茶叶斑病病原菌Epicoccum mackenziei致病性与生长特性研究

从贵州省思南县、石阡县和开阳县茶叶产区的茶树叶斑病样品中分离纯化出多个菌株,观察其菌落形态和生长特性,并测定了the internal transcribed spacer(ITS)、the partial 28S large subunit rDNA(LSU)、RNA polymerase II second largest subunit(RPB2)和beta-tubulin(TUB)的基因或核酸序列,采用PAUP软件及最大简约法,进行多基因系统发育树分析,根据柯赫氏法则,在实验室和田间条件下进行茶树叶片致病性研究。结果表明,CGMCC 3.20225的菌落形态、分生孢子器和分子孢子等形态与Epicoccum mackenziei一致;菌株CGMCC 3.20225、ACCC 35051、ACCC 35053、ACCC 35054与Epicoccum mackenziei MFLUCC 160335在系统进化树上聚为一支;通过损伤方式接种,CGMCC 3.20225菌株可以引起茶树叶片产生病斑;在MEA培养基上的生长速率最快,OA和PDA培养基上的生长速率次之,本研究结果为E.mackenziei引起茶叶斑病的田间防控提供了一定的理论基础。

蓝靛果叶斑病病原高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)分离鉴定及生物学特性

以黑龙江省哈尔滨市香坊区采集的蓝靛果发病植株为试材,通过病原菌分离培养、致病性测定、形态学鉴定和rDNA-ITS、LSU、TUB和RPB2序列分析,确定其分类地位,以期为将来实施有效的化学和生物防治提供重要病原菌株来源。结果表明:该病原菌为高粱附球菌(Epicoccum sorghinum),可在PDA、OA和MEA培养基上生长,最适培养基为OA。最适培养条件为生长温度25℃,pH 7,碳源为乳糖和葡萄糖,氮源为牛肉膏,并且全光照条件有利于菌丝生长。

海参共附生微生物HS-1 Epicoccum spp.次级代谢产物的研究

目的:通过海参共附生微生物的研究获得活性次级代谢产物。方法:本研究通过对黄海海域海参的共生微生物分离、纯化,并进行分子鉴定,确定该菌株的属。利用GYP培养基对该菌进行发酵培养,通过现代波谱手段,确定了次级代谢产物的结构。结果:确定该菌株为附球孢菌。确定4个代谢产物,分别为:3,4-二氢-8-甲氧基-3,5-二甲基-1H-2-苯吡喃(1)、3,4-二氢-8-羟基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮(2)、过氧麦角甾醇(3)和丁二酸(4)。结论:附球孢菌首次从海参中得到。本文为深入研究开发海参资源提供了新思路。

茶叶斑病病原菌高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)的鉴定及生物学特性

为有效控制贵州省独山县茶叶斑病的发生与危害,本文研究了该区域茶叶斑病的病原和生物学特性。结果表明,从该地区茶叶斑病组织中分离的代表性菌株GZDS2018BXT10的菌落形态、分生孢子器、分生孢子和厚垣孢子等形态与高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)一致。对ITS、RBP2、TUB、rDNA-LSU核酸或基因进行测序,采用PAUP软件及最大简约法构建多基因系统发育树,结果表明,GZDS2018BXT10菌株与高粱附球菌模式菌株CBS179.80在系统发育树上聚为一支,自举支持率为100%。致病性试验表明,在室内和自然条件下,GZDS2018BXT10菌株可通过损伤方式导致茶树叶部产生病斑,符合柯赫氏法则。因此,确认该区域叶斑病病原为高粱附球菌(E.sorghinum)。菌株可在PDA、OA和MEA培养基上生长,GZDS2018BXT10菌株在OA培养基上生长速率最快,为(0.76±0.01) cm/d,显著高于MEA和PDA培养基(P<0.05),在PDA上最适生长温度为22℃,最适pH为6.0。碳素营养和氮素营养均可影响菌丝的生长。

