肺结核患者ELISPOT试验结果的影响因素分析

目的 本试验旨在分析肺结核患者酶联免疫斑点试验（ELISPOT）结果的影响因素.方法 选取西安市结核病胸部肿瘤医院住院患者共252例,其中肺结核患者130例,非结核患者122例.入院24小时内抽取患者清晨空腹抗凝静脉血,应用结核杆菌感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒进行斑点计数,并对结果进行影响因素进行分析.结果 酶联免疫斑点试验（ELISPOT）无论在男性患者与女性患者,≤16岁或＞60岁患者与16岁～60岁患者,胸部CT形成空洞患者与无空洞患者,病变范围＜2个亚段患者与≥2个亚段患者,试验结果显示均无显著性差异.结论 肺结核患者ELISPOT试验结果不受性别、年龄、空洞、病变范围等因素的影响.

一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用

目的探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)快速诊断结核病的价值。方法选取15例确诊为活动性肺结核的患者和100例入境人员的外周抗凝全血标本,采用ELISPOT检测试剂盒(T SPOT-TB)测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。结果TSPOT-TB检测结核病的敏感性为93.3%,特异性为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为81.8%。采用该方法检测的结核潜伏感染率与病例来源呈密切相关,而与年龄和性别无相关性。结论TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于结核感染的快速检测,但无法判断结核的活动性或潜伏感染。

治疗型双质粒HBV DNA疫苗对食蟹猴免疫功能的影响

目的评价治疗型双质粒HBV DNA疫苗(简称HBV DNA疫苗)诱导食蟹猴HBV特异性体液免疫和细胞免疫的效果。方法30只食蟹猴随机均分为5组(雌雄各半),分别重复肌注高剂量2000μg/kg、中剂量660μg/kg、低剂量200μg/kgEP介导HBV DNA疫苗,330μg/kg EP介导的佐剂质粒和PBS对照。在不同时间点以酶联免疫吸附法(ELISA)及酶联免疫斑点法(ELIS-POT)检测其血清抗-HBs水平并计数外周血单个核细胞(PBMCs)HBsAg特异性分泌IFN-γ的T细胞频数。结果食蟹猴接种不同剂量HBV DNA疫苗后第10周起均产生不同滴度的特异性抗体。16周时EP介导的HBV DNA疫苗高、中、低剂量组各3只食蟹猴中分别有3、2、3只HBsAg特异性IFN-γT细胞计数阳性;29周时高、中、低剂量组全部动物应答呈阳性,其计数结果分别为30.0±13.5SFCs/3×105PBMCs,30.7±26.3SFCs/3×105PBMCs及17.7±6.4SFCs/3×105 PBMCs;而相同时间点佐剂组和PBS对照组3只食蟹猴均为阴性。结论EP介导的HBV DNA疫苗能有效诱导食蟹猴产生HBsAg特异性体液和细胞免疫应答。

结核γ-干扰素酶联免疫斑点检测在结核性心包积液诊断中的应用

目的探讨结核菌特异性γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)酶联免疫斑点(enzyme-linked immunosorbent spot,ELISPOT)检测对结核性心包积液的诊断价值。方法采用结核菌特异性IFN-γELISPOT技术同时检测20例结核性心包积液患者(TP组)和14例非结核性心包积液患者(Non-TP组)外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)及心包积液单核细胞(pleural effusion mononuclear cells,PEMC)中结核菌特异性IFN-γ水平。结果 TP组PBMC和PEMC结核菌特异性IFN-γ水平均显著高于Non-TP组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。TP组心包积液中结核菌特异性IFN-γ水平显著高于外周血IFN-γ水平,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。PBMC ELISPOT检测结核性心包积液的敏感性和特异性分别为80.0%和85.7%;而PEMC ELISPOT敏感性和特异性为90.0%和85.7%。结论结核菌特异性IFN-γELISPOT技术对结核性心包积液诊断和鉴别诊断具有很好的辅助价值。

