MicroRNA-766-3p靶向调控Epac-1影响H9C2心肌细胞凋亡的机制研究

目的分析MicroRNA-766-3p靶向调控Epac-1影响H9C2心肌细胞凋亡的机制研究。方法采用miR-766 NC、miR-766 mimics、miR-766 NC inhibitor、miR-766 inhibitor转染心肌细胞H9C2;采用RT-PCR法检测不同组别H9C2中miR-766表达水平;采用流式细胞凋亡实验检测miR-766在Epac-1中的凋亡作用;采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测不同组别H9C2中Epac-1及相关凋亡蛋白水平;采用双荧光素酶报告基因检测miR-766靶基因。结果与miR-766 NC组细胞相比,miR-766 mimics组细胞中miR-766明显高表达(P<0.001),其心肌细胞凋亡率均明显增加(P<0.05),细胞中Epac-1 mRNA及蛋白呈低表达(P<0.05),Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白则呈高表达(P<0.05);与miR-766 NC inhibitor组细胞相比,miR-766 inhibitor组细胞中miR-766呈低表达(P<0.001),其心肌细胞凋亡率降低(P<0.05),Epac-1 mRNA及蛋白呈高表达(P<0.05),Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白则呈低表达(P<0.05)。生物信息学网站预测及双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-766与Epac-13′UTR存在结合位点。结论心肌细胞中MicroRNA-766-3p可通过靶向抑制Epac-1表达促进调控心肌细胞凋亡。

Epac1-Rap1通路介导牡荆素对大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究Epac1-Rap1通路介导牡荆素对大鼠慢性心肌缺血再灌注损的保护作用。方法:将48只清洁级雄性SD大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、牡荆素组(6、3、1.5mg/kg)和灯盏花素(3mg/kg)阳性对照药组。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支(缺血1 h再灌注14天)建立慢性心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemial reperfusion injury,MIRI)模型。记录大鼠不同时间点心电图ST段的变化,颈动脉插管检测大鼠左心功能变化,病理观察心肌纤维化程度,检测大鼠血清中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平以及心肌组织中Epac-1、Rap-1、Bax和Bcl-2蛋白表达,以此探索牡荆素在减轻大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。结果:与模型组相比,牡荆素用药组大鼠ST段的抬高幅度明显减小,血清中MDA含量降低,SOD和NADPH含量增高;牡荆素6、3mg/kg剂量组能明显改善慢性心肌缺血大鼠左心室功能并抑制心肌反应性纤维化的程度,同时能增加Bcl-2的蛋白表达,抑制Epac-1、Rap1、Bax蛋白过度表达。结论:牡荆素可以减轻大鼠慢性心肌缺血再灌注损伤,其机制与抑制脂质过氧化、调控心肌细胞Epac-1/Rap-1信号途径并抑制心肌细胞凋亡作用有关。