氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马EphA5及ephrinA3的表达及意义

目的探讨颞叶癫痫发作后海马EphA5及ephrinA3基因的表达变化和轴突出芽的关系。方法建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型,利用原位杂交方法检测致痫后12h、24h、7d、15d、30d、60d海马CA3区、CA1区EphA5及ephrinA3 mRNA的表达,快速Golgi染色观察CA1区的轴突出芽。结果致痫后,EphA5 mRNA在CA3区表达下调,ephrinA3 mRNA在CA1区表达下调,均在7d降至最低点,与对照组相比差异有显著意义(P<0.01),此后逐渐回升,但15d时仍低于对照组(P<0.05),在30d和60d与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。快速Golgi染色显示,对照组大鼠CA1区轴突走行正常,匹罗卡品致大鼠SE后7dCA1区锥体细胞层出现显著增多的轴突染色。结论CA3区的EphA5和CA1区的ephrinA3的表达下调可能与CA1区的轴突出芽、突触重建有关。

EphA4-ephrinA3系统在海马脑区缺血/再灌注中的表达变化

目的观察海马EphA4-ephrinA3的分布特点及在缺血/再灌注过程中的动态变化规律,了解EphA4-ephrinA3对在海马CA1区神经元迟发性死亡中影响。方法采用经典的四血管夹闭短暂前脑缺血/再灌注模型,通过TUNEL染色观察缺血/再灌注后6h、24h、48h各组海马神经元凋亡情况,同时检测Caspase 3的活性,并以western blot检测EphA4及ephrin A3蛋白表达的变化。结果短暂前脑缺血/再灌注可以引起海马CA1区神经元迟发性死亡。Caspase 3活性在缺血/再灌注后明显升高,再灌注6h、24h、48h(OD值分别为2.30±0.19,2.20±0.28,1.90±0.015)与sham组(OD值为1.100±0.017)比较有统计学意义(P<0.05)。大鼠海马组织EphrinA3蛋白表达显著增加,再灌注6h、24h(IOD值为2.05±0.12vs 0.78±0.02,P<0.05),与对照相比有统计学意义,再灌注48h逐渐回复至对照组水平。EphA4也有缺血诱导的增高,再灌后6h和24h与对照组相比均有明显增高(2.21±0.12vs 0.72±0.03,P<0.05)。结论短暂脑缺血/再灌注可诱导海马CA1区ephrinA3与EphA4的表达明显增高,其时间过程与Caspase增高的时间过程一致,提示ephrinA3与EphA4的表达增高可能在CA1区神经元损伤过程中发挥重要作用。

ephrinA3在脂多糖诱导的星形胶质细胞中的表达变化

目的探讨ephrinA3在脂多糖诱导的大鼠大脑皮质星形胶质细胞中的表达变化。方法提取新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞并纯化培养,随机分为对照组和实验组,脂多糖10mg/L干预后,实验组又分为30min组、6h组、24h组、48h组和72h组,采用倒置相差显微镜观察星形胶质细胞形态学变化,MTT法检测细胞活力,AO/EB荧光染色检测细胞凋亡和坏死情况,CY3免疫荧光及Western blot方法测定不同时间点ephrinA3的表达变化。结果在脂多糖作用的不同时间中,与对照组相比,作用24h、48h、72h的细胞存活率显著升高,凋亡率显著下降,ephrinA3表达显著升高。结论 ephrinA3在脂多糖诱导的大鼠大脑皮质星形胶质细胞中的表达增高,持续至少72h,其在中枢神经系统损伤后星形胶质细胞增殖方面起重要调控作用。

卵巢癌中EphrinA3的表达及其意义的分析

目的：检测上皮性卵巢癌组织中EphrinA3的表达水平，初步探讨EphrinA3在卵巢癌发病中的作用。方法：采用免疫组化方法检测上皮性卵巢癌组织中EphrinA3蛋白表达。结果：EphrinA3在卵巢癌组织中阳性表达率为73.3%，高于良性卵巢肿瘤组织（20%）及正常卵巢组织（16.7%）；Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌组织中EphrinA3阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ期（83.3%vs.33.3%，P＜0.01）；在低分化卵巢癌组织中阳性表达率高于中高分化癌组织（80%vs.40%，P＜0.01）；在淋巴结转移组EphrinA3阳性表达率为88.9%，高于无转移组的50%（P＜0.05）。结论：EphrinA3在上皮性卵巢癌组织中高表达，在不同临床分期及组织学分级中，EphrinA3的表达水平不同。

ephrinA3对卵巢癌SKOV3细胞表达水平的影响

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶A3﹙ephrinA3﹚对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响。方法 转染ephrinA3至卵巢癌SKOV3细胞,分为ephrinA3上调组、ephrinA3下调组及空白对照组。利用实时荧光定量PCR技术检测转染后各组细胞中SKOV3的表达情况,Transwell实验检测上调组及下调组SKOV3细胞的增殖水平,并检测各组细胞的迁移能力。结果 实时荧光定量PCR检测显示,上调转染组中SKOV3的表达水平升至(86.3±2.3)%,显著高于空白对照组(P<0.05)。下调转染组中SKOV3的表达水平与空白对照组无明显差异(P>0.05)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测显示,转染48h转染组的细胞增殖率为(76.2±1.2)%,高于空白对照组的细胞增殖率为(22.4±2.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示,转染组的细胞迁移能力为(23.6±4.3)%,显著低于下调组的相对划痕愈合比例为(82.4±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 下调ephrinA3表达能够显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖、迁移并促进凋亡。

EphrinA1-caspase-3对乳腺癌细胞的体外靶向性抑制作用

目的:研究重组EphrinA1-caspase-3对体外乳腺癌细胞是否有靶向性抑制作用。方法:将重组EphrinA1-caspase-3感染人乳腺细胞,MTT法检测重组Ad-EphrinA1-caspase-3感染上清对EphA2阳性乳腺癌细胞的体外增殖的影响,采用流式细胞仪检测Ad-EphrinA1-caspase-3感染上清对乳腺癌细胞凋亡的影响,采用抗体中和实验检测感染上清中EphrinA1-caspase-3对靶细胞杀伤效应的特异性。结果:乳腺癌细胞呈贴壁生长,细胞中可见高水平的EphA2受体及EphrinA1表达。Ad-EphrinA1-caspase-3感染上清对乳腺癌细胞增殖表现出强烈的抑制作用,生长抑制率达48.9%。用流式细胞仪检测培养72h后稀释倍比为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16上清对应的凋亡率分别为36%、24%、18%、8%、7%,显著高于对照组凋亡率4%,且中和抗体能有效的减弱重组EphrinA1-caspase-3对EphA2阳性乳腺癌细胞的杀伤作用。结论:感染EphrinA1-caspase-3的T淋巴细胞能够对体外乳腺癌细胞起到靶向性抑制作用。