灰树花水溶物对EV71病毒的抑制作用

【目的】探讨灰树花水溶物(GFWE)的化学成分及其对EV71病毒的抑制作用,为促进灰树花综合利用、提高其经济附加值,以及开发预防和治疗EV71病毒感染的功能性食品提供依据。【方法】采用色谱法测定了GFWE的主要化学成分组成、多糖组成和分子质量。基于体外细胞培养采用CCK-8法确定了GFWE的安全上样量;以EV71病毒感染Vero细胞为模型,探究GFWE对EV71病毒的抑制率及对Vero细胞形态的影响,并采用荧光定量PCR检测了EV71病毒衣壳蛋白(VP1)编码基因mRNA的表达水平,初步评价了GFWE对EV71病毒的抑制作用。【结果】GFWE主要由低分子质量多糖、氨基酸、肽及其衍生物组成。GFWE富含的13种氨基酸中包含7种必需氨基酸;其多糖由葡萄糖、半乳糖、盐酸氨基葡萄糖和古罗糖醛酸4种单糖组成,物质的量比为0.907∶0.038∶0.029∶0.026,重均分子质量分别为15.67、10.10、6.60 ku和<1.00 ku。GFWE表现出较高的抗EV71病毒活性,100、200μg·mL^(-1) GFWE对EV71病毒的抑制率分别为91.32%、91.83%,25~400μg·mL^(-1) GFWE能显著降低EV71 VP1 mRNA的表达水平。【结论】GFWE主要由低分子质量多糖、氨基酸、肽及其衍生物组成,具有较高的抗EV71病毒活性,能够抑制感染EV71病毒的Vero细胞中VP1的合成。

T淋巴细胞亚群、炎症因子在感染EV71的手足口病患儿病情评估中的应用

目的研究T淋巴细胞亚群、炎症因子在感染EV71的手足口病患儿病情评估中的应用。方法选取2022年3月至2023年3月我院收治的78例感染EV71的手足口病患儿为研究对象,根据潜伏期患儿疾病严重程度分为观察组(重症病例)和对照组(普通病例)各39例。两组均检测T淋巴细胞亚群、血清炎症因子水平,绘制受试者工作曲线(ROC)分析评估效能。结果观察组患儿的炎症因子水平高于对照组,CD3^(+)、CD4^(+)水平更低于对照组,CD4^(+)/CD8^(+)水平高于对照组(P<0.05);ROC结果显示:感染EV71的手足口病患儿IL-1、IL-6、TNF-α、CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)均存在病情评估价值(P<0.05,AUC>0.5)。结论不同病情感染EV71的手足口病患儿T淋巴细胞亚群及炎症因子存在差异,检测上述指标有助于临床病情评估。

学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗状况及家长对其接种意愿影响因素

目的:分析学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗状况及家长对其接种意愿影响因素。方法:研究选取本区2022年1月至2023年12月行健康体检学龄前儿童300例为研究对象,采集其疫苗接种状况,采用单因素及Logistic回归分析家长对学龄前儿童接种意愿影响因素。结果:300例学龄前儿童中,接种EV71型疫苗儿童71例,接种率23.67%。学龄前儿童EV71型疫苗接种情况单因素分析结果显示,学龄前儿童EV71型疫苗接种情况与性别、年龄、少儿医保、足月分娩、出生体质量、儿童来源以及是否顺产等因素无统计学意义(P>0.05);学龄前儿童家长对EV71型疫苗接种意愿单因素分析结果显示,学龄前接种EV71型疫苗儿童与未接种疫苗儿童的家长对手足口病认知程度、对EV71型疫苗了解程度、家长学历、家庭月收入等差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,家长对手足口病认知程度、对EV71型疫苗了解程度、家长学历、家庭月收入是影响其接种意愿的独立影响因素(P<0.05)。结论:学龄前儿童EV71疫苗接种率相对较低,家长对手足口病及EV71疫苗的了解程度、家长学历以及家庭月收入等是影响家长对学龄前儿童接种EV71疫苗意愿的独立影响因素。

HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

梧州市城区5岁以下儿童家长手足口病认知与EV71疫苗接种意愿调查研究

调查研究梧州市城区5岁以下儿童家长对手足口病的认知水平与EV71疫苗接种意愿。方法 调查研究起于2021.05,止于2022.05,通过整群随机抽样从梧州市城区12家社区卫生服务中心抽取8家,对卫生服务中心接种门诊日当天带领儿童前来接受预防接种的5岁及以下儿童家长进行面访,填写调查问卷。本次共调研对象1663人。调查内容为儿童家长手足口病认知情况,并分析影响其疫苗接种意愿的影响因素。结果 梧州市城区5岁以下儿童家长对手足口病的认知水平一般,有待接受健康教育,提升相关知识知晓率。有近84%的家长愿意带领孩子接种EV71型疫苗,表示多数家长的预防意识较强。结论 手足口病是危害幼儿的主要传染疾病之一,为保障孩子健康生长和发育,家长应当积极了解疾病相关知识,提高认知水平,并通过多种渠道了解疾病及其预防措施,主动带领幼儿接种EV71疫苗,能够实现良好的预防效果。

直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

EV71可感染幼龄中缅树鼩

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长类动物的可行性。实验分别采用灌胃、滴鼻和尾静脉注射3种方式,感染3月龄树鼩,定期观察动物临床症状和血常规变化和定期采集血液和粪便样品,并使用中和抗体试验、reverse transcription-PCR(RT-PCR)和Real-TimePCR等技术,检测相关样品中和抗体效价、病毒核酸及载量变化。结合组织病理学检查,分析感染病变特点。研究结果发现,实验组树鼩体温在第4天前后开始升高,白细胞、淋巴细胞也有类似趋势;3种攻毒方式均可检测到病毒载量,峰值出现在第10天前后,灌胃途径尤为明显,血清的最大中和抗体效价为1:16。感染EV71病毒的树鼩2周左右出现急性松弛性瘫痪,大体解剖发现伴有尿潴留症状,组织病理学检查发现在脑、肺、肠、脾脏、肾脏等部位发生病变。结果表明,EV71病毒通过灌胃、滴鼻和静脉注射3种方式均可以感染中缅树鼩,并使之出现神经系统及相关病变,该实验为将来研究EV71感染树鼩致病机理、建立手足口病树鼩动物模型奠定了理论基础。

阜阳市手足口病(EV71感染)疫情流行病学分析

目的分析阜阳市手足口病(EV71感染)疫情的特点。方法根据疫情数字及病原学检测结果进行研究。结果截止到5月31日此次疫情共报告患者7470例,发病率89.35/10万;死亡23例,病死率0.31%。患者年龄为28天～30岁,高发年龄组为≤5岁组,发病7184例,占92.70%;发病率(数)以阜阳市三区最高,平均为221.17%/10万,发病数占总数的53.57%,颍上县最低(43.46/10万);发病高峰为4月28日。对161例患者的咽试子等标本进行EV71核酸检测,阳性97例,阳性率60.25%,在31例患者中分离到13株EV71病毒。结论此次手足口病由肠道病毒EV71型所致。

EV71型手足口病乳鼠动物模型的建立及免疫、内分泌及病理特征研究

目的建立EV71型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。方法将临床分离的EV71病毒株经蚀斑纯化,3T3细胞适应,乳鼠驯化,最终获得1株能致死7日龄乳鼠的EV71毒株,命名为BJ09/07(GenBank Accession NO.JQ319054,EV71-BJ)。EV71-BJ感染7日龄ICR乳鼠后,观测临床疾病得分、体质量变化、死亡率并测定病毒载量、免疫分子、内分泌水平、组织病理损伤等病毒、免疫、内分泌、病理指标。结果 EV71-BJ毒株感染7日龄ICR乳鼠,其病毒毒力为150 LD50/ml,感染后不同时期肌肉病毒载量均高于脑中,至第4天达到高峰,后不断下降。至感染后第6天发病达高峰时做病理检测,相对于脑组织,肌肉中有更严重的淋巴细胞浸润,引起更严重的炎性分子升高。肌肉研磨液和血清中MCP-1、IFN-γ、IL-6和TNF-α显著升高,而肾上腺素和皮质醇未见明显变化。结论初步建立了EV71型手足口病乳鼠动物模型,为药物筛选、疫苗研发及免疫机理研究奠定了基础。