附球属真菌DT-014对杂草的致病性及生物学特性研究

以青海省西宁市大通县鹞子沟自然发病的大刺儿菜叶片中分离出的附球属真菌DT-014为研究对象,通过发酵喷雾法接种测定其对4种盆栽杂草猪秧秧(Galium spurium L.)、藜(Chenopodium album L.)、冬葵(Malva verticillate L. var.crispa)、密花香薷(Elsholtzia densa Benth.)的致病性和5种作物蚕豆(Vicia faba L.)、豌豆(Pisum sativum L.)、青稞(Hordeum vulgare L.)、小麦(Triticum aestivum L.)、油菜(Brassica napus L.)的安全性,并通过单因素试验,以菌落直径和其孢子悬浮液OD600值为测量标准,探究菌株DT-014的最适生长培养基、碳源、氮源、固态发酵基质。结果表明,DT-014对藜(C.album)和猪秧秧(G.spurium)致病力较强,其次为密花香薷(E.densa),对冬葵(M.crispa)致病力最低。DT-014对于小麦(T.aestivum)、蚕豆(P.sativum)、青稞(H.vulgare)、豌豆(P.sativum)相对安全,对油菜(B.napus)有轻微影响。DT-014的最适培养基为蛋白胨培养基,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母膏,最适固态发酵基质为大豆粉。

玉米白斑病的症状识别与诊断

由宽颈附球孢菌Epicoccum latusicollum Qian Chen, Crous&L. Cai引起的玉米白斑病正在我国局部地区流行,导致重大损失,并有扩大流行范围的趋势。为了增加植保及玉米抗病育种工作者对玉米白斑病的了解,本文描述了该病害的症状特点、病原菌特征,总结了发生规律、病害循环及分离鉴定和诊断技术。玉米白斑病菌能在病残体上越冬,种子带菌是其远距离传播的主要途径,风夹雨、昆虫及农事操作人员活动是近距离传播途径。7月中下旬至9月中下旬是白斑病流行高峰期,病菌与玉米适宜生长温度基本一致,具有扩散传播的风险。

白及根腐病病原菌的鉴定及抑制效应研究

为明确鉴定白及块茎腐烂病(根腐病)的病原菌,并筛选能够抑制病原菌的中药材提取物。该研究利用常规组织分离法对病原菌进行分离,通过形态学和分子生物学技术对致病菌株进行鉴定,同时观察了7种中药材提取物对病原菌的抑菌效果。结果表明:(1)从感病叶片、叶鞘及块茎中共分离得到14株真菌和4株细菌,病原菌室内和室外回接表明菌株GF-1致病症状与田间一致,致病率均达到100%。(2)经形态学鉴定,菌株GF-1为附球菌属(Epicoccum)病原菌,菌落白色绒絮状,圆形;菌丝匍匐向外、向上生长,气生,无色,有隔膜,有分枝,具有分生孢子和厚垣孢子。(3)菌株GF-1的ITS序列(全长522 bp)与GenBank中已登录的甘蔗的高粱附球菌(E.sorghinum,MN493119.1)序列一致性最高,达99.62%,与已报道的白及叶斑病致病菌高粱附球菌(E.sorghinum,MF948994.1)的一致性为98.88%。(4)培养基中含有0.1~0.2 g·mL^(-1)的青钱柳等7种中药材提取物,能够完全抑制GF-1菌落的生长;当培养基中含有0.05 g·mL^(-1)的提取物时,肉桂和丁香提取物仍然能够完全抑制菌落的生长。综上认为,引起白及根腐病的致病菌为附球菌属高粱附球菌(E.sorghinum),培养基中分别含有0.1~0.2 g·mL^(-1)的青钱柳、白及、厚朴、八角、肉桂、蛇床子和丁香7种中药材提取物且均能完全抑制致病菌的生长。该研究结果为白及根腐病的防治提供了理论指导。

紫花苜蓿叶枯病病原菌鉴定、生物学特性及防治药剂筛选

为明确紫花苜蓿(Medicago sativa L.)叶枯病病原菌种类及生物学特性,筛选出有效防治药剂,本试验于2023年8月在黑龙江省肇东市和大庆市分别采集紫花苜蓿叶枯病病样,采用组织分离法分离并纯化病原菌,依据柯赫氏法则验证致病性,通过菌丝生长速率法进行室内药剂筛选。形态学结合分子生物学分析结果表明,引起紫花苜蓿叶枯病的病原菌为黑附球菌(Epicoccum nigrum)。生物学特性研究结果表明,菌丝生长最适温度25℃、最适pH值为10,全光照条件有利于菌丝生长,菌丝在马铃薯蔗糖琼脂(Potato saccharose agar,PSA)培养基上生长速度最快,在水琼脂(Water agar,WA)培养基上生长速度最慢。碳源和氮源选择上,菌丝分别在麦芽糖和磷酸二氢铵上生长速度最快,在蔗糖和硝酸钾上生长速度最慢。室内药剂毒力测定表明,30%吡唑醚菌酯抑菌作用最强,半数效应浓度(Median effect concentration,EC 50)为0.2819μg·mL^(-1)。

