EphA5介导胚胎中脑神经上皮干细胞向纹状体投射的实验研究

目的探讨轴突导向分子EphA5在胚胎中脑神经上皮干细胞向靶组织纹状体特异性投射中的作用。方法自孕11d大鼠取材胚胎中脑神经上皮干细胞并进行体外培养,应用免疫细胞化学的方法检测EphA5在神经上皮干细胞中的表达情况;取材鼠脑纹状体组织,应用冰冻切片、RT-PCR及Western-blot等方法检测EphA5的配体Ephrin-A5的特异表达情况;将胚胎中脑神经上皮干细胞与新生鼠纹状体组织块联合培养,观察细胞的靶向生长情况。结果体外培养的胚胎中脑神经上皮干细胞可明显向纹状体生长并呈EphA5阳性,靶区纹状体组织中可检测到其配体Ephrin-A5高表达。结论轴突导向分子EphA5受体及其配体Ephrin-A5可介导胚胎中脑神经上皮干细胞向纹状体组织的靶向生长。

缺氧缺血性脑病新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达与神经元凋亡的关系

目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达与神经元凋亡的关系。方法:7日龄SD大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组、HIE+EphA5-Fc组和对照组。采用qRT-PCR法测定各组新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测其凋亡的神经元。结果:①HIE组海马EphA5受体mRNA表达上调,在12 h达高峰,48 h仍高于对照组(P<0.05);与HIE组比较,HIE+EphA5-Fc组海马EphA5受体mRNA表达下调(P<0.05),已恢复至对照组水平(P>0.05);②HIE组海马神经元凋亡6 h开始升高,24 h达高峰;HIE+EphA5-Fc组海马神经元凋亡较HIE组显著下降(P<0.05)。结论:阻断EphA5受体可抑制HIE新生大鼠海马EphA5受体mRNA表达上调及海马神经元凋亡,表明EphA5受体活化是缺氧缺血致脑损伤的机制之一。

氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马EphA5及ephrinA3的表达及意义

目的探讨颞叶癫痫发作后海马EphA5及ephrinA3基因的表达变化和轴突出芽的关系。方法建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型,利用原位杂交方法检测致痫后12h、24h、7d、15d、30d、60d海马CA3区、CA1区EphA5及ephrinA3 mRNA的表达,快速Golgi染色观察CA1区的轴突出芽。结果致痫后,EphA5 mRNA在CA3区表达下调,ephrinA3 mRNA在CA1区表达下调,均在7d降至最低点,与对照组相比差异有显著意义(P<0.01),此后逐渐回升,但15d时仍低于对照组(P<0.05),在30d和60d与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。快速Golgi染色显示,对照组大鼠CA1区轴突走行正常,匹罗卡品致大鼠SE后7dCA1区锥体细胞层出现显著增多的轴突染色。结论CA3区的EphA5和CA1区的ephrinA3的表达下调可能与CA1区的轴突出芽、突触重建有关。

轴突导向因子EphA5沉默后抑制中脑神经上皮细胞投射

目的：探讨轴突导向因子EphA5在中脑神经上皮细胞向纹状体投射中的作用。方法：从孕11d大鼠胚胎取材并培养中脑神经上皮细胞；设计EphA5基因干扰序列，构建RNA干扰载体，采用电转染技术将EphA5干扰载体转入中脑神经上皮细胞，电转后将中脑神经上皮细胞与纹状体共培养，观察转染后中脑神经上皮细胞向纹状体组织的靶向生长情况。结果：中脑神经上皮细胞与纹状体组织块联合培养，神经突起明显朝向组织块生长；EphA5基因干扰载体转染中脑神经上皮细胞可降低EphA5蛋白表达，EphA5基因沉默后神经上皮细胞突起朝向纹状体生长趋势不明显。结论：EphA5基因沉默后中脑神经上皮细胞向纹状体投射减弱，EphA5基因可调控中脑神经上皮细胞向纹状体的靶向投射。

