EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡中的表达及天麻素的影响

目的:探讨EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中的表达变化,及天麻素对EphA4表达的影响。方法:提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养,7d后随机分为对照组、海人酸模型组、海人酸+天麻素干预组;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,Hoechst33258荧光染色、AO/EB荧光染色、LDH活性测定检测神经元凋亡和坏死情况,CY3荧光染色检测EphA4表达变化。结果:海人酸模型组较对照组神经元凋亡率显著升高(P<0.01),EphA4表达显著增高(P<0.01);海人酸+天麻素干预组较海人酸模型组神经元凋亡率显著下降,EphA4表达上调显著受抑。结论:海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中EphA4表达增高,天麻素在这一过程中抑制EphA4表达,对神经元具有一定保护作用。

体外氧糖剥夺再复氧大鼠皮层神经元细胞活性及EphA4蛋白的表达

目的:观察EphA4在氧糖剥夺再复氧体外培养大鼠皮层神经元的表达变化及可能的作用。方法:体外培养新生0～1d的Wistar大鼠皮层神经元,分为对照组和氧糖剥夺(OGD)再复氧模型组。模型组通过更换培养基为无糖Earle液并通入体积分数95%N2/5%CO2混合气体建立OGD模型,4h后复氧。选取复氧0、4、12和24h4个时间点,四唑盐(MTT)试验观察神经元活性,免疫细胞化学方法检测EphA4蛋白的表达情况。结果:模型组4个时间点细胞活性均低于对照组(t=19.556,20.909,13.673,16.737,P均<0.01),且随着复氧时间延长,活性逐渐降低(F=573.510,P<0.01)。再复氧4、12及24h,模型组EphA4表达较对照组明显升高(t=1.524,6.821,7.950,11.593,P<0.01),并随复氧时间延长有逐渐增高趋势(F=40.205,P<0.01)。结论:在缺血再灌注过程中,EphA4可能参与了抑制神经再生。

慢性脑缺血大鼠EphA4表达变化的研究(英文)

目的探讨大鼠海马区及皮层EphA4表达在慢性脑缺血的不同时间点的动态变化。方法大鼠随机分为正常组、假手术组、15d、30d和60d模型组.采用双侧颈总动脉永久结扎建立慢性脑缺血模型;Morris水迷宫试验检测行为学变化;免疫组化染色检测EphA4的表达变化。结果EphA4免疫反应阳性细胞数模型组比假手术组均增多(P<0.05),与行为学改善基本相符。结论慢性脑缺血造成EphA4表达持续升高可能是成年哺乳动物损伤后神经再生障碍的重要原因之一。

神经元-小胶质细胞EphA4/ephrin通路调控小胶质细胞介导的缺血后炎性损伤

目的观察神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路在脑缺血后的炎性损伤中的作用及机制。方法建立神经元-小胶质细胞混合培养体系和糖氧剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion, OGD/R)模型,使用预聚集化的EphA4-Fc激动小胶质细胞ephrin配体,检测OGD/R后的细胞凋亡、小胶质细胞增殖和亚型极化以及小胶质细胞功能改变。结果 EphA4受体高表达于原代神经元,与对照组相比,预聚集化EphA4-Fc干预加重OGD/R导致的细胞凋亡,促进小胶质细胞增殖以及向M1型(促炎型)极化(炎症表型)。结论神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路通过调控小胶质细胞亚型极化参与脑缺血后的炎性损伤的过程。

