EphrinB2/EphB4-Fc蛋白片段腹腔注射对去卵巢小鼠骨质疏松的防治作用

目的探讨腹腔注射促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2(EphrinB2)/促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4(EphB4)蛋白片段对去卵巢小鼠骨质疏松的防治效果。方法取7周龄健康雌性C57BL/6小鼠39只,随机分为假手术组、模型组、干预组,每组各13只。模型组、干预组通过摘除小鼠卵巢组织建立绝经模型,假手术组仅切除卵巢组织周围脂肪组织。造模术后1周,干预组给予腹腔注射EphrinB2-Fc蛋白片段以及EphB4-Fc蛋白片段0.1 mg/(kg·d),假手术组和模型组注射等量生理盐水,继续喂养16周。小鼠脱颈处死,取出股骨,采用力学测试机测试三点弯曲力学性能,获得弹性模量、最大载荷;取腰椎、股骨和颅骨,采用双能X线骨密度检测仪检测骨密度和骨小梁厚度;取第5腰椎和远端股骨,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞数量;采集小鼠腹主静脉血,酶联免疫吸附法检测血清碱性磷酸酶(ALP)、脱氧吡啶啉(DPD)。取小鼠股骨和胫骨,收集骨髓腔冲洗液中的细胞,采用RT-PCR法检测EphrinB2、EphB4 mRNA,Western blotting法检测EphrinB2、EphB4蛋白。结果与假手术组相比,模型组骨弹性模量、最大载荷降低;与模型组相比,干预组骨弹性模量、最大载荷升高(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组骨密度、骨小梁厚度降低;与模型组相比,干预组骨密度、骨小梁厚度升高(P均<0.05)。模型组破骨细胞数量多于假手术组和干预组(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组血清ALP、DPD水平降低;与模型组相比,干预组血清ALP、DPD水平升高(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组骨组织EphrinB2、EphB4 mRNA和蛋白表达水平下降;与模型组相比,干预组骨组织EphrinB2、EphB4 mRNA和蛋白表达水平升高(P均<0.05)。结论过表达EphrinB2/EphB4信号通路蛋白能够改善去卵巢小鼠的骨力学性能,减少破骨细胞数量,提升骨代谢指标,从而防治绝经后骨质疏松。

EPHB4与复发性流产绒毛血管生成相关性研究

目的探讨复发性流产(RSA)患者绒毛组织中EPHB4下调与绒毛血管生成障碍的关系。方法收集19例RSA患者(RSA组)和14例早孕要求终止妊娠患者(NC组)的绒毛组织样本,通过RT-qPCR和Westernblotting检测EPHB4的表达,通过免疫组化染色标记CD31计算绒毛微血管密度,并分析两者间的相关性。结果RSA组患者的组织中EPHB4的表达、微血管密度低于NC组(P<0.05)。EPHB4mRNA与绒毛微血管密度成中度正相关(r=0.4961,P=0.0362)。结论EPHB4在RSA患者中表达下调,可能通过抑制绒毛血管生成参与RSA的发生发展。

EphB4、HIF-1α在肺癌组织中的表达及其意义

背景与目的 业已发现EphB4和HIF 1α与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究的目的是探讨EphB4、HIF 1α蛋白在肺癌中表达的生物学意义及相互间的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测54例肺癌组织和10例正常肺组织中EphB4、HIF 1α蛋白表达的情况。结果 EphB4 和HIF 1α蛋白在54例肺癌组织中的阳性表达率分别为50.0%(27/54)和42.6%(23/54),较对照组显著升高(P<0.05);肺癌中EphB4和HIF 1α的表达与肉眼类型、分级、分期有密切关系(P<0.05),而与组织学类型、年龄、性别、淋巴结转移无明显关系(P>0.05);EphB4和HIF 1α的表达呈显著正相关关系(P<0.01)。结论 EphB4 和HIF 1α在肺癌中的异常表达与肺癌的发生、进展和恶性度有关,两者存在着一定的协同作用;检测EphB4 和HIF 1α表达有助于预测肺癌预后。

