骨形态蛋白9诱导干细胞骨向分化与环氧酶-2及PI3K/Akt的关系研究

目的研究骨形态蛋白9(BMP9)诱导干细胞成骨分化过程中对PI3K/Akt信号的激活与环氧酶-2(COX-2)的关系。方法利用组织化学染色法、化学发光法或定量PCR检测碱性磷酸酶(ALP)的水平,Western blot检测骨桥素(OPN)、骨钙素(OCN)、COX-2、Akt1/2和磷酸化Akt1/2(pAkt1/2)水平,RT-PCR检测COX-2的表达,用免疫组化或免疫荧光分别检测COX-2的表达水平以及Akt1/2的磷酸化水平,用茜素红染色检测钙盐沉积。结果 BMP9在C2C12细胞中明显增加ALP活性,促进OPN和OCN表达以及钙盐沉积;BMP9对Akt1/2总蛋白无明显影响,能明显增加Akt1/2磷酸化水平,PI3K抑制剂呈浓度依赖性减弱BMP9诱导ALP活性增加。BMP9在C2C12细胞中促进COX-2表达,抑制COX-2明显减弱BMP9在C2C12细胞中诱导ALP活性增加和钙盐沉积的作用。外源性过表达COX-2促进BMP9诱导p-Akt1/2水平增加,而抑制COX-2则明显减弱BMP9诱导Akt1/2磷酸化水平增加。结论 BMP9在诱导干细胞成骨化过程中对PI3K/Akt信号的激活可能与其促进COX-2表达有关。

生长激素释放肽6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路蛋白表达的影响

目的研究生长激素释放肽(GHRP)-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路蛋白表达的影响及保护作用机制。方法清洁级SD大鼠100只随机分为正常对照(A)组、假手术(B)组、模型(C)组和GHRP-6治疗(E)组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心力衰竭模型,免疫组化法(SABC)检测各组左心室心肌细胞PI3K p110α、Akt p-Ser308和Caspase-9的表达情况。结果 C组左心室心肌细胞中PI3K p110α和Akt p-Thr308阳性表达量较A组、B组显著降低(P<0.05),D组较C组显著升高(P<0.05);C组Caspase-9阳性表达量较A组、B组显著增加(P<0.05),D组较C组显著降低(P<0.05)。结论 GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9信号转导途径来发挥其保护心肌的作用。

沉默MMP-9对喉癌细胞侵袭、迁移及PI3K/Akt磷酸化水平的影响

目的观察沉默基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对喉癌细胞侵袭、迁移及PI3K/Akt磷酸化水平的影响。方法收集2018年3月—2019年3月河北省沧州市中心医院耳鼻喉科诊治喉癌患者20例的术后癌组织和癌旁组织,将HEp2细胞分为Control组、siRNA Control组和MMP-9 siRNA组。采用qRT-PCR检测MMP-9 mRNA表达,MTT法检测HEp2细胞增殖,流式细胞术实验检测HEp2细胞凋亡,Transwell实验检测HEp2细胞侵袭,伤口愈合实验检测HEp2细胞迁移,Western-blot分析检测PI3K/Akt蛋白磷酸化水平。结果喉癌组织中的MMP-9 mRNA表达明显高于癌旁组织(t/P=11.237/0.001)。MMP-9 siRNA组的HEp2细胞增殖能力显著低于Control组和siRNA Control组(t/P=5.382/0.005、5.146/0.007),HEp2细胞凋亡能力明显高于Control组和siRNA Control组(t/P=8.643/0.001、8.237/0.001),HEp2细胞侵袭能力显著低于Control组和siRNA Control组(t/P=7.673/0.001、6.792/0.002),HEp2细胞愈合度显著低于Control组和siRNA Control组(t/P=6.882/0.003、6.513/0.005),p-PI3K和p-Akt蛋白水平显著低于Control组和siRNA Control组(t/P=9.459/0.001、8.736/0.001、6.873/0.001、6.694/0.001)。而Control组与siRNA Control组比较,上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论MMP-9在喉癌组织中高表达,沉默MMP-9能够抑制HEp2细胞的增殖、侵袭、迁移,促进HEp2细胞的凋亡,沉默MMP-9可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路来减缓喉癌的发展。