miR-183通过靶定EPHA4调控老年前列腺癌细胞的转移

目的探讨微小RNA(miR)-183对老年前列腺癌细胞转移中的影响及其与靶基因促红细胞生成素产生肝细胞受体(EPH)A4的价值。方法对老年前列腺癌和癌旁组织中miR-183和EPHA4的表达水平通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法进行检测。老年前列腺癌细胞系PC3和LNCaP能够转染miR-183抗链球菌溶血素(AS)O,通过与阴性对照及Transwell迁移和侵袭实验对其细胞的运动和侵袭能力进行评价。再通过使用RT-PCR、Western印迹、绿色荧光蛋白(GFP)报告载体3种实验验证miR-183对其靶基因EPHA4的调控。结果 RT-PCR显示miR-183处于高表达水平(P<0.01)。转染miR-183 ASO细胞的迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.01)。生物信息学显示EPHA4 3'UTR含有miR-183的潜在结合位点。转染miR-183 ASO组细胞EPHA4 3'UTR荧光强度显著低于对照组(P<0.01),miR-183 minmcs增加EPHA4 3'UTR的荧光强度(P<0.01),而对突变的3'UTR无明显影响。miR-183 ASO中EPHA4 mRNA水平降低,miR-183 mimics中EPHA4 mRNA水平升高。miR-183 ASO组EPHA4的蛋白含量较对照组显著下降(P<0.01)。结论 miR-183通过EPHA4对老年前列腺癌细胞的迁移和侵袭进行调控,发挥着癌基因的作用。

阿司匹林通过抑制EphA4通路保护缺血造成的脑白质损伤

目的:我们前期研究发现阿司匹林具有脑白质保护作用,但其机制尚不清楚。有研究报道Eph信号与白质损伤密切相关,为此本研究拟探讨大鼠脑白质损伤后阿司匹林对Eph受体表达变化的影响。方法:成年雄性SD大鼠利用双侧永久性颈总动脉结扎模型造成脑白质损伤(WML)。随机分为正常组、WML组和阿司匹林处理组(每日100 mg/kg,ip,30d),每组15只。采用Real-time PCR法检测正常组胼胝体内8种Eph受体的表达情况;免疫荧光染色检测Eph受体是否表达在少突胶质细胞中;Western Blot检测各组Eph受体和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达变化及相互关系。结果:Real-time PCR结果:8种Eph受体中,EphA4的mRNA表达水平最高。EphA4与CNPase的免疫荧光染色示:EphA4表达于胼胝体内的少突胶质细胞。与正常组相比,WML组中EphA4^+细胞数量增多(P<0.05),阿司匹林处理后EphA4^+细胞数量减少(P<0.05)。Western Blot结果显示:与正常组比较,WML组胼胝体部EphA4表达升高(P<0.05),但MBP蛋白表达下降(P<0.05);阿司匹林处理后,可下调EphA4(P<0.05)、上调MBP的表达水平(P<0.05),二者呈显著负相关。结论:阿司匹林可能通过抑制EphA4通路保护缺血造成的脑白质损伤。

EphA4-ephrinA3系统在海马脑区缺血/再灌注中的表达变化

目的观察海马EphA4-ephrinA3的分布特点及在缺血/再灌注过程中的动态变化规律,了解EphA4-ephrinA3对在海马CA1区神经元迟发性死亡中影响。方法采用经典的四血管夹闭短暂前脑缺血/再灌注模型,通过TUNEL染色观察缺血/再灌注后6h、24h、48h各组海马神经元凋亡情况,同时检测Caspase 3的活性,并以western blot检测EphA4及ephrin A3蛋白表达的变化。结果短暂前脑缺血/再灌注可以引起海马CA1区神经元迟发性死亡。Caspase 3活性在缺血/再灌注后明显升高,再灌注6h、24h、48h(OD值分别为2.30±0.19,2.20±0.28,1.90±0.015)与sham组(OD值为1.100±0.017)比较有统计学意义(P<0.05)。大鼠海马组织EphrinA3蛋白表达显著增加,再灌注6h、24h(IOD值为2.05±0.12vs 0.78±0.02,P<0.05),与对照相比有统计学意义,再灌注48h逐渐回复至对照组水平。EphA4也有缺血诱导的增高,再灌后6h和24h与对照组相比均有明显增高(2.21±0.12vs 0.72±0.03,P<0.05)。结论短暂脑缺血/再灌注可诱导海马CA1区ephrinA3与EphA4的表达明显增高,其时间过程与Caspase增高的时间过程一致,提示ephrinA3与EphA4的表达增高可能在CA1区神经元损伤过程中发挥重要作用。