血府逐瘀汤促血管新生中EphB4/ephrinB2信号通路的作用研究

目的:探讨Eph B4/ephrin B2信号通路在血府逐瘀汤促血管新生中的作用。方法:运用血清药理学方法,以1.25%、2.5%、5%浓度的血府逐瘀汤含药血清和空白血清干预人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC-12)48h,通过MTT法、Boyden小室迁移法、细胞黏附法、逆转录PCR法分别检测细胞增殖、迁移、黏附、Eph B4和Ephrin B2基因表达的情况。结果:与同血清含量的对照组比较,5%浓度含药血清对细胞的增殖能力起抑制作用。1.25%、2.5%和5%3个浓度含药血清皆有显著的促内皮细胞迁移和黏附作用,并能抑制Eph B4的表达,其中1.25%、2.5%浓度含药血清抑制Ephrin B2的表达。结论:血府逐瘀汤通过促内皮细胞迁移和黏附发挥促血管新生作用,且该作用可能与Eph B4/Ephrin B2通路密切相关。

EphB4及其配体EphrinB2在食管鳞癌中表达及其与血管生成的关系

目的:探讨EphB4受体及其配体EphrinB2在食管鳞癌组织中的表达及其与血管生成的关系。方法:应用免疫组织化学Envision plus法检测60例食管鳞癌和10例癌旁组织中EphB4受体及其配体EphrinB2的表达和VEGF的表达,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测60例食管鳞癌和10例癌旁食管组织中EphB4、EphrinB2和VEGF mRNA的相对含量,并分析EphB4、EphrinB2和VEGF的表达的相关性。结果:食管鳞癌组织中EphB4、EphrinB2、VEGF mRNA和蛋白的表达均高于癌旁正常食管黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。EphB4 mRNA和EphrinB2 mRNA表达正相关(r=0.541,P<0.05),EphB4 mRNA、EphrinB2 mRNA均和VEGF mRNA表达正相关(r=0.642,r=0.582;P均<0.05)。结论:EphB4和EphrinB2在食管鳞癌中高表达,与血管生成密切相关。

应用激光共聚焦显微术检测脑星形细胞瘤中EphrinB2及EphB4蛋白的表达

背景与目的:EphrinB2是一种新型促血管生成因子。EphrinB2与其受体EphB4可表达于多种肿瘤细胞,并与肿瘤发生及血管生成有关。本研究旨在了解EphrinB2及EphB4蛋白在脑星形细胞瘤中的表达规律,并初步探讨其可能意义。方法:利用双标免疫荧光分别检测EphB4/EphrinB2蛋白与胶质纤维酸性蛋白(glialfibrilaryacidprotein,GFAP)或CD34蛋白在35例脑星形细胞瘤新鲜标本及人脑胶质瘤细胞系CHG-5、SHG-44中的共表达,以LeicaSP2激光共聚焦显微镜观察、摄像并分析。结果:EphB4或EphrinB2蛋白与CD34蛋白可在部分间质血管内共表达,定位于血管内皮细胞。在肿瘤细胞及两种细胞系,亦可见EphB4或EphrinB2蛋白与GFAP的共表达。在分化程度较低的SHG-44细胞中,EphB4或EphrinB2平均荧光强度分别为72.48±33.78和96.80±36.98,均强于相应分化较好的CHG-5细胞(56.7±21.7和53.6±18.8),而CHG-5细胞GFAP绿色荧光强度(47.5±16.7)较SHG-44细胞(22.3±15.3)则明显增强。结论:EphB4/EphrinB2蛋白表达可能与肿瘤细胞的分化程度有关。

RNA干扰介导EphB4基因表达下调对胶质瘤细胞系U251生长的影响

目的:探讨靶向EphB4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对胶质瘤细胞EphB4 mRNA表达及细胞生长的影响。方法:体外化学合成针对人EphB4基因的小干扰RNA并转染恶性胶质瘤U251细胞系后,RT-PCR法检测EphB4 mRNA表达的变化,CCK-8检测法观察RNA干扰对肿瘤细胞增殖活性的影响,FCM检测细胞周期变化,划痕实验观察细胞的迁移能力,采用Transwell小室穿膜细胞的数量来反应细胞的侵袭能力。结果:U251细胞转染siRNA-EphB4 100nmol/L后,EphB4 mRNA的表达水平下降了75.0%,细胞增殖抑制表现为剂量依赖性,FCM检测与阴性对照相比,细胞周期不同程度阻滞于亚G1期;并且细胞的迁移能力与对照组比较有所下降,Transwell小室穿膜细胞与对照组比较明显减少。结论:siRNA-EphB4能够明显靶向并抑制U251细胞中EphB4基因的表达,而EphB4基因表达下调可使U251细胞增殖受到影响,细胞周期出现凋亡峰。转染siRNA-EphB4后U251细胞的迁移和侵袭能力受到不同程度的抑制。提示抑制EphB4基因表达有可能成为胶质瘤治疗的新方法。