结核杆菌感染T细胞斑点试验对结核性胸膜炎的诊断价值

目的通过检测胸腔积液患者外周血结核杆菌感染T细胞斑点试验(T.SPOT.TB),评价T.SPOT.TB对结核性胸膜炎的诊断价值及临床应用前景。方法收集2015年3月至2016年10月在宁夏医科大学总医院呼吸与危重症医学科住院部收治的结核性胸膜炎患者63例(TBP组),非结核性胸腔积液患者36例(NTBP组)。对入组患者进行常规胸水细胞学、生化以及腺苷脱氨酶(ADA)活性检测,并行外周血T.SPOT.TB检测,对比TBP组与NTBP组外周血T.SPOT.TB检测及胸水ADA活性检测对TBP的诊断效能。结果 TBP组EAST-6和CFP-10分泌IFN-γ的斑点形成细胞数分别为56/2.5×105个和38/2.5×105个,均高于NTBP组的0/2.5×105个和1/2.5×105个(Z=-6.92和-5.82,P均<0.01)。TBP组胸水ADA活性(39.60U·L-1)高于NTBP组(12.35U/L)(Z=-4.99,P<0.01)。T.SPOT.TB诊断TBP的敏感度(88.90%,56/63)高于ADA活性检测(46.00%,29/63)(χ~2=26.36,P<0.01);T.SPOT.TB诊断TBP的特异度(86.10%,31/36)与ADA活性检测(94.40%,34/36)的差异无统计学意义(χ~2=0.63,P>0.05);T.SPOT.TB诊断TBP的阴性预测值(81.60%,31/38)高于ADA的阴性预测值(50.00%,34/68)(χ~2=10.25,P<0.01);T.SPOT.TB检测的阳性似然比(6.40)与阴性似然比(0.13)均低于ADA活性检测(8.29,0.57)。两项检验方法联合时,诊断TBP的敏感度提高至92.10%(58/63)。结论外周血T.SPOT.TB检测对结核性胸腔积液具有很好的诊断价值,与ADA活性检测联合可提高TBP的诊断。

重组乙型肝炎表面抗原(汉逊酵母菌表达)免疫小鼠后不同细胞免疫测定方法的比较研究

目的探讨不同细胞免疫测定方法对小鼠免疫乙型肝炎表面抗原(HBsAg)后细胞免疫应答测定的影响。方法小鼠皮下接种HBsAg,于免疫后4、7、10、14和25d分离脾单个核细胞(MNC),应用酶联斑点法(ELISPOT)测定MNC细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ斑点形成细胞计数(SFC),其中刺激物选择多肽和HBsAg;流式荧光检测技术(Luminex)测定MNC体外经HBsAg刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10含量;小鼠血清检测抗-HBs。结果小鼠接种HBsAg后,应用ELISPOT法测定,7d和14d小鼠IFN-γ阳转率分别为60%和80%;而应用Luminex方法测定,7d和14d小鼠IFN-γ阳转率均为80%;IL-4、IL-5、IL-10阳转率分别为60%,80%;100%,100%;80%,100%;25d时,IFN-γ与14d比较统计学上差异有统计学意义(P25,14d=0.030,<0.05),而IL-5、IL-10和IL-4与14d比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抗-HBs水平随时间而呈上升趋势。结论Elispot和Luminex法测定小鼠IFN-γ应答符合率高,小鼠接种单针HBsAg后细胞免疫应答高峰为免疫后7～14d。25d时IFN-γ分泌水平随抗-HBs抗体水平升高而下降,而IL-4、IL-5、IL-10分泌继续保持较高水平。

结核感染T细胞检测在早期结核性脑膜炎和隐球菌性脑膜炎鉴别诊断中的价值

目的探讨结核感染T细胞检测(T-SPOT)在早期结核性脑膜炎与隐球菌性脑膜炎鉴别诊断中的价值。方法结核性脑膜炎组患者、隐球菌性脑膜炎组患者在入院1周内进行结核菌素试验(PPD)、结核抗体、血清腺苷脱氨酶(ANA)及T-SPOT检测。结果 PPD、结核抗体、ANA及T-SPOT检测在结核性脑膜炎患者入院1周检查阳性率分别为75%、25%、50%、100%。PPD、结核抗体、ANA及T-SPOT检测在隐球菌性脑膜炎患者入院1周检查阳性率分别为50%、12.5%、25%、25%。T-SPOT比PPD、结核抗体、ANA在结核性脑膜炎组中阳性率较高,组间阳性率差别有统计学意义(P<0.05)。结论 T-SPOT检测可作为早期鉴别结核性脑膜炎和隐球菌性脑膜炎的辅助方法,但应先排除颅外结核感染。