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的 探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法 以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH分三个剂量：10^-8、10^9和10^-12。mol／L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min；10^-8mol/L 1，25-（OH）2，-D3，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂时照为0．1％乙醇；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂对照亦为0．1％乙醇。运用RT-PCR方法 进行CaBP-D9k mRNA测定，以GAPDH作为内对照。结果 10^-8mol／LPTH作用20rain，10^12mol／L作用10min，CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组，其余时间点低于空白组；10^-8mol／L 1，25-（OH）2．D，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，CaBP．D9kmRNA的表达均高于溶剂对照（0、1％乙醇）；与10^-8mol／L1，25．（OH）2-D3单独作用比较，10^-8mo/L 1，25-（OH）2-D3，联合以上三剂量PTH作用，CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论 10^-8mol／L、10^-12mol/L PTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时（1～20min）合成增加；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达；PTH可能抵消或者抑制1，25-（OH）2，-D3，促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109～145)的构建

目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5。

MAP3K9对奶牛乳腺上皮细胞增殖及乳蛋白合成的影响

以奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9(MAP3K9)对细胞增殖和β-酪蛋白(CSN2)合成的影响。对细胞进行蛋氨酸刺激,检测细胞增殖及细胞中CSN2和MAP3K9的表达。过表达或抑制MAP3K9,检测细胞增殖及细胞中CSN2,MAPK1,p-MAPK1,m TOR和p-m TOR的表达。过表达MAP3K9且抑制MAPK1,检测细胞增殖与细胞中m TOR、p-m TOR和CSN2的表达。结果表明:蛋氨酸刺激使细胞增殖及细胞中CSN2和MAP3K9的表达显著增加(p<0.01);MAP3K9过表达或抑制时,细胞增殖及细胞中CSN2,MAPK1,p-MAPK1,m TOR和p-m TOR的表达均显著增加或降低(p<0.01),但抑制MAPK1时,过表达MAP3K9不能使细胞增殖及细胞中m TOR,p-m TOR和CSN2的表达增加。结果表明,作为一个调节因子,MAP3K9能通过激活细胞中的MAPK1来激活m TOR通路,正向调控奶牛乳腺上皮细胞增殖与乳蛋白合成。

银杏叶提取物通过VEGF/PI3K/Akt1信号通路改善大鼠创伤性脑水肿

目的观察银杏叶提取物(EGb761)治疗大鼠急性创伤性脑水肿的效果,探讨其可能机制。方法将64只SD大鼠随机分至假手术组(A组)、创伤性脑损伤(TBI)+等剂量生理盐水组(B组)、TBI+低剂量EGb761(C组)、TBI+高剂量EGb761(D组)各16只。采用Feeney自由落体致伤法建立大鼠顶叶局灶皮质挫裂伤模型,其中C组和D组,在创伤1 h后,分别给予EGb761(25、50 mg/kg)处理。采用干湿重法检测脑组织含水量,超氧化物阴离子荧光探针(DHE)染色观察氧自由基表达水平,Western印迹检测血管内皮生长因子受体(VEGFR)2、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)1和基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平。结果与A组相比,B、C、D组均出现脑水肿,氧自由基、VEGFR2、PI3K、Akt1和MMP-9表达水平明显上升(P<0.05);与B组相比,C组和D组在EGb761处理后脑水肿程度明显改善(P<0.05);且D组比C组显著降低(P<0.05)。结论EGb761能有效改善创伤性脑水肿,且有剂量依赖性,其机制可能是通过清除氧自由基,降低VEGFR2、PI3K、Akt1和MMP-9的表达水平。

