鸡源EphrinA2基因的克隆表达及其单克隆抗体研制

研究旨在研制抗鸡EphrinA2蛋白的特异性单克隆抗体。试验用PCR和同源重组技术构建了鸡EphrinA2真核及原核表达载体,以纯化的EphrinA2原核表达产物免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA方法筛选出阳性细胞克隆;用SDS-PAGE、间接免疫荧光试验和Western blot验证表达产物及单抗的特性。结果显示:原核表达的重组蛋白His-EphrinA2-RBD主要位于细菌包涵体中;获得2株能稳定分泌抗EphrinA2蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4H6和1G9;单克隆抗体4H6不仅能特异性识别真核表达载体pcDNA3.1-EphrinA2在DF-1细胞中表达的EphrinA2蛋白,而且能有效识别LMH和DF-1细胞中内源性的EphrinA2蛋白。结果表明,单克隆抗体4H6与鸡EphrinA2蛋白反应性和特异性均良好,能够应用于鸡EphrinA2相关基础研究。

EphA2及EphrinA2在敖汉细毛羊皮肤中的表达及分布规律研究

本文旨在探究EphA2及其配体EphrinA2基因在细毛羊毛囊发生、发育过程中的表达与分布规律,为毛囊发育的分子调控机制提供理论基础。试验以敖汉细毛羊生长发育不同时期体侧部皮肤为材料,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术,对EphA2和EphrinA2基因的mRNA和蛋白水平在皮肤毛囊中的表达规律进行研究。实时荧光定量PCR结果显示:EphA2和EphrinA2基因的表达量在胎龄120d时显著高于胎龄90d和出生后1d(P<0.01);出生后1和30d时差异不显著(P>0.05)。免疫组化结果表明:EphA2及EphrinA2蛋白在胎龄90和120d、出生后1和30d,4个时期的细毛羊体侧皮肤毛囊发育过程中,主要在毛囊、毛母质、外根鞘和表皮中表达,且呈现一定的特异性表达。综上结果表明,EphA2及EphrinA2与细毛羊皮肤毛囊形态发生、发育过程密切相关,可为相关研究提供借鉴。

鸡卡那霉素中毒后EphrinA2蛋白表达与耳蜗毛细胞神经连接再生及重塑的关系

目的探讨EphrinA2在鸡卡那霉素中毒后耳蜗毛细胞神经连接再生及重塑过程中的作用。方法66只新生罗曼鸡为实验对象。试验组48只,于生后3d开始连续肌注卡那霉素200mg·kg-1.d-1,共用10d,设施药完毕前2d、完毕后1、3、7、15、21、30、60d8组。对照组18只,设3、13、43d龄3组,不施与任何药物。所有动物按预定时间点处死,取听神经行Western印迹分析,处死前均作ABR测试。结果对照组动物各时间点Eph-rinA2蛋白表达量基本一致。施药完毕前2d及施药完毕后1d时,试验组动物听神经组织中EphrinA2蛋白表达较对照组明显降低,施药完毕15d后,EphrinA2蛋白表达明显升高,施药完毕30d时,EphrinA2蛋白表达已与对照组基本相同。同时,实验组用药10天后ABR阈值达116.3±4.3dBSPL,停药后3、7、10天时分别为112.0±5.2、101.5±4.3、94.3±4.8dBSPL,10天后无变化。结论鸡卡那霉素耳中毒后听神经组织中EphrinA2蛋白的表达与其耳蜗毛细胞神经连接的再生及重塑基本同步,提示EphrinA2在鸡卡那霉素耳中毒后耳蜗毛细胞神经连接的再生及重塑中可能有重要作用。

轴突导向因子EphrinA2在难治性癫癇患者颞叶中的表达

目的检测轴突导向因子EphrinA2在难治性癫癇患者颞叶中的表达,探讨颞叶癫癇的发病机制。方法难治性癫癇患者(实验组)颞叶标本12例,正常(对照组)颞叶脑组织标本2例。采用免疫组织化学方法,观察EphrinA2在患者颞叶和正常颞叶组织中表达变化。结果癫癇患者颞叶组织细胞中EphrinA2呈阳性反应,细胞体积较对照组膨胀增大,细胞黄染,胞浆内为棕黄色的阳性反应颗粒,呈圆形或椭圆形;对照组细胞体积正常,胞浆为蓝色。实验组EphrinA2的OD值与对照组比较,显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EphrinA2参与了癫癇的病理生理过程,EphrinA2在癫癇中的高表达可能与在颞叶癫癇患者轴突出芽和突触重建有关。

EphrinA2基因促进MDA-MB-231乳腺癌细胞迁移的初步研究

目的在MDA-MB-231人乳腺癌细胞系中过表达Ephrin A2基因,研究其对肿瘤细胞迁移能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法用脂质体法将Ephrin A2真核表达质粒转染至MDA-MB-231细胞中,用Western blot法检测转染前后细胞中Ephrin A2、E-Cadherin及p27/Kip1蛋白的表达;并用细胞疏散、细胞划痕及Transwell小室试验检测转染前后细胞迁移能力的变化;用Rac1抑制剂NSC23766抑制Rac1活性后用细胞划痕试验检测细胞迁移能力变化。结果转染Ephrin A2后的细胞迁移能力更强,并且呈现出E-Cadherin及p27/Kip1蛋白表达下降;用NSC23766抑制Rac1活性能抑制Ephrin A2介导的细胞迁移。结论 Ephrin A2能促进MDA-MB-231乳腺癌细胞的迁移,其机制可能与E-Cadherin和p27/Kip1蛋白下调及Rac1活性抑制有关。