超声检查联合γ-干扰素酶联免疫斑点法在附睾结核诊断中的价值

目的分析附睾结核患者超声图像特点,并探究超声检查联合γ-干扰素(IFN-γ)酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测在附睾结核诊断中的价值。方法纳入本院2018年6月-2019年2月经手术病理确诊的附睾结核患者46例及同期因附睾隐痛或阴囊坠胀不适来本院就医的非附睾结核患者20例为研究对象。所有患者均行多普勒超声检查及IFN-γELISPOT检测,分析两种检查方法诊断附睾结核的准确度、灵敏度、特异度。结果46例附睾结核病例中,38例经超声诊断为附睾结核。超声检查在附睾结核诊断中准确度为84.85%、灵敏度为82.61%、特异度为90.00%;IFN-γELISPOT在附睾结核诊断中准确度为87.88%,灵敏度为91.30%、特异度为80.00%;超声检查联合IFN-γELISPOT在附睾结核诊断中准确度为90.91%、灵敏度为97.83%,特异度为75.00%。结论超声检查可显示附睾结核的病变部位,附睾呈低回声、非均质肿大或伴睾丸低回声;超声检查联合超声IFN-γELISPOT在附睾结核诊断中具有较高的诊断价值,对疾病早期诊断具有重要意义。

滤纸干血片样品用于自愿咨询检测HIV抗体的研究

目的研究在自愿咨询检测HIV抗体工作中,用采集末梢血制成滤纸干血片替代采集静脉血的可行性。方法采集200例自愿咨询受检者的手指末梢血及静脉血(抗凝全血和非抗凝血)。将手指末梢血和静脉抗凝全血分别制成滤纸干血片样品,非抗凝血则分离出血清,并在不同条件下保存。用ELISA法和免疫印迹法检测HIV抗体,将检测结果进行比较。结果各类滤纸干血片与静脉血清经ELISA法检测,定性结果一致。与血清的测量结果相比,直径6 mm的滤纸干血片OD值有显著性差异(P<0.05)。直径10 mm的滤纸干血片OD值无显著性差异(P>0.05),滤纸干血片样品用生理盐水和pH7.4的PBS洗脱均可,300μL的生理盐水洗脱效果更好。滤纸干血片保存1周的结果稳定。用免疫印迹法检测,滤纸干血片与静脉血清判读结论一致。结论采集末梢血制成的滤纸干血片,以ELISA法检测HIV抗体,结果可靠、稳定,且操作简便,运输和保存无生物危害,可替代采集静脉血用于自愿咨询HIV抗体检测工作。

结核感染T细胞斑点试验在骨与关节结核诊断中的价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT TB)在临床诊断骨与关节结核的应用价值。方法收集154例疑似骨与关节结核患者外周抗凝血标本,依据细菌学检验、病理学结果及临床表现判定有无结核分枝杆菌感染;其中确诊骨与关节结核73例,非结核感染81例,分别进行T-SPOT TB和结核抗体(TB-Ab)检测,并分析T-SPOT TB在骨与关节结核诊断中的敏感度和特异度。结果 73例确诊骨与关节结核中,64例T-SPOT TB阳性;81例非结核中,72例T-SPOT TB阴性;T-SPOT TB检测敏感度为87.67%(64/73),TB-Ab为41.10%(30/73),T-SPOT TB诊断骨与关节结核的敏感度显著高于TB-Ab(P<0.001);T-SPOT TB检测特异度为88.89%(72/81),TB-Ab为71.60%(58/81),T-SPOT TB特异度也高于TB-Ab(P=0.006)。在结核组中,涂阳与涂阴两组T-SPOT TB阳性检出率分别为95.45%(21/22)及86.49%(32/37),差异无统计学意义(P>0.05)。在结核组中,病理诊断阳性率92.16%(47/51)与T-SPOT TB总阳性率87.67%(64/73)比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T-SPOT TB在诊断骨与关节结核中具有良好的敏感度和特异度,具有重要临床应用价值。

健康教育在T细胞酶联免疫斑点法阳性风湿免疫病患者中的临床价值

目的探讨健康教育在T细胞酶联免疫斑点法阳性风湿免疫病患者中的临床价值。方法选取本院2012年10月-2014年10月诊治的T细胞酶联免疫斑点法阳性风湿免疫病患者88例,采用随机数字表法分为两组,对照组患者44例实施传统健康教育,观察组患者44例实施健康教育路径,比较两组患者疾病知识掌握程度、不良反应认知情况、遵医行为、护理满意度。结果观察组患者疾病知识掌握程度、不良反应认知情况、遵医行为（按时用药、确保用量、定期复诊）好于对照组（P〈0.05）。观察组患者护理满意度高于对照组（P〈0.05）。结论健康教育能提高T细胞酶联免疫斑点法阳性风湿免疫病患者的认知水平,有助于改善遵医行为并提高护理满意度。