组蛋白乙酰化修饰调控NF-κB驱动的PNPLA3基因表达的机制初探

目的探讨禁食/再喂食后小鼠肝脏Patatin样磷脂酶域蛋白3(PNPLA3)基因启动子核因子-κB(NF-κB)结合区域组蛋白H3K9乙酰化(H3K9ac)水平以及相关去乙酰化酶(HDAC)和乙酰化转移酶(HAT)的变化特点。方法根据体质量将18只C57BL/6小鼠随机分为3组各6只,分别为自由饮食组、禁食组(夜间饥饿24 h)和再喂食组(饥饿24 h后再自由摄食高蔗糖含量饲料12 h),分别予自由饮食、禁食和禁食后再喂食干预,检测并比较各组肝脏PNPLA3、NF-κB、HDAC(SIRT1、SIRT6)和HAT(GCN5、Elp3)基因表达情况,用染色质免疫共沉淀-定量PCR检测H3K9ac富集水平,并分析H3K9ac与PNPLA3表达的相关性。结果 3组比较,C57BL/6小鼠肝脏PNPLA3、NF-κB基因表达在禁食时下调,再喂食后又上调(P均<0.001)。H3K9ac水平变化与PNPLA3变化趋势一致(P均<0.05),相关分析提示两者具有相关性(rs=0.958, P <0.001);禁食组SIRT1和SIRT6表达水平较自由饮食组高,再喂食组两者水平均下降(P均<0.05),与H3K9ac变化趋势相反;GCN5、Elp3表达变化与SIRT1及SIRT6类似(P均<0.05)。结论 SIRT1和SIRT6相关H3K9去乙酰化涉及饮食调节NF-κB驱动的PNPLA3的表达。

大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡影响及其机制探讨

目的：探讨大蒜素对人白血病细胞系K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养的K562细胞,用不同浓度大蒜素处理24、48、72 h,MTT法测定其对K562细胞增殖的影响;大蒜素（浓度分别为3、6、12μg/m L）处理K562细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,western blot法检测p16、p27基因表达情况。结果：大蒜素（浓度3~24μg/m L）能抑制K562细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;大蒜素（浓度分别为3、6、12μg/m L）作用K562细胞48 h后,细胞凋亡率分别为13.5%、21.4%、34.6%,对照组凋亡率为2.2%;Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加;p16、p27的表达升高,呈剂量依赖性。结论：大蒜素能抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16、p27基因的表达,增加细胞Casepase-3、Casepase-9活性及降低线粒体膜电位有关。大蒜素是一种前景广阔的抗肿瘤药物。

结核杆菌侵染破骨细胞对骨质破坏相关因子表达影响的体外研究

目的:建立结核杆菌侵染破骨细胞(osteoclasts,OC)模型,探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响。方法:采集健康志愿者的外周全血,分离出外周全血中的单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)诱导使其成为OC,对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色。将已经构建好的具有卡那霉素(Kana)抗性的H37Rv pMV261-GFP绿色荧光结核菌株进行复苏并加入10%的油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶添加剂(oleic albumin dextrose catalase,OADC)、7H9以及含卡那霉素的结核杆菌专用液体培养基进行培养,放置于37℃的恒温箱中培养至光密度(optical density,OD)值为600nm时的0.5左右备用;以单纯OC培养为空白对照组;用结核杆菌以不同转染复数(multiplicity of infection,MOI)侵染OC 24h,采用MTT比色法检测细胞存活率最高的MOI为后续实验MOI,使用H37Rv以此MOI侵染OC为实验组;荧光显微镜及结核杆菌抗酸染色分别观测实验MOI时结核杆菌转染情况。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测非受体酪氨酸激酶(C-src)、蛋白激酶K(cathepsin K,CK)、碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2,CA2)、整合素-β3(integrin-β3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况;免疫组化(immunohistochemistry)检测磷酸化酪氨酸激酶产物(P-src)、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的细胞表面蛋白表达情况;蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测P-src、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的蛋白表达水平。结果:TRAP染色显示细胞培养15d后90%以上为OC,可以用于进行实验。荧光结核杆菌成功将其OD值培养为600nm时的0.5。MTT比色法结果显示:在MOI为20∶1时细胞存活率最高(P<0.05),此为实验组MOI;结核杆菌侵染OC后荧光显微镜显示:MOI为20∶1时,绿色荧光标记的结核杆菌进入OC,说明成功转染OC;结核杆菌侵染OC后抗酸染色结果显示:MOI为20∶1时,被染成红色的抗酸结核杆菌进入OC,说明结核杆菌H37Rv成功转染OC。qRT-PCR、细胞免疫组化、WB检测结果均显示:MMP-9、CK、C-src、CA2、Integrin-β3的表达实验组均高于空白对照组(P<0.05)。结论:结核分枝杆菌能够转染OC;与空白对照组相比,结核杆菌转染OC的实验组中5种具有骨质破坏作用因子均升高,提示结核骨质破坏可能与此相关,为骨结核疾病诊疗提供新的探索方向。