基于药效团模型及虚拟筛选方法发现EphB4全新抑制剂

采用计算机模拟手段,通过建立3D-QSAR模型、虚拟筛选及分子对接方法发现恶性肿瘤治疗靶标EphB4潜在的抑制剂。首先,通过Catalyst/HypoGen算法建立药效团模型。其中最好的模型Hypo1具有最高的科雷尔值(Correl值):0.96,最低的RMS值:0.89,与固定消耗值(fixed cost):89.20最接近的总消耗值(total cost):101.26,和最高的Δ消耗值(Δcost值):89.14。随后,Hypo1经过测试集验证及Fischer随机验证,并用于筛选化合物数据库。然后利用类药性筛选及分子对接手段进一步减少分子数量。最终,根据预测活性分析、对接得分值及结合模式分析,得到23个具有全新骨架的化合物作为Eph B4的潜在抑制剂可用于后续研究。

骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞共培养时EphB4/ephrinB2表达异常

目的:研究正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226共培养过程中,骨髓瘤细胞对MSC EphB4/ephrinB2表达的影响。方法:应用Transwell培养体系,将正常骨髓MSC分别与骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞共培养7、12 d后分别应用实时定量RT-PCR和细胞免疫化学方法检测骨髓MSC的EphB4/ephrinB2mRNA和蛋白表达水平。结果:骨髓MSC与U266、RPMI8226共培养后,与对照组MSC相比,生长和形态未见明显改变,应用实时定量RT-PCR方法检测骨髓MSC EphB4/ephrinB2的mRNA水平较对照组均降低,在共培养7 d的时间点上除EphB4在RPMI8226共培养组与对照组差异无统计学意义,其余组间差异均有统计学意义(P<0.05),在12 d上差异无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫化学结果显示共培养组MSC胞膜胞浆EphB4/ephrinB2表达下降。结论:骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226在与正常骨髓MSC共培养后,诱导骨髓MSC EphB4/ephrinB2表达的下调,可能通过MSC成骨-破骨活动的脱耦合,参与骨髓瘤骨病的发生。

EphB4/ephrinB2逆向信号对RAW264.7破骨细胞分化中PDZ结构域蛋白表达变化的研究

Eph受体是酪氨酸蛋白激酶受体家族中最大的亚家族,ephrin(Eph受体相互作用蛋白)是其配体,它们是膜结合蛋白,相互依赖进行信号转导.内居蛋白(syntenin)与Pick1属于PDZ结构域(PSD-95/Dlg-/Zo-1 domain)蛋白,报道称能与ephrinB配体结合,但是否受Eph受体调控尚未见报道.以RAW264.7细胞株为研究对象,通过蛋白质印迹及/或免疫荧光分析显示RAW264.7细胞经RANKL诱导的破骨细胞表达ephrinB2、内居蛋白(syntenin)和Pick1三个蛋白质.将提前成簇的可溶性EphB4蛋白加入培养液,与ephrinB2配体结合,用来研究EphB4/ephrinB2逆向信号对syntenin和Pick1表达水平变化的影响.免疫印迹及Real-time RT-PCR分析结果显示,在EphB4-Fc实验组中Pick1的蛋白质及mRNA水平都有明显增加,然而在EphB4-Fc实验组与Fc对照组别间syntenin的蛋白质及mRNA水平未见明显变化.免疫共沉淀结果显示,syntenin和Pick1不能与ephrinB2共沉淀.以上结果初步探索了体外破骨细胞分化过程中,EphB4/ephrinB2逆向信号对PDZ结构域蛋白(ephrinB2配体潜在的下游信号分子)表达变化的调控.