单中心尿毒症透析人群的隐性结核感染相关因素分析

目的:本研究横断面调查了北京大学深圳医院肾内科接受血液透析(HD)和腹膜透析(PD)尿毒症人群中隐性结核感染(LTBI)患病率,并探讨影响尿毒症透析人群LTBI的危险因素.方法:选择接受长期(≥3个月)HD和PD患者270例.排除活动性结核病、HIV感染、恶性肿瘤、接受糖皮质激素或免疫抑制剂治疗的患者,使用酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测患者的外周血单个核细胞(PBMCs)的数值,无结核活动相关症状(发热、盗汗、消瘦等)的ELISpot阳性,影像学检查排除活动性结核者为LTBI,通过对LTBI患病率研究,以获得可能导致LTBI的危险因素.结果:270例(122例PD和148例HD)中,47例(17.4%)为ELISpot阳性,223(82.6%)为ELISpot阴性.HD组(18.9%)患者LTBI患病率略高于PD组(15.6%),差异无统计学意义(P=0.575).LTBI的危险因素为年龄(OR:0.97[0.95,0.99]每年增量),结核病史(OR:4.78[1.03,21.9])和吸烟史(OR:2.89[1.15,7.32]).结论:尿毒症透析人群LTBI患病率为17.4%,与健康人群LTBI患病率相似;不同透析方式LTBI患病率的比较差异无统计学意义;老年人、吸烟行为及结核病史为独立危险因素.

基于立即早期蛋白IE62建立水痘-带状疱疹病毒感染性滴度检测方法

目的:基于水痘-带状疱疹病毒(VZV)立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点检测技术(ELISpot)建立一种新型的VZV感染性滴度的快速检测方法。方法:应用生物信息学方法设计并合成VZV-IE62蛋白的多肽抗原,牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,筛选和制备抗VZV-IE62单克隆抗体,应用Western blot和免疫荧光法等开展抗体性能评价,继而应用酶联免疫斑点技术(ELISpot)结合生物素-亲和素放大法建立新型的VZV感染性滴度检测方法,并与经典空斑计数法进行比较。结果:获得抗VZV-IE62的单克隆抗体1B7,应用于ELISpot方法可特异识别VZV感染后的细胞,以之为基础建立了新型的VZV感染性滴度检测方法。相比经典空斑计数法,该方法可显著缩短检测时间(从5至7 d缩短至32 h)检测结果具有较好的一致性。结论:本研究建立了一种新型的基于VZV立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点技术的VZV感染性滴度检测方法(VZV-IE62 ELISpot),具有潜在的转化应用前景,可为VZV的防治研究提供支持。

从噬菌体展示抗体文库筛选对虾白斑综合征病毒的单链抗体

对虾白斑综合征是一种严重危害对虾养殖业的病毒性疾病。由于目前对其病原体对虾白斑综合征病毒(WSSV)的研究不够深入,所以对WSSV的有效防治仍然是一大难题。为此,用完整的对虾白斑综合征病毒粒子作为靶抗原固相包被,淘选噬菌体展示单链抗体文库,得到两个能够与WSSV结合的单链抗体:E2和H4。单链抗体H4能够结合病毒并抑制病毒对原代培养的对虾淋巴细胞的感染,这些结果表明此单链抗体具有开发为诊断试剂盒和抗病毒药物的潜力。

结核性与非特异性缩窄性心包炎53例临床特征分析

目的探讨结核性与非特异性缩窄性心包炎的临床特征,为临床诊断提供参考。方法回顾性分析2012年11月-2019年5月诊断为缩窄性心包炎患者的临床资料,依据心包病理检查结果,分为结核性缩窄性心包炎组(42例)与非特异性缩窄性心包炎组(11例)。结果两组比较,男性、年龄大、病程短、发热史、结核中毒症状、合并肺/其他部位结核活动、结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)皮试阳性、结核分枝杆菌抗体IgG阳性、结核感染T细胞检测阳性、心包积液腺苷脱氨酶>40 U/L,这10项临床特征在结核性缩窄性心包炎中更常见,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结核性缩窄性心包炎患者在性别、发病年龄、临床表现、实验室检查等方面有着自身特点,这些临床特征能为鉴别结核性与非特异性缩窄性心包炎提供一定的诊断价值。

结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核中的诊断价值

目的通过检测结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验的结果,探讨其在菌阴肺结核诊断及鉴别诊断中的意义。方法将研究对象分为菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组。所有患者分别进行结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验、结核抗体三项测定及结核菌素试验。结果菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组患者PPD试验阳性率为84.8%、83.3%、28.6%、33.3%;结核抗体试验的阳性率为84.8%、66.6%、28.6%、33.3%;ELISPOT试验阳性率为93.9%、93.3%、7.1%、3.3%。结论结核杆菌感染T细胞酶联免疫斑点试验在肺结核诊断,可能优于结核菌素试验及结核抗体测定,对于菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断具有临床意义。