抗EphA4多肽单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗EphA4羧基端多肽的单克隆抗体,研究其免疫学特性。方法:体外合成EphA4羧基端多肽免疫小鼠,运用杂交瘤技术建立抗EphA4多肽单克隆抗体细胞株。通过免疫化学方法分析单抗的免疫学特性。结果:获得1株抗EphA4单克隆细胞,所分泌的抗体具有EphA4特异性,能识别人类、鸡与小鼠EphA4;可用于EphA4的ELISA、免疫沉淀、免疫印迹与免疫组织化学染色。结论:抗EphA4多肽单抗具备优良的免疫学特性,适用于多种免疫化学技术,是EphA4及其配体研究的重要工具。

长期注射水杨酸钠大鼠下丘EphA4的表达

目的通过观察长期水杨酸钠作用后大鼠ABR及下丘EphA4mRNA表达变化,探讨下丘EphA4表达在水杨酸钠耳毒性中的作用。方法将30只健康成年雄性SD大鼠随机分为5组,每组6只:正常对照组(不予任何处理),肌注7天组(肌肉注射水杨酸钠175mg/kg,每天2次,间隔8小时,连续7天),肌注14天组(水杨酸钠用法同前,持续14天),恢复14天组(肌注水杨酸钠14天后,停药恢复14天),恢复28天组(肌注水杨酸钠14天后,停药恢复28天)。对各组大鼠分别于相应时间点进行ABR检测后处死并迅速分离下丘,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)的方法检测各组大鼠下丘中EphA4mRNA表达。结果 1肌注7、14天组大鼠的ABR反应阈分别为38.33±3.73、44.16±1.86dB SPL,较对照组(30.83±1.86dB SPL)明显升高(P<0.05);恢复28天组大鼠的ABR反应阈(32.50±2.50dB SPL)与对照组(30.83±1.86dB SPL)相比,差异无明显统计学意义(P>0.05);2肌注7天组和恢复14天组大鼠下丘EphA4mRNA表达(分别为:0.69±0.11、0.67±0.09)均低于对照组大鼠(0.99±0.01)(均为P<0.05);恢复28天组大鼠下丘EphA4mRNA表达(0.88±0.04)与对照组大鼠比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论长期注射水杨酸钠后大鼠下丘的EphA4表达呈可逆性下降,且与水杨酸钠注射后大鼠听功能损伤的变化一致,推测下丘神经元轴突中EphA4参与了水杨酸钠耳毒性的机制。

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞EphA4基因表达的调控

目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对小鼠骨髓基质细胞系ST-2在成骨分化过程中Eph受体酪氨酸激酶A4基因(EphA4)表达的影响。方法:使用终浓度10μg/m L的Pg-LPS与ST-2细胞共培养,分别在培养第1、3和7天,采用RT-PCR技术检测EphA4基因及Runt相关转录因子2(Runx2)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和碱性磷酸酶(ALP)等成骨相关基因的表达。结果:实验组EphA4基因表达在培养第1、3和7天时比对照组分别减少2.5、2.4和2.3倍,两组之间存在显著差异(P<0.01);实验组Runx2基因表达在培养第1、3天比对照组减少,两组之间存在显著差异(P<0.01),但在第7天两组表达均不明显;实验组ColⅠ和ALP基因表达在培养第1、3和7天时均比对照组减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Pg-LPS能抑制ST-2细胞成骨分化过程中EphA4基因的表达,同时也抑制成骨相关基因Runx2、ColⅠ和ALP的表达。

天麻素后处理对糖氧剥夺大鼠皮层神经元EphA4表达的影响

目的研究天麻素对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)大鼠皮层神经元损伤的保护性作用及EphA4表达的影响。方法提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养7 d,对4组神经元分别施以60 min的OGD,换回正常培养液培养30 min后分别及给予含终浓度为50、125、250、500μmol/L天麻素的培养液作为后处理措施,培养4 h后换回正常条件培养24 h;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,LDH活性测定检测神经元损伤情况,CY3荧光染色检测EphA4表达变化。结果天麻素后处理能降低糖氧剥夺神经元的损伤,降低EphA4表达。结论天麻素对糖氧剥夺神经元损伤有保护作用,该作用与EphA4表达降低有关。