EphB4在乳腺浸润性导管癌中的表达及意义

目的探讨EphB4在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测65例浸润性导管癌以及12例癌旁乳腺组织中的EphB4、ER、PR、CerBb-2、P53的表达。结果EphB4在65例乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于癌旁乳腺组织(P<0.05),EphB4的表达与CerBb-2及肿瘤组织学分级呈正相关(P<0.05);与ER、PR及淋巴结转移无相关性(P>0.05)。结论EphB4在乳腺癌的发展中起着重要作用。

EphB4基因重组慢病毒载体的构建及在结肠癌细胞中的表达

目的有研究显示EphB4表达异常在结肠癌发生发展中具有重要意义。文中通过构建慢病毒介导稳定过表达EphB4基因的结肠癌细胞株,以期为结肠癌的基因治疗提供一定的实验依据。方法通过PCR反应将人工合成的EphB4基因序列装入pcDNA3.1(+)载体,并通过测序验证重组克隆插入片段的序列信息。将质粒中扩增的目的基因片断克隆装入慢病毒表达载体pLenti6.3-MCS-IRES2-EGFP并进行基因测序以确认慢病毒载体是否成功构建。携带EphB4和EGFP基因的慢病毒通过阳离子脂质体转染293T细胞,收集富含EphB4基因的病毒颗粒上清液,梯度稀释后测定病毒滴度并感染人结肠癌细胞株SW480和Coca-2,通过药物筛选及维持构建稳定过表达EphB4基因的结肠癌细胞株。荧光显微镜下观察各组细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达情况,qPCR检测转染前后各组细胞中靶基因EphB4 mRNA,评价过表达效果。结果含有2964bp人EphB4基因编码区的慢病毒载体pLenti6.3-EphB4-IRES2-EGFP构建成功,基因测序结果完全正确,经慢病毒包装所得病毒上清液Lenti6.3-EphB4滴度为1×108TU/mL。稳转细胞株在荧光显微镜下可见GFP表达,qPCR实验证明转染后SW480及Coca-2细胞中EphB4 mRNA表达水平较转染前明显增加。结论成功扩增、克隆了EphB4基因,并建立其慢病毒表达系统,构建了稳定过表达EphB4基因的结肠癌细胞株,从而对于研究结肠癌的基因治疗提供了实验依据。

EphB4、HIF-1α在胃癌中的表达及其生物学意义

目的研究EphB4受体和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白在胃癌组织中的表达,并探讨其生物学意义及相互关系。方法应用免疫组化法检测74例胃癌组织(胃癌组)和13例正常胃黏膜组织(对照组)中EphB4、HIF-1α的表达,并分析其表达与胃癌临床病理因素之间的关系。结果胃癌组中EphB4和HIF-1α的高表达率分别为62.16%(46/74)和52.70%(39/74),在对照组中,EphB4和HIF-1α的高表达率分别为15.38%(2/13)和0%(0/13)。胃癌组织中EphB4和HIF-1α的表达显著高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。EphB4、HIF-1α的表达与胃癌的组织学分级及临床病理分期关系密切(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移无关(P>0.05)。与HIF-1α不同,EphB4的表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。此外,EphB4与HIF-1α的表达成显著正相关(r=0.2091,P<0.01)。结论在胃癌中EphB4、HIF-1α均高表达,其表达程度与胃癌的恶性程度有关,而且EphB4表达与HIF-1α的表达呈正相关。过表达的EphB4、HIF-1α在胃癌恶性进展中发挥重要作用。

EphrinB2/EphB4在牙槽骨吸收-重建过程中的作用

目的初步探讨EphrinB2/EphB4信号在牙槽骨吸收及骨重建过程中的表达及其意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法分别检测小鼠RAW264.7细胞体外诱导前后、小鼠MC3T3-E1细胞骨吸收上清处理前后EphrinB2及EphB4的表达情况。以免疫组化(S-P)法、免疫荧光等方法检测大鼠实验性牙槽骨吸收模型牙体牙周联合标本中EphrinB2、EphB4的表达情况。结果 EphrinB2和EphB4在小鼠RAW264.7细胞、MC3T3-E1细胞中均有明显的表达,骨吸收上清作用于MC3T3-E1细胞后,分化的成骨细胞EphrinB2表达量(17.53±0.43)较阴性对照组(15.67±0.45)有显著升高(P<0.01);采用E-LPS注射法成功制备了稳定、可靠的实验性大鼠牙槽骨吸收模型,模型中免疫荧光结果可见EphB4和EphrinB2分别在牙槽骨缘成骨细胞及破骨细胞存在区的高信号。结论 EphrinB2/EphB4信号参与了骨吸收-重建过程,成骨细胞和破骨细胞均可共表达EphrinB2/EphB4并可能存在成骨细胞间的EphrinB2/EphB4传导完成促进成骨活动。