ELISPOT及ELISA鉴别HBV感染免疫状态的研究

目的比较酶联免疫斑点法(ELISPOT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别乙型肝炎病毒(HBV)感染免疫状态。方法临床诊断的慢性HBV感染者免疫清除期、免疫耐受期患者各16例,常规分离外周血单个核细胞(PBMC),体外用HBcAg或培养液刺激,分别用ELISPOT及ELISA方法,检测两组患者PBMC分泌的r-干扰素(INFr)。结果用ELISA方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,分别为(655.25士3.80)、(578.37±7.73)ng/L,阳性率分别为68.81%、12.50%,差异有统计学意义(P<0.01);用ELISPOT方法,两组患者PBMC受HBcAg刺激分泌IFNr,阳性率分别为87.50%、0,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论免疫清除期、免疫耐受期HBV感染者,PBMC对HBcAg刺激的免疫反应不同,鉴别二者,ELISPOT优于ELISA。

乙型肝炎病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞应答与不同临床感染状态的关系

目的分析人类白细胞抗原（HLA）-A0201限制性的特异性CTL，研究急性肝炎急性期和慢性乙型肝炎活动期患者T淋巴细胞对特异性抗原表位免疫应答的差异。方法收集HLA—A0201阳性的5例急性肝炎急性期和6例慢性乙型肝炎活动期患者的外周血单个核细胞（PBMc），酶联免疫斑点技术（EI，ISPOT）测定针对HBV聚合酶区（P01575—583）、包膜区（Env348—357）和核心区（Core18—27）3个CD8^＋T淋巴细胞表位肽特异性CTL的数量和功能。数据采用t检验。结果经P01575583、Env348—357和Core18—27三条抗原肽刺激，急性乙型肝炎急性期患者组斑点形成细胞数（SFC）分别为110±13、165±17和185±20；慢性乙型肝炎活动期患者组SFC分别为22±4、23±5和30±5，两组差异有统计学意义（f值分别为10．9、15．2和8．0，均P〈0．05）。急性乙型肝炎急性期患者各抗原肽特异性CTL的应答能力P01575—583〈Env348—357〈Corel8-27，其中P01575—583和Core18-27比较，差异有统计学意义（t=4．0，P〈0．05），而Env348—357和Core18—27比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。非特异性HLA-2402限制性Corell7-125刺激也出现SFC增加，但与阴性对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论急性感染者HBV特异性CTL应答水平显著高于慢性HBV感染者，慢性乙型肝炎患者体内的多克隆CTL数量和功能低下。

人白细胞抗原-A＊0201限制性丙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定

目的 鉴定人白细胞抗原（HLA）-A＊0201限制性HCV-CTL表位.方法 基于RANKpep和SYFPEITHI细胞表位预测软件预测结果,选择合成6条候选CTL表位.研究候选CTL表位肽与T2细胞表达的HLA-A＊0201分子的亲和力,进一步采用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）和细胞内细胞因子染色（ICS）实验研究HLA-A＊0201高亲和力肽在HLA-A＊0201阳性HCV感染者的外周血单个核细胞（PBMC）中刺激CTL反应情况.结果 在6条候选CTL表位肽中,肽C_181（LLSCLTTPV）和NS2_172（VLQAGLIRV）与HLA-A＊0201分子有高亲和力,其亲和力随肽浓度增加而升高.在10例HLA-A＊0201阳性HCV-1b感染者每1×105PBMC中,肽C_181和NS2_172刺激后,特异性分泌IFN-γ细胞的斑点形成细胞数（SFC）分别为0～19和0～20.肽C_181和NS2_172特异性IFN-γ＋CD8＋T淋巴细胞占CD8＋T淋巴细胞的比例分别为0.006%～0.065%和0.005%～0.080%.结论 肽C_181（LLSCLTTPV）和NS2_172（VLQAGLIRV）为HLA-A＊0201 限制性HCV-CTL表位.

结核杆菌特异性酶联免疫斑点技术在HIV感染人群中的应用

我国艾滋病病毒(HIV)感染人群中结核病的发病率高,造成了严重的疾病负担。提高潜伏结核和活动性结核的诊断准确性,对控制HIV病人中结核病的治疗和控制至关重要。该文总结了近年来出现、发展并完善的一种新的结核诊断技术,即结核杆菌特异性酶联免疫斑点技术,及其在HIV人群中的相关研究结果,并着重对该技术在潜伏结核和活动性结核的诊断、治疗效果监测以及结核相关性免疫重建炎症反应综合征中的应用进行了评价。