耐铜苏丹草根内生细菌的分离筛选及其生物学特性研究

从生长在铜矿废弃地土壤中的Cu耐性苏丹草根中分离筛选到二株产1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）脱氨酶内生细菌K1-6和K3-9菌株,并对菌株生物学特性进行了研究。菌株K1-6和K3-9具有较强的Cu抗性和多种抗生素抗性,菌株K1-6和K3-9能够溶磷和分泌吲哚乙酸（IAA）,另外,菌株K3-9还能够产生铁载体和精氨酸脱羧酶,菌株K1-6和K3-9对温度、p H和盐浓度具有一定的耐受性,经16S r DNA序列分析,菌株K1-6和K3-9分别被鉴定为根瘤菌属（Rhizobium sp.K1-6）和肠杆菌属（Enterobacter aerogenes K3-9）。采用平皿培养试验研究了菌株K1-6和K3-9对生长在不同浓度Cu（0、4 mg/L）环境中的苏丹草的生长和吸收Cu的影响。结果表明,接菌处理苏丹草根部和地上部干重分别比对照增加了10.6%~45.5%和13%~40%,差异达显著水平（P〈0.05）;接菌株K1-6处理苏丹草根部和地上部Cu含量比对照增加了46%和85%（P〈0.05）,而接菌株K3-9处理苏丹草根部和地上部Cu含量与对照相比没有显著差异。另外,接菌株K1-6处理苏丹草根部和地上部总Cu吸收量比对照增加了88%和114%（P〈0.05）,接菌株K3-9处理苏丹草根部总Cu吸收量比对照增加了44%（P〈0.05）。另外,接菌株K1-6和K3-9处理的苏丹草根部吸收的Cu是地上部吸收Cu的16~23倍。研究表明,分离自耐铜苏丹草根部的内生细菌具有多种植物促生特性,能够显著促进苏丹草的生长、提高苏丹草对Cu的耐受性,并强化苏丹草根部对Cu的富集能力。另外,不同的内生细菌对苏丹草的生长、富集和耐受Cu的影响不同。

补阳还五汤对脑出血大鼠模型相关蛋白表达的作用

目的:研究补阳还五汤对脑出血大鼠模型基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、谷氨酸(Glu)及PI3K、AKT表达的作用。方法:选取90只SD大鼠,以随机抽签法分成模型组、正常对照组及补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组建立脑出血模型,造模后第2 d。补阳还五汤组行补阳还五汤灌胃,模型组行生理盐水灌胃,给药14 d。比较3组MMP-9、TIMP-1、Glu,脑组织PI3K、AKT以及Bcl-2、BAX蛋白表达。结果:补阳还五汤组、模型组的MMP-9、TIMP-1、Glu均高于正常对照组,且补阳还五汤组MMP-9、Glu低于模型组,而TIMP-1高于模型组(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较正常对照组更高,补阳还五汤组脑组织PI3K、AKT蛋白表达较模型组更高(均P<0.05);补阳还五汤组、模型组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达均高于模型组,补阳还五汤组脑组织Bcl-2、BAX蛋白表达较模型组更高(均P<0.05)。结论:补阳还五汤可改善脑出血大鼠MMP-9、TIMP-1、Glu,可由激活PI3K/AKT信号转导通路,调控Bcl-2、BAX表达,继而发挥保护脑组织作用。