靶向EphB4的慢病毒干扰载体对结肠癌细胞中EphB4及EphrinB2表达的影响

目的有研究显示Eph B4在肿瘤发生发展中的作用与其配体Ephrin B2密切相关。文中主要通过慢病毒介导的RNA干扰技术干扰结肠癌细胞中Eph B4基因的表达,观察Eph B4基因表达改变对其配体Ephrin B2表达的影响。方法根据Eph B4基因序列设计并合成3对miRNA的oligo DNA,退火形成双链后与pc DNA6.2-GW/Em GFP-miRNA载体相连并瞬时转染HEK293细胞,通过荧光显微镜、q PCR筛选出干扰效率最高的质粒,将其与中间载体p DONR221和慢病毒载体p Lenti6/V5-DEST连接构建慢病毒表达载体p Lenti6/V5-DEST-Eph B4。用脂质体将慢病毒载体以及包装质粒(p LP1、p LP2和p LP/VSVG)共转染293FT细胞,收集上清Lenti-miR-Eph B4感染HEK293细胞株进行滴度鉴定。将获得的病毒液感染人结肠癌细胞株,通过荧光显微镜和q PCR检测结肠癌细胞中Eph B4及其配体Ephrin B2的表达变化。结果测序结果表明3对干扰载体SR1、SR2、SR3序列与参考序列一致,成功转染HEK293细胞后,各转染组细胞荧光显微镜下均可见到绿色荧光蛋白表达;q PCR显示载体SR-3的沉默效率最高;构建出来的慢病毒载体p Lenti6.3/V5-DEST-miR-Eph B4在293FT细胞中包装成功,所得慢病毒滴度为7×108TU/m L;Lenti-miR-Eph B4浸染后,SW480和Caco-2中Eph B4 mRNA相对表达量(0.49±0.02、0.62±0.04)均较原始SW480(1.00±0.00)和Caco-2降低(1.00±0.00),差异有统计学意义(P=0.000);SW480中Ephrin B2 mRNA表达量F(2.11±0.04)较原始SW480(1.00±0.00)明显升高(P=0.000);而Caco-2细胞中Ephrin B2 mRNA表达无明显改变(1.01±0.02),差异无统计学意义(P=0.315)。结论靶向Eph B4的慢病毒干扰载体能够有效降低SW480及Caco-2细胞中Eph B4 mRNA表达水平。Eph B4与其配体Ephrin B2之间的相互作用可能受到多种因素调控,有待后续深入研究。

不同病理级别胶质瘤中EphB4和ephrinB2的表达

目的探讨人胶质瘤中EphB4、ephrinB2的表达。方法收集31例不同病理级别脑胶质瘤组织和4例正常脑组织,制备冰冻切片,行免疫组织化学染色,应用Image-ProPlus5.1分析结果,并分析与病理级别的相关性。结果EphB4、ephrinB2表达于肿瘤细胞和血管上;EphB4在胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织,与病理级别正相关(r=0.935,P<0.01);ephrinB2在胶质瘤中表达高于正常脑组织,与病理级别正相关(r=0.922,P=0.01)。结论在人胶质瘤中EphB4、ephrinB2呈过表达及共表达,可能和肿瘤恶性进展密切相关。

EphB4在食管癌组织中的表达及临床意义

目的探讨EphB4在食管癌发生、发展中的作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色法对96例食管癌患者癌组织和癌旁正常组织EphB4水平进行测定。结果食管癌组织中EphB4 mR-NA阳性率、EphB4 mRNA及其蛋白表达水平显著高于癌旁正常组织(P均=0.000);癌组织中EphB4 mRNA表达水平与淋巴结转移、家族史、肿瘤体积、肿瘤分期及肿瘤位置有关(P均<0.05)。结论EphB4在食管癌发展过程中起重要作用;可作为监测病情、判断预后的指标。