一株蒲公英内生真菌Epicoccum sorghinum 1-2次级代谢产物研究

运用硅胶柱、凝胶柱和半制备高效液相色谱等方法对一株蒲公英内生真菌Epicoccum sorghinum 1-2发酵产物中的次级代谢产物进行分离纯化,通过核磁共振谱(NMR)及质谱(MS)等现代波谱分析方法进行化合物的结构解析,并采用滤纸片法测定化合物的抗菌活性。最终从E.sorghinum 1-2的发酵产物中分离鉴定了7个化合物,分别为(4R*,5R*,6S*)-4,5-二羟基-6-(6'-甲基水杨酸氧基)-2-甲氧基甲基-2-环己烯-1-酮(1)、(4R*,5R*,6S*)-4,5-二羟基6-(6′-甲基水杨酸氧基)-2-甲基-2-环己烯-1-酮(2)、(4R,5R,6S)-4,5-二羟基-6-(6′-甲基水杨酸氧基)-2-羟基甲基-2-环己烯-1-酮(3)、(-)-gabosine E(4)、theobroxide(5)、3-氯代龙胆醇(6)和3-羟基苯甲醇(7)。其中化合物1~5是顶环氧菌素类化合物,化合物6和7是苯酚类化合物。化合物1和2为首次报道的新化合物,化合物6对金葡菌具有显著的抑菌作用。

甘蔗环斑病致病菌的鉴定及生物学特性分析

甘蔗环斑病是甘蔗常见的一种病害,在我国广东、广西等地较为常见。本研究从广西玉林地区的甘蔗病叶中分离到1株真菌菌株,命名为YLES 1,并按照科赫氏法则对分离菌进行致病性测定,证实了分离菌是甘蔗环斑病的病原菌。通过病原菌的形态观察,发现该真菌与附球菌属(Epicoccum)的形态特征类似。基于分离菌株的核糖体DNA转录间隔区(ITS)、大亚基r DNA(LSU)及β-微管蛋白(Tu)基因序列构建多基因联合系统发育树,其中确定YLES 1属于E.sorghinum,是甘蔗环斑病的病原物。该菌株的生物特性分析结果显示,YLES 1菌株生长的最适温度为28℃,菌丝生长和产孢的最适pH为7~9,最适生长和产孢碳源为蔗糖,最适氮源为酵母浸粉,且全黑暗的条件有利于菌YLES 1的生长。

Four new diphenyl ether derivatives from a mangrove endophytic fungus Epicoccum sorghinum

Four new diphenyl ethers,named epicoccethers K−N(1−4),were purified from the fermentation medium of a fungus Epicoccum sorghinum derived from Myoporum bontioides,and identified through HR-ESI-MS and NMR spectral analysis.Except that compound 1 showed moderate antifungal activity against Penicillium italicum and Fusarium graminearum,the other three compounds showed stronger activity against them than triadimefon.All of them showed moderate or weak antibacterial activity towards Staphylococcus aureus and Escherichia coli with O6 and O78 serotypes except that 3 was inactive to E.coli O6.

附球菌在植物病害生物防治中的应用研究进展

附球菌是一个能产生分生孢子的真菌属,广泛存在于土壤、空气和植物表面,植物体内也常有发现。附球菌对多种植物采前采后病害具有很好的防治效果,是一类重要的拮抗真菌资源。基于此,从附球菌的分类与分布、生防应用、生防机制、影响防效的因素、孢子的制备和质量改进、与化学杀菌剂的联合应用等多个方面进行了综述,并对附球菌生防制剂的应用前景进行了展望。附球菌是目前已知应用潜力较大的真菌种类,在植物病虫害防治领域应用前景广阔。