阜阳市手足口病(EV71感染)重症病例流行病学调查分析

目的探讨EV71感染重症病例流行病学特征，早期发现病例，降低病死率。方法重症病例由定点医院临床专家根据诊断标准进行诊断；由具有流行病学调查经验的疾控人员使用统一调查表格进行个案调查；患者标本采用巢式PCR法快速检测；疫情资料来源于回顾性搜索及疫情监测13报和中国疾病预防控制信息系统。结果截止5月31日，全市共发病7470例，发病率为89．35／10万，其中重症病例111例，重症病例占发病总数的（以下简称病重率）为1．49％。太和县病重率最高。重症病例最早发病时间为3月23日，4月30日为高峰，主要集中在4月17日～5月11日。死亡病例主要发生在4月15日以前（18例）。重症病例男女之比为1．85：1；发病年龄最小为3月龄，最大为6岁零6个月，以3岁及以下为主，多为散居儿童；首发症状以发热为主，其次是皮疹、发热伴皮疹；病程中症状以发热为主，发病至入院天数疫情公布前后有明显差异。检测EV71核酸（15份）阳性率为86．67％。结论完善疫情报告制度，提高医务人员诊治水平是降低病重、病死率的主要因素。

检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立

目的建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。方法利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到102拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。结论本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。

重组EV71和CVA16型手足口病双价VLP疫苗构建及免疫保护效果评价

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达EV71和CVA16的病毒样颗粒，并对纯化的重组EV71、CVA16双价病毒样颗粒疫苗进行免疫效果评价。方法构建重组杆状病毒Bacmid-P1-3CD，转染Sf9昆虫细胞，纯化EV71、CVA16的病毒样颗粒并检测其形态和生物特性；通过EV71、CVA16的病毒样颗粒免疫ICR雌鼠后，以EV71、CVA16强毒株腹腔攻击5日龄乳鼠，对重组EV71、CVA16型双价VLP免疫保护性进行评价。结果利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功构建并表达EV71和CVA16病毒样颗粒，颗粒大小约为23-30nm，存在Mr约39000VP1特异性蛋白表达。重组EV71、CVA16双价VLP疫苗免疫接种能够诱导小鼠机体产生高效价的特异性抗体（EV71中和抗体效价为1：960，CVA16中和抗体效价为1：624）并发挥优于单价VLP疫苗的有效免疫保护效果。结论重组EV71、CVA16型双价VLP疫苗免疫原性和保护性显著高于单价疫苗，为手足口病疫苗的研发提供了新的思路及实验基础。。

EV71型vP1蛋白表达、纯化及免疫原性的初步评价

目的运用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达新肠道病毒EV71 vP1蛋白(EV71vP1),并对EV71 vP1蛋白的免疫原性进行初步评价。方法利用RT-PCR技术获得EV71 vP1基因,将基因序列克隆到载体pFastBac HTA,通过转座反应,与Bacmid DNA重组,重组后转染Sf9昆虫细胞。采用透射电镜观察法、SDS-PAGE、Western-blot方法对vP1蛋白进行验证,利用ELISA、微量中和抗体方法对蛋白的免疫原性进行初步评价。结果 EV71 vP1蛋白相对分子量约为33KD,表达量约10mg/L;ELISA抗体效价为1∶900;中和抗体效价1∶800。结论利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功的表达了EV71 vP1蛋白,并对其免疫原性做了初步评价,为今后EV71 vP1亚单位疫苗的研究提供参考。

EV71感染手足口病患儿免疫功能研究及其临床意义

手足口病（HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病,5岁以下婴幼儿为易感人群,易于幼托机构流行。引起手足口病的肠道病毒包括肠道病毒71型（EV71）和A组柯萨奇病毒（CoxA）、埃可病毒的某些血清型。EV71感染手足口病流行在我国地区呈上升趋势,该病毒传染性强,隐性感染比例大,传播途径复杂,传播速度快,易引起暴发或流行。

