且差异均有统计学意义(t=2.57、2.79、3.04, 均P<0.05);照射+黄杞叶提取物高剂量组小鼠脾脏和胸腺的脏器指数明显升高[(2.13±0.43)mg/g对(1.67±0.20)mg/g、(1.87±0.39)mg/g对(1.39±0.31)mg/g] , 且差异均有统计学意义(t=3.00、3.03, 均P<0.05);照射+黄杞叶中剂量组小鼠红细胞数量增加最为明显[(10.12± 1.71)×1012/L对(8.26±0.87)×1012/L], 且差异有统计学意义(t=2.89, P<0.05);照射+黄杞叶提取物高剂量组小鼠白细胞、红细胞数量明显增加[(1.76±0.45)×109/L对(1.17±0.23)×109/L、(9.59±0.85)×1012/L对(8.26±0.87)×1012/L], 血红蛋白含量亦明显升高[(144.40±14.61)g/L对(126.20±13.16)g/L] , 且差异均有统计学意义(t= 3.62、3.23、2.93, 均P<0.05);此外, 照射+黄杞叶提取物高剂量组小鼠骨髓有核细胞数量、骨髓DNA含量和肝脏还原型GSH含量均明显升高, 且差异均有统计学意义(t=3.28、3.93、3.07, 均P<0.05)。结论黄杞叶提取物对小鼠造血系统辐射损伤有一定的防护作用。