衡阳烟区烟草叶斑病病原菌的鉴定

【目的】为明确衡阳烟区新发现的一种烟草未知叶斑病病原菌及其生物学特性。【方法】采用科赫氏法则,对病叶进行分离纯化,形态学观察,ITS、EF-1α、β-tubulin和RPB2序列分析,构建系统发育树以及致病性测定等多种方法分析鉴定。【结果】经观察,气生菌丝边缘整齐,正面呈现深灰色,背面深褐色,分生孢子呈椭圆形[(1.76~2.38)μm×(0.85~1.40)μm(n=50)],ycSQ1菌株ITS区、EF-1α、β-tubulin及RPB2序列与高粱附球菌(GenBank登录号分别为MT341779.1、MF987524.1、OP555979.1及MW899504.1)的序列一致度为99%~100%。构建了基于ITS和β-tubulin序列的系统发育树。ycSQ1与高粱附球菌亲缘关系较近(GenBank登录号分别为MK391054.1和MK391058.1),自展值为88%。因此,经形态学观察、分子生物学鉴定和致病性测定,确定引起衡阳烟草产区叶斑病的病原菌为高粱附球菌(Epicoccum sorghinum)。【结论】本研究首次在衡阳地区发现高粱附球菌作为引起烟草叶斑病的病原菌。这一发现对于有效防控该病害、减少其对烟草生产造成的重大经济损失具有一定的参考价值。

18种化学杀菌剂及混配组合对高粱附球菌的抑制效果

目的:探究化学杀菌剂单剂及其混配对高梁附球菌(E.sorghinum)的抑制活性,旨在找出抑菌效果最佳的混配组合。方法:采用Horsfall的方法设计2种化学杀菌剂的混配试验,采用菌丝生长速率法求出各配比的抑菌率和毒性比率。结果:咯菌腈对高粱附球菌的抑制活性最高,EC_(50)达0.32 mg/L;其次为咪鲜胺和氟硅唑,EC_(50)分别为0.38、0.52 mg/L。百菌清、溴菌腈和代森锰锌对病菌的抑制活性较弱,EC_(50)分别为69.24、79.51、84.40 mg/L。氟硅唑和克菌丹以6∶4的比例混配抑制效果最佳,毒性比率达1.40,以2∶8比例的混配毒性比率达1.35;咪鲜胺与咯菌腈以3∶7的比例混配,毒性比率达1.34;以5∶5的比例混配毒性比率为1.31。溴菌腈与百菌清以8∶2的比例混配毒性比率最高,为1.33,其次为7∶3的比例混配毒性比率为1.30。氟硅唑与百菌清以4∶6的比例混配,毒性比率为1.31;溴菌腈与代森锰锌以7∶3的比例混配,毒性比率为1.28。结论:不同化学杀菌剂的混配对于高粱附球菌能够表现出较好的增效抑制活性,且大多为选择性杀菌剂和保护性杀菌剂混配,能够较好发挥预防和治疗的效果,其中以氟硅唑和克菌丹的混配组合增效最佳,其次是咪鲜胺和咯菌腈的混配组合。

一株植物内生真菌Epicoccum nigrum 14one次生代谢产物研究

对分离自地衣Leptogium masiaticum的一株内生真菌黑附球菌Epicoccum nigrum 14one的化学成分进行研究,获得11个化合物,通过核磁共振和质谱技术对化合物结构进行了确证,分别鉴定为1个生物碱化合物fusaricide(1),7个苯并呋喃类化合物epicoccone B(2),4,6-dihydroxy-5-methoxy-7-methyl-1,3-dihydro isobenzofuran(3),5-methyl-epicoccone B(4),3,6,7-trihydroxy-5-methoxy-4-methylisobenzo furan-1(3H)-one(5),3-methoxyepicoccone B(6),2,3,4-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-methylbenzyl-alcohol(7),isoochracinic acid(8)和3个epicoccolide类化合物epicocconigrones A(9),epicoccolide B(10),epicocconigrones B(11)。化合物1,9和10具有很强的抗菌活性,该研究结果显示该地衣内生菌株具有开发为微生物源杀菌剂的前景。

盘龙参内生真菌胞内细菌7-2H的分离鉴定和促生特性研究

真菌内生细菌是一类特殊细菌,在寄主真菌体内及生态系统中发挥重要作用。为发掘盘龙参内生真菌内具有促生功能的内生细菌资源,并探索其生物学功能,采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测高粱附球菌Epicoccum sorghinum菌丝中内生细菌的存在后,利用菌丝组织研磨法分离内生细菌,通过菌落形态、生理生化特性及分子特征对其进行鉴定。运用特异性引物验证细菌的内生性,采用Salkowski比色法、CAS比色法以及钼锑抗比色法对菌株的促生特性进行测定,通过水稻种子促生长实验初步验证内生细菌的促生长能力,并对内生细菌进行全基因组测序和促生相关功能基因分析。真菌E.sorghinum菌丝内能观察到与荧光素标记的单链核酸探针杂交后的细菌,证实其菌丝内含有细菌,从菌丝内分离出一株内生栖稻根瘤菌Rhizobium oryzihabitans 7-2H,具有产吲哚乙酸(IAA)、铁载体和溶磷能力,可显著提高水稻幼苗的茎长、根长、鲜重和干重。菌株7-2H与标准菌株R.oryzihabitans M15基因组之间的平均核酸一致性(average nucleotide identity,ANI)值为96.98%,通过对基因组分析发现,菌株7-2H含有与产IAA、铁载体及溶磷能力相关的基因。分离得到一株真菌内生栖稻根瘤菌,该菌具有良好的促进植物生长特性,可作为后续研发微生物菌肥的菌种资源。