EphA4在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测EphA4mRNA在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达,并分析其生物学特性及临床意义。方法应用real-time RT-PCR法检测60例乳腺癌和10例乳腺良性病变中EphA4mRNA的相对含量,并分析其与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果乳腺癌组织中EphA4mRNA表达水平明显高于乳腺良性病变(<0.05),其表达水平与乳腺癌组织学分级,腋窝淋巴结转移和临床分期有关,而与患者的年龄、肿瘤体积、病理组织学类型无显著相关(>0.05)。结论 EphA4可能促进乳腺癌的进展和转移,有助于帮助评估乳腺癌的生物学行为,指导临床用药。

miR-93通过靶向EphA4激活ERK通路促进非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-93/Eph受体A4(EphA4)分子轴通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases),ERK通路对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H460和H1299细胞增殖和迁移的影响。方法:用qPCR检测H460和H1299细胞中miR-93表达水平。分别在H460细胞中转染miR-93模拟物(mimics)和EphA4过表达质粒、在H1299细胞中转染miR-93抑制剂(inhibitor)后,用MTT、Transwell实验检测miR-93对转染细胞增殖和迁移的影响。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93与EphA4之间的靶向调控关系。用Western blotting检测细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、EphA4、ERK和p-ERK蛋白的表达水平,用MTT、Transwell实验检测同时过表达miR-93和EphA4对H460细胞增殖和迁移的影响。结果:miR-93在H1299细胞中表达水平高于H460细胞(P<0.01)。过表达miR-93促进H460细胞增殖和迁移(均P<0.01),敲低miR-93抑制H1299细胞增殖和迁移(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-93靶向调控EphA4,过表达miR-93明显下调H460细胞中EphA4 mRNA和蛋白表达水平(均P<0.05),过表达miR-93通过靶向EphA4并激活ERK通路促进H460细胞的增殖和迁移(均P<0.01)。结论:miR-93促进NSCLC细胞增殖和迁移,其机制可能与靶向调控EphA4并激活ERK通路有关。

受体酪氨酸激酶EphA4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Eph A4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法收集未经治疗的乳腺浸润性导管癌手术标本77例,用Eph A4抗体进行免疫组化En Vision法染色,分析乳腺癌细胞染色强度与临床病理特征的相关性。结果 Eph A4在正常乳腺细胞中66.2%呈强阳性(■),19.5%呈中度阳性(■),14.3%呈弱阳性(-^+)。Eph A4蛋白在浸润性导管癌中20.8%呈强阳性(■),24.7%呈中度阳性(■),54.5%呈弱阳性(-^+)。Eph A4蛋白在正常乳腺细胞和浸润性导管癌细胞之间的表达差异有显著性(P<0.001)。Eph A4蛋白表达丢失与肿瘤高分级(P=0.029)、TNM病理分期(P=0.034)和Ki-67高增殖指数(P<0.001)呈正相关;与患者年龄(P=0.940)、淋巴结转移(P=0.329)、分子分型(P=0.945)和HER-2表达(P=0.431)无相关性。结论 Eph A4蛋白在浸润性导管癌中表达下调,提示Eph A4基因在乳腺癌中具有抑癌的作用,是潜在的诊断和治疗新靶标。

左乙拉西坦对癫痫大鼠海马组织EphA4表达的影响

目的建立氯化锂-匹罗卡品点燃的癫痫大鼠模型,观察左乙拉西坦(LEV)对癫痫大鼠海马组织中EphA4表达量的影响,探讨左乙拉西坦抗癫痫作用机制中的新靶点。方法将110只雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、左乙拉西坦对照组(LEV对照组)、模型组(Li-pilo组)、左乙拉西坦治疗组(LEV治疗组)。腹腔注射药品建立氯化锂-匹罗卡品模型,造模成功后LEV对照组和LEV治疗组予以LEV每日一次灌胃,NS组和Li-pilo组给予同等剂量的0.9%生理盐水灌胃,持续4周。应用免疫组化方法分别在第1、2和4周检测每组大鼠海马组织中EphA4的表达量。所有的实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计分析,应用单因素方差分析,各组间两两比较应用LSD-t检验,认定P<0.05时有统计学意义。结果免疫组化法检测结果表明:LEV对照组和NS组比较,无统计学意义(P>0.05);Li-pilo组与NS组比较,Li-pilo组大鼠海马组织中EphA4表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);LEV治疗组与Li-pilo组比较,EphA4表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 (1)癫痫的发生可能导致EphA4表达升高,推测EphA4的表达变化促进大鼠海马发生苔藓纤维化进而导致癫痫发生。(2)LEV控制癫痫发作,可能通过下调EphA4的表达来抑制苔藓纤维化发生进而控制癫痫。

