高甲基化导致EphA7基因在结直肠癌中低表达

目的:Eph基因和配体在多种肿瘤中呈高表达,并可能在肿瘤的发生、发展及预后中发挥重要作用。作者探讨EphA7基因在大肠癌细胞系和结直肠癌组织及其正常黏膜中的表达情况,以及EphA7基因在大肠癌发生、发展中的作用。方法:定量RT-PCR检测大肠癌细胞系和原发性结直肠癌标本中EphA7的表达。经甲基化特异性PCR(MSP)和亚硫酸氢钠处理后,用DNA测序等方法分析EphA7基因启动子区CpG岛甲基化状况。构建pEGFP-N3-EphA7质粒,并转染至EphA7表达丢失的大肠癌细胞系中,对转染子进行mRNA基因表达芯片分析。结果:大肠癌细胞系DLD1、HT29、HCT116、SW 480和SW 620中EphA7基因低表达。59例进行定量RT-PCR测定的原发性结直肠癌患者中,29例患者癌组织中EphA7基因的表达水平低于来源相同患者的正常黏膜(P=0.008)。经MSP、亚硫酸氢钠处理后DNA测序等发现,EphA7基因启动子区CpG岛高甲基化。EphA7的高甲基化与肿瘤分化、性别以及肿瘤发生部位等有关。对EphA7质粒转染子mRNA基因芯片分析,观察到多种基因表达改变。结论:EphA7基因启动子区CpG岛甲基化是EphA7在大肠癌中低表达的机制。EphA7基因可能在结直肠癌的肿瘤发生、发展中起重要作用。

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义。方法应用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达，并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系。结果40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达。实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织（20．0711±32．0232）中的表达显著高于癌旁肝组织（4．5184±9．4738，P〈0．05）和正常肝组织（4．1764±4．7193，P〈0．05），而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关（P〈0．05）。结论EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关，可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用。

EphA7基因沉默对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨RNA干扰抑制EphA7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 EphA7小干扰RNA （siRNA）重组质粒采用脂质体介导法转染肝癌细胞SMMC-7721,同时设空载体转染组、未转染组和对照组.对照组不注射细胞,仅注入磷酸盐缓冲液（PBS）做对照.裸鼠移植瘤模型采用左上肢皮下注射的方法建立.应用实时PCR、免疫组化和蛋白印迹方法检测移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达情况,同时比较成瘤时间、肿瘤体积和重量等.结果 注射细胞后9 ～12天,除对照组外其余各组均可在注射部位发现肝癌移植瘤形成.移植瘤形成后第35天,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤生长速率、肿瘤体积和重量均明显降低（P＜0.05）.转染干扰载体pRNA-siEphA7对裸鼠肝癌移植瘤的的抑瘤率为55％.免疫组化结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7蛋白阳性染色的细胞较少,染色较浅,呈浅黄色.实时PCR和蛋白印迹结果显示,与未转染组和空载体转染组比较,转染组移植瘤组织中EphA7基因和蛋白的表达明显低于未转染组和空载体转染组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 利用siRNA抑制EphA7的表达可减缓肝癌细胞SMMC-7721在活体动物体内的生长,有望成为肝癌基因治疗的靶点.