大鼠正畸牙移动过程中ephrinA2在牙周膜内的表达与分布

目的:观察大鼠正畸牙移动过程中牙周膜内ephrin A2的表达分布情况。方法:取36只雄性SD大鼠建立正畸牙移动模型,上颌左侧正畸加力的第一磨牙为实验组,右侧不加力的第一磨牙为对照组。正畸加力后12 h和1、3、7、10、14 d分别将大鼠处死(n=6),解剖分离出含有第一磨牙的牙槽骨并制作石蜡切片,免疫组化染色检测牙周膜中ephrin A2的表达。结果:ephrin A2在对照组牙周膜中呈弱阳性表达,主要分布于成纤维细胞胞质和胞膜上。实验组12 h时牙周膜中ephrin A2表达增强,压力侧显著高于张力侧(P<0.05),主要分布于成纤维细胞、前体破骨细胞的胞膜上,部分分布于胞质和胞核中。阳性表达随正畸加力时间延长而增强,3 d时达到高峰,7 d时开始下降,14 d时接近对照组水平(P>0.05)。结论:ephrin A2在正畸力作用下牙周组织改建中具有重要作用,可能参与了牙槽骨改建的早期调控。

FTY720-P对破骨细胞EphA2-EphrinA2双向信号通路作用的研究

目的探讨FTY720-P对破骨细胞Eph A2-Ephrin A2双向信号通路的影响。方法取小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用地塞米松及1α,25-二羟维生素D3诱导分化为破骨细胞,并行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定。将诱导培养的破骨细胞分为两组,实验组给予400 ng/m L的FTY720-P处理,对照组不给予FTY720-P。培养48 h后,取细胞行实时荧光定量PCR检测、Western blot检测以及免疫荧光染色观察,分析细胞中Eph A2、Ephrin A2、Rho A,以及骨重建相关蛋白BMP-2及TGF-β_1的表达。结果经TRAP染色鉴定,RAW264.7细胞成功诱导成为破骨细胞。培养48 h后,与对照组相比,实验组Eph A2及Ephrin A2 m RNA及蛋白相对表达量均明显降低(P<0.05),Rho A蛋白相对表达量也明显降低(P<0.05);BMP-2及TGF-β1 m RNA相对表达量明显增高(P<0.05),蛋白表达增强。结论 FTY720-P能通过影响破骨细胞Eph A2-Ephrin A2双向信号通路之间的传导下调Rho A,并促进TGF-β_1和BMP-2表达,最终影响破骨细胞的破骨作用。

血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2在胰腺癌与肿块型胰腺炎中的临床意义

目的分析血清CA19-9、黏蛋白5AC(MUC5AC)、外泌EphrinA型受体2(Exo-EphA2)对胰腺癌与肿块型胰腺炎的鉴别诊断价值及与影像学病理特征的相关性。方法选取2022年1月~2023年6月于周口市中心医院就诊的82例胰腺癌患者作为观察组,选择同期41例肿块性胰腺炎患者作为对照组,比较2组及不同病理参数血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平,对其诊断价值进行分析,并进一步分析相关性。结果研究组血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平较对照组明显增加(P<0.05);不同病理学参数胰腺癌患者血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平比较:低分化高于中高分化,Ⅰ~Ⅱ期低于Ⅲ~Ⅳ期,有远处转移高于无远处转移(P<0.05);CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平与远处转移、TNM分期呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05);血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平联合诊断胰腺癌的AUC为0.802,均高于各指标单独诊断。结论血清CA19-9、MUC5AC、Exo-EphA2水平与胰腺癌病理学参数存在一定关系,联合检测可显著提升在胰腺癌、肿块型胰腺癌中的鉴别诊断价值。

去甲斑蝥素对肝癌细胞EphA2/EphrinA1和E-cadherin表达的影响

目的 探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭迁移作用及对EphA2/EphrinA1和E-cadherin表达的影响。方法 常规培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组及NCTD高、中、低剂量组,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR和Western Blot分别检测细胞EphA2/EphrinA1和E-cadherin mRNA及蛋白质的表达情况。结果 NCTD明显抑制细胞侵袭和迁移,差异具有统计学意义(P<0.05);NCTD可以使肝癌细胞中EphA2、EphrinA1 mRNA及蛋白的表达量降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论去甲斑蝥素对人肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭有一定的抑制作用,其机制可能与NCTD下调EphA2/EphrinA1基因及蛋白的表达,引起E-cadherin上调,抑制肿瘤细胞EMT相关。

Altered expression of EphA2 and EphrinA1 associated with prognosis of malignant glioma patients

Objective Malignant gliomas display over-expression of the receptor tyrosine kinase EphA2. However,expression levels of the EphA2 ligand,EphrinA1,have not been fully elucidated. This study aims to determine the expression of EphA2 / EphrinA1 in detail,and further detect the predictive