基于PI3K/Akt通路探讨电针对创伤性颅脑损伤大鼠脑神经细胞凋亡的影响

目的:观察电针对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑神经细胞凋亡的影响,探讨电针改善TBI的脑神经功能作用机制。方法:将88只6周龄SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(TBI组)、模型+电针组(TBI+EA组)、阻断+模型+电针组(LY294002+TBI+EA组),每组22只。采用改良Feeney′s自由落体打击法制备左侧TBI大鼠模型。于建模后24 h,TBI+EA组、LY294002+TBI+EA组大鼠采用电针干预,针刺"百会"留针10 min,点刺"水沟"20 s,右侧"内关""足三里"连接电针,予断续波,频率2 Hz,电流强度1 mA,留针10 min,每天1次,连续干预3 d。干预3 d后,TUNEL法检测左侧脑皮质神经细胞凋亡水平;Western blot法检测大鼠左侧脑皮质区丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达。结果:干预3 d后,与Sham组比较,TBI组左侧脑皮质损伤区域神经细胞凋亡数增加(P<0.01),Bax、Cyt-C、Caspase-9蛋白表达升高(P<0.01),p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01);与TBI组比较,TBI+EA组大鼠左侧脑皮质损伤区域神经细胞凋亡数减少(P<0.01),Bax、Cyt-C、Caspase-9蛋白表达降低(P<0.01),p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01);与LY294002+TBI+EA组比较,TBI+EA组大鼠左侧损伤区域脑皮质神经细胞凋亡数减少(P<0.01),Bax、Caspase-9、Cyt-C蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05),p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)。结论:电针可明显减轻创伤性颅脑损伤大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

哈达威看市场

新年到了，要不了多久大家就要放寒假了，但愿大家在期末考试中能有好成绩，这样购买或升级电脑就有希望了!目前电脑硬件的价格比较稳定，由于新品不断推出，各配件价格有所下降，大家放假后就可以去购买了。但春节后的一个月里通常会有一个缺货期，这期间的价格通常会有一定幅度的上涨，因此，想要购买或升级电脑的同学要提前准备，避开这个涨价期。

补肾活血方对宫腔粘连患者子宫动脉阻力及经血中细胞外基质降解相关因子的影响

目的:通过观察宫腔粘连(IUA)患者月经血中细胞外基质(ECM)降解相关因子表达水平的变化,评估补肾活血方在宫腔修复过程中的作用。方法:选择2018年9月—2020年9月于上海中医药大学附属曙光医院因IUA入院行宫腔粘连分解手术(TCRA)患者49例,随机分为中药组(24例)和对照组(25例)。TCRA术后,两组均激素治疗,中药组在对照组基础上添加补肾活血方治疗,于TCRA术前1个月经周期及术后第3个月经周期,第2~3天留取经血,比较治疗前后月经量情况,排卵日阴道超声监测子宫内膜厚度及子宫动脉阻力指数(RI),RT-PCR检测两组月经血组织物中PI3K、MMP-9、TIMP-1、COL1A1 mRNA表达水平。结果:TCRA术后中药组内膜厚度较对照组增厚(P<0.05),RI较对照组降低(P<0.05),经血组织中MMP-9、PI3K mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。结论:补肾活血方可上调子宫内膜MMP-9、PI3K的表达,达到抑制ECM沉积,促进子宫内膜血管新生的作用,有助于增加IUA患者术后子宫内膜厚度,改善子宫内膜血流,预防宫腔再次粘连。