肠道病毒EV71感染对T细胞免疫功能影响的研究

目的探讨肠道病毒EV71感染对T淋巴细胞系Jurkat细胞免疫功能的影响。方法首先,用RT-PCR和免疫荧光的方法检测EV71能否感染Jurkat细胞,其次用Annexin V-FITC试剂检测EV71感染后的Jurkat细胞凋亡的情况,最后用ELISA的方法分析感染后的Jurkat细胞分泌细胞因子的情况。结果 EV71能够感染Jurkat细胞,并能够引起Jurkat细胞的凋亡,同时EV71感染还能导致Jurkat细胞分泌细胞因子IL-2,IFN-γ,IL-6和IL-10的能力下降。结论 EV71病毒感染对机体免疫功能的影响是多方面的,它不但能够诱导T细胞的凋亡,还能引起T细胞分泌细胞因子的能力降低,从而在数量和功能上影响参与免疫应答的T淋巴细胞。

北京市房山区某幼儿园一起EV71引起的手足口病暴发疫情调查

目的调查一起发生在某幼儿园由肠道病毒71型（EV71）引起的手足13病暴发疫情，分析其暴发原因，探讨有效的预防控制措施。方法使用卫生部的《手足13病个案调查表》对所有发病病例进行现场流行病学调查，对数据进行描述性分析。结果该起疫情的发病儿童中以小龄童（2～3岁）为主，占87．50％（14／16）；发病高峰在2008年5月13日和5月14日；其中6例病例病毒分离结果为EV71阳性。结论手足13病易在幼儿园小龄组儿童中发生暴发流行；采取及时有效的防控措施可控制EV71引起的手足13病暴发疫情。

EV71型手足口病患儿外周血树突状细胞及细胞因子产生的调节机制研究

目的探讨肠道病毒EV71型感染对树突状细胞(DC)成熟凋亡、DC中信号传导通路激活、细胞因子释放的作用机制。方法收集肠道病毒EV71型感染患儿40例,分为20例轻症型组及20例重症型组,正常对照组儿童20例。流式细胞仪检测各组儿童外周血DC表面标志分子CD11c、CD86、CD80和CD83表达的百分比;采用Western blot法检测DC中MAPK信号传导通路分子磷酸化水平;ELISA法检测同期血清中细胞因子的水平。结果随着EV71感染程度的加深,外周血DC中标志着细胞成熟的表面标志分子水平均有增加,CD83及CD80尤为显著;MAPK信号传导通路的活化程度逐渐加强;细胞因子水平的表达显著升高。结论 EV71感染可促进树突状细胞成熟凋亡、激活MAPK信号传导通路并增加细胞因子的释放,MAPK信号传导通路在EV71感染的DC中发挥显著调控作用。

EV71手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素和颗粒酶B的变化

目的探讨肠道病毒7l型(EV71)手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素(PRF)和颗粒酶B(Grz B)的变化。方法选取某儿童医院2017年5—7月普通型、重型手足口病患儿(普通型组、重型组),健康儿童志愿者(正常对照组)各30例,采用流式细胞术测定外周血CD8^+T、NK细胞PRF和Grz B的表达水平,比较各组差异。结果与正常对照组相比,普通型组和重型组EV71手足口病患儿急性期两种细胞中PRF和Grz B的表达水平均升高,差异有统计学意义(均P <0. 05)。普通型组和重型组EV71手足口病恢复期患儿CD8^+T细胞PRF、Grz B的表达水平较急性期明显下降,但仍高于正常对照组(均P <0. 05)。NK细胞PRF、Grz B的表达水平:普通型组和重型组急性期比较,差异均无统计学意义(均P> 0. 05);普通型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期虽稍升高,但差异仍无统计学意义(均P> 0. 05);重型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期明显升高(均P <0. 05)。结论 CD8^+T、NK细胞PRF和Crz B在EV71手足口病发病中起着一定作用。

EV71感染相关神经源性肺水肿和心肺衰竭

肠道病毒71型（EV71）是手足口病病原之一。大多数手足口病呈良性经过,预后良好,但EV71有明显的嗜神经性,是引起手足口病重症病例的重要病原,可导致无菌性脑膜炎、脑炎、脑干脑炎、脑脊髓炎、脊髓灰质炎样综合征等神经系统病变。少数中枢神经系统受累严重的患者,病情可于短时间内迅速进展,发生肺水肿、肺出血以及循环衰竭等严重并发症,死亡率和致残率高。现重点介绍EV71感染相关神经源性肺水肿、心脏损害以及心肺衰竭的研究现状。