湖南郴州烟区一种新型烟草叶斑病病原菌的分离与鉴定

烟草叶部病害是烟草生产中的主要病害,严重影响烟叶的产量和品质,易流行造成重大经济损失。2020—2021年对湖南省各烟区的烟草病害进行了调查,在郴州烟区烟叶上发现了一种新的叶部病害。为了明确引起该叶部病害的病原菌,采集了具有典型症状的烟草病叶进行病原菌的分离、纯化、菌落形态观察、分子生物学鉴定以及致病性测定。结果表明,该叶部病害是由高粱附球菌Epicoccum sorghinum引起的叶斑病,该病害侵染烟草叶片,病斑形状为椭圆形或不规则形,呈淡褐色或深褐色,病斑周围有明显的黄色晕圈。据查这是湖南省首次发现由E. sorghinum引起的烟草叶斑病。

基于ISSR标记的多花黑麦草附球菌遗传多样性分析

【目的】附球菌(Epicoccum)引起的叶斑病在多花黑麦草上普遍发生,本文探究西南不同地理来源附球菌菌株的遗传差异性和亲缘关系。【方法】以贵州花溪、重庆南川和合川、云南曲靖、四川崇州5个地区获得的37株代表性Epicoccum菌株为材料,利用真菌基因组DNA提取试剂盒提取供试菌株的基因组DNA;用35条ISSR引物对不同地理来源的8株菌株进行预扩增,之后选用其中扩增条带数多的引物对所有参试菌株进行扩增,将数据整理成0、1矩阵,利用NTSYSpc(Version 2.10e)、PopGene(Version 1.32)和GenAIEx6.51软件分别进行聚类分析和主成分分析。【结果】35条ISSR引物中,有6条多态性丰富,条带清晰;供试6条引物共扩增出63条多态性条带,多态性比例为100%。菌株间的遗传相似系数为0.3100~0.9300。当遗传相似系数为0.4180时,37株Epicoccum被划分为5个类群。5个居群的平均遗传一致度(IN)和平均遗传距离(D)分别为0.9168和0.0871,37株供试菌株的平均基因多样性指数(H)和Shannon’s信息指数(I)分别为0.3628和0.5388,均高于5个居群的平均值(0.3121和0.4606),相对应的遗传分化系数(Gst)为0.1289,基因流值(Nm)为3.3794。【结论】从聚类分析结果可知ISSR类群划分与菌种分类之间存在一定相关性,不同地理来源的菌株之间遗传相似性较高;主成分分析(PCoA)结果表明遗传多样性与菌株的地理来源不存在明显相关性。

半夏内生真菌的初步研究

从健康无病害的半夏(Pinellia ternate)根、茎、叶和花组织中分离获得内生真菌共计61株,对其进行形态学鉴定后,针对不产孢的菌株,测定了ITSrDNA序列以进行分子鉴定。分离到的内生真菌分别来自11个属,以半知菌为主要群落,其中Hyphomycetes,Zygomycetes和Coelomycetes的比例分别为62.2%,18.1%和8.2%;镰刀菌属(Fusarium spp.)是半夏植物中分离率最高(6%)的属,其余主要优势属为Alternaria,Mucor,Epicoccum,Mortierella和Plectosphaerella。研究表明:从半夏球茎组织中分离到的内生真菌数量多于其他组织。

具有抗菌活性的水杉内生真菌的分离及筛选

从水杉(Metasequoia glyptostroboides Hu et Cheng)树皮、叶片中分离筛选得到了17株形态各不相同的内生真菌,采用对峙培养法筛选对植物病原真菌,层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)﹑禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)﹑玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)﹑玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)具有拮抗作用的菌株,筛选得到了1株对以上4种病原菌具有广谱抗菌活性的菌株,命名为SS-17。通过对SS-17菌株的形态特征观察及ITS分子鉴定,初步鉴定为黑附球菌(Epicoccum nigrum)。