非小细胞肺癌组织NEK2、EPHA5表达与临床病理特征、EGFR突变和预后的关系

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织有丝分裂相关激酶2(NEK2)、促红细胞生成素产生肝细胞受体A5(EPHA5)表达情况,分析其与临床病理特征、表皮生长因子受体(EGFR)突变和预后的关系。方法:选取自2019年10月至2020年10月期间我院诊治的151例NSCLC患者作为研究对象,术中取其癌组织及癌旁正常组织(距离癌组织5cm以上)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测EGFR基因表达。免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织中NEK2、EPHA5表达。比较癌组织和癌旁组织NEK2、EPHA5表达情况。分析不同临床病理特征NSCLC患者NEK2、EPHA5表达情况。分析EGFR突变型与野生型不同NEK2、EPHA5表达情况。Kaplan-Meier生存曲线分析不同NEK2、EPHA5表达对NSCLC患者的预后情况。结果:与癌旁组织比较,癌组织NEK2、EPHA5阳性表达率明显更高(均P<0.05);与TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移和肿瘤直径<5 cm患者相比,TNM分期ⅢA期、淋巴结转移和肿瘤直径≥5 cm患者的NEK2、EPHA5阳性表达率均明显更高(均P<0.05);EGFR突变型组NEK2、EPHA5阳性表达率显著高于EGFR野生型组(均P<0.05);NEK2阳性表达组和阴性表达组3年总生存率(OS)分别为40.40%(40/99),57.69%(30/52),EPHA5阳性表达组和阴性表达组患者3年OS分别为41.90%(44/105),56.52%(26/46),各阴性表达组患者累积生存显著高于阳性表达组(P<0.05)。结论:NSCLC癌组织中NEK2、EPHA5阳性表达率升高,与TNM分期ⅢA期、淋巴细胞转移、肿瘤直径有关,还可能导致EGFR突变和不良预后。

胃癌患者癌组织EphA5表达与临床病理特征的关系

目的探讨胃癌患者癌组织EphA5表达与临床病理特征的关系及EphA5促进胃癌进展的机制。方法2019年8月—2022年3月海南医学院第一附属医院诊治胃癌患者50例,取手术切除癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测EphA5、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)mRNA相对表达量,根据癌组织EphA5 mRNA相对表达量中位数4.249将50例患者分为EphA5高表达组(≥4.249)25例和EphA5低表达组(<4.249)25例,分析癌组织EphA5表达与胃癌患者临床病理特征的关系;采用Pearson相关法分析胃癌组织EphA5 mRNA与VEGF、IL-6 mRNA相对表达量的相关性。对数生长期SGC-7901细胞分为oe-NC组(转染oe-NC)、oe-EphA5组(转染oe-EphA5)、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-EphA5组(转染sh-EphA5)。取转染72 h时4组细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EphA5、VEGF、IL-6 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞EphA5、VEGF、IL-6蛋白相对表达量,采用CCK-8实验检测培养48 h时细胞增殖率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭数目。结果胃癌组织EphA5、VEGF、IL-6 mRNA相对表达量(4.74±2.54、3.27±1.25、5.23±2.74)均高于癌旁组织(1.00±0.62、1.00±0.46、1.00±0.54)(P<0.05)。胃癌组织EphA5 mRNA与VEGF、IL-6 mRNA相对表达量均呈正相关(r=0.395,P<0.001;r=0.453,P<0.001)。EphA5高表达组临床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移比率(80.0%、68.0%)均高于EphA5低表达组(32.0%、28.0%)(χ^(2)=11.453,P=0.011;χ^(2)=0.366,P=0.024)。oe-EphA5组EphA5、VEGF、IL-6 mRNA及蛋白相对表达量均高于sh-EphA5组、oe-NC组、sh-NC组(P<0.05),sh-EphA5组均低于sh-NC组、oe-NC组(P<0.05);oe-EphA5组培养48 h时细胞增殖率(268.75±36.85)高于sh-EphA5组(175.86±37.74)、oe-NC组(224.56±41.86)、sh-NC组(229.75±32.58)(P<0.05),sh-EphA5组低于sh-NC组、oe-NC组(P<0.05);oe-EphA5组细胞侵袭数目[(174.75±18.57)个]多于sh-EphA5组[(42.58±9.35)个]、oe-NC组[(98.38±12.75)个]、sh-NC组[(102.57±16.84)个](P<0.05),sh-EphA5组少于sh-NC组、oe-NC组(P<0.05);sh-NC组以上指标与oe-NC组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌患者癌组织EphA5高表达提示临床分期晚、淋巴结转移风险高,胃癌细胞EphA5过表达通过上调VEGF、IL-6表达,促进细胞增殖、侵袭和血管生成,进而促进肿瘤进展。

EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用

探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用。方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型。致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 m RNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2)。结果原位杂交结果显示:ephrinA5 m RNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达明显下调(P<0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 m RNA表达逐渐上调(P<0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 m RNA相一致。Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽。结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切。