EphA4基因在胃癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的:检测EphA4mRNA在胃癌组织及正常组织中的表达,分析其与临床多项指标之间的关系。方法:利用实时定量RT-PCR方法,检测39例胃癌患者肿瘤和正常组织中EphA4基因的表达情况,分析其与多项临床及病理学指标之间的关系。结果:EphA4基因在胃癌患者中均有表达,并且表达程度具有差异性。EphA4基因表达与淋巴结分期相关(P=0.017),也与临床分期相关(P=0.015)。与年龄、性别、分化程度、浸润深度、Lauren分型、脉管和神经浸润无显著相关。结论:EphA4可能促进胃癌的进展和转移。

抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞发育影响的研究

目的探讨抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞(OPC)发育的影响。方法将分离纯化的OPC随机分为正常组、EphA4受体抑制剂处理组(EphA4-FC组)。EphA4-FC组加入250 nmol/L EphA4-FC,培养至第2天。免疫细胞化学染色法观察正常组OPC特异性标志物NG2与EphA4受体的共表达情况;通过细胞计数观察两组OPC数量变化情况;通过Western blot检测两组细胞蛋白样品中OPC特异性蛋白血小板源性生长因子α受体(PDGFαR)的表达变化情况。结果免疫细胞化学染色显示,正常体外培养OPC高表达EphA4受体;与正常组比较,EphA4-FC组的NG^(2+)阳性细胞数量明显增多(P<0.05)。Western blot显示,与正常组比较,EphA4-FC组细胞蛋白中PDGFαR的表达显著增高(P<0.05)。结论培养的OPC上高表达EphA4受体,通过抑制EphA4受体可以促进OPC的增殖。

EphA4在人上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:研究EphA4在卵巢肿瘤组织中的表达,并分析其生物学特性及临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测84例卵巢癌和20例卵巢良性肿瘤组织中EphA4蛋白的表达;应用原位分子杂交法检测上述组织中EphA4mRNA的表达。结果:EphA4蛋白及EphA4mRNA在卵巢癌中的表达明显高于卵巢良性肿瘤(P<0.01);EphA4蛋白和EphA4mRNA的表达在卵巢癌组织学分级,临床分期和淋巴结转移的分组比较中差异具有统计学意义(P<0.05),而与患者的年龄、组织学分型及有无腹水等无关(P>0.05)。结论:EphA4的过表达可能促进卵巢癌的进展和转移,可以作为判断卵巢癌预后的重要指标。

EphA4基因在K562细胞野生株与耐药株中的表达差异

目的观察EphA4基因在K562细胞野生株与耐药株中的表达情况，为研究EphA4在白血病发生发展中的作用奠定基础。方法以荧光实时定量PCR方法检测K562细胞野生株与耐药株中EphA4基因表达。结果E—phA4基因在K562细胞野生株中的表达明显高于K562细胞耐药株，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论根据EphA4在K562细胞野生株与K562细胞耐药株中的表达差异显著，推论EphA4这种差异的存在对于研究K562细胞所代表的慢性粒髓系白血病的作用机制、病理演变、临床表现及预后具有一定意义。

EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子蛋白质和转录本表达的影响

目的探讨EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白质和转录本表达的影响。方法将原代培养的大鼠海马脑区神经元随机分为正常对照组和EphA4-Fc组,EphA4-Fc组给予EphA4受体拮抗剂EphA4-Fc,培养7 d后,Western blot法检测大鼠海马脑区BDNF蛋白的表达,qPCR检测BDNF mRNA的表达。结果与正常对照组相比,EphA4-Fc组大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白表达明显升高(P<0.01),mRNA转录本Ⅱc的表达明显升高(P<0.001)。结论给予EphA4-Fc后,大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白翻译增加与mRNA转录本Ⅱc表达升高相关。本研究为临床上脑卒中的治疗以及神经元保护提供了新的思路。