EphB4和EphrinB2 mRNA在子宫颈癌组织中的表达及其与血管生成的关系

目的检测EphB4和EphrinB2 mRNA在子宫颈癌组织中的表达,探讨其在子宫颈癌发生、发展及血管生成过程中的作用。方法采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测90例子宫颈癌、15例子宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和15例正常宫颈组织中EphB4和EphrinB2 mRNA的表达,同时利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法检测上述组织的微血管密度(MVD),分析EphB4和EphrinB2 mRNA的表达与各种临床病理参数和血管生成的关系。结果尽管所有子宫颈组织中均可检测出EphB4和EphrinB2 mRNA的表达,但是EphB4 mRNA在子宫颈癌(125.59±16.63)和CIN(122.61±17.30)组织中的表达强度均高于其在正常宫颈组织中的表达(95.72±4.63)(P均<0.05)。EphrinB2 mRNA在子宫颈癌组织中的表达强度(111.11±22.86)明显高于其在CIN(94.48±6.30)和正常宫颈组织中的表达(93.56±7.89)(P均<0.05)。EphB4 mRNA在子宫颈癌组织中的表达强度与子宫颈癌的临床分期和肿瘤直径密切相关(P均<0.05)。EphrinB2 mRNA在子宫颈癌组织中的表达强度只与子宫颈癌的肿瘤直径密切相关(P<0.05)。正常宫颈组织、CIN和子宫颈癌组织中MVD逐渐增加,分别为(11.33±2.38),(26.47±7.47)和(42.97±9.99)。子宫颈癌组织中EphB4和EphrinB2 mRNA的表达均与MVD呈正相关。结论EphB4和EphrinB2在子宫颈癌的发生、发展及血管生成过程中可能起重要的作用。

EphB4受体在胰腺癌组织中表达及与肿瘤血管生成的关系

[目的]探讨EphB4受体在胰腺导管腺癌中的表达及与临床病理及血管生成的关系。[方法]采用免疫组化SP法检测27例胰腺导管腺癌和8例正常胰腺组织中EphB4受体的表达,并根据CD34染色结果计数微血管密度(MVD)。采用RT-PCR检测5例新鲜胰腺癌标本的EphB4受体mRNA。[结果]EphB4受体主要表达于肿瘤细胞的胞质,呈异质性分布,表达率为66.7%(18/27),正常胰腺组织阴性,两者之间差异有显著性意义(P<0.01);低分化导管细胞癌EphB4受体表达、MVD明显高于中高分化导管细胞癌(P<0.05);TNM分期为III、Ⅳ期胰腺导管细胞癌EphB4受体表达、MVD明显高于Ⅰ、Ⅱ期胰腺导管细胞癌(P<0.05)。胰腺导管细胞癌中EphB4受体表达、MVD与肿瘤部位、患者年龄、性别无明显相关性。5例新鲜标本中EphB4受体mRNA均高表达且与MVD成正相关(P<0.05)。[结论]胰腺癌细胞的EphB4受体表达与肿瘤血管生成及肿瘤侵袭性有关。

EphB4反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的作用

目的观察EphB4反义寡核苷酸(ASODN)对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响,探讨EphB4的生物学功能。方法人工合成EphB4 ASODN,脂质体转染U87细胞。分别应用RT-PCR以及免疫组织化学染色方法检测EphB4 mRNA和蛋白质,评估阻抑效应;并应用MTT法和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡;采用Boyden侵袭小室法检测细胞迁移和侵袭力。结果(1)由脂质体转染的EphB4 ASODN对U87细胞EphB4 mRNA和蛋白质表达具有不同程度的抑制作用,且呈现一定的时间-剂量依赖性,600nmol/LASODN作用于U87细胞72h,EphB4 mRNA相对表达量为0.30±0.05,EphB4蛋白表达水平亦明显减弱。(2)各实验组EphB4 ASODN对U87细胞增殖均具有抑制作用,呈明显时间-剂量依赖性;以600nmol/LASODN作用72h,U87细胞生长抑制率达到68.70%,而对照组则无明显抑制作用。(3)EphB4 ASODN诱导U87细胞凋亡呈剂量依赖性。(4)EphB4 ASODN组U87细胞的跨膜数为17.82±2.35,与空白对照组及NSODN组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论EphB4在人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭过程中发挥重要作用,可能成为脑胶质瘤基因治疗的一个新靶点。