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内蒙古地区神经致病型马疱疹病毒1型的分离与鉴定
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作者 冯心如 刘佳利 +5 位作者 李静 丁玉林 王文龙 高娃 张迪 王金玲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期636-640,共5页
为调查内蒙古四子王旗某马场马流产是否由马疱疹病毒1型(EHV-1)感染导致,本研究采集该场马流产胎儿肝、脾等组织,将组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传5代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过gB基因的PCR及透射电镜对分离病毒进行鉴... 为调查内蒙古四子王旗某马场马流产是否由马疱疹病毒1型(EHV-1)感染导致,本研究采集该场马流产胎儿肝、脾等组织,将组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传5代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过gB基因的PCR及透射电镜对分离病毒进行鉴定,采用2代测序技术对分离病毒全基因组测序,并进行分离病毒gB基因的同源性及遗传进化分析。采用SnapGene6.0.2软件分析分离病毒ORF30基因及其编码氨基酸序列。结果显示,组织上清液接种MDBK细胞并盲传5代后,细胞出现典型的圆缩、融合、脱落和聚堆成葡萄串状等细胞病变特征;EHV-1 gB基因的PCR检测结果呈阳性;电镜观察可见疱疹病毒典型的形态特征,表明分离到1株EHV-1,命名为EHV-1-NM2021。同源性分析结果显示:分离株EHV-1-NM2021 gB基因序列与国内外EHV-1参考株gB基因序列的同源性为97.7%~100%;构建gB基因的系统发育进化树,结果显示该基因与EHV-1德国株(RacL11)、澳大利亚株(438-77)处于同一进化分支,亲缘关系较近。此外,ORF30基因序列及氨基酸序列比对结果显示,EHV-1-NM2021 ORF30基因nt2254为鸟嘌呤(G),aa752为天冬氨酸(D),该分离株为神经致病型病毒。本研究首次在内蒙古鉴定并分离到神经致病型EHV-1,丰富了国内EHV-1的流行病学数据库,为EHV-1感染所导致马流产的防控奠定了研究基础。 展开更多
关键词 马流产 神经致病型马疱疹病毒1型 遗传进化
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驴流产样品中马疱疹病毒2型的鉴定与遗传进化分析 被引量:3
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作者 杨恩慧 佟盼盼 +3 位作者 田澍瑶 潘娟娟 况玲 谢金鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期315-318,共4页
为了解马疱疹病毒2型(EHV-2)在驴群中的流行情况,本研究采集新疆伊犁察布查尔锡伯自治县某驴场流产母驴血清104份,利用PCR方法检测EHV-2的携带情况。结果显示,4份驴血清携带EHV-2,阳性率为2.9%,表明该驴场流产母驴携带EHV-2。遗传进化... 为了解马疱疹病毒2型(EHV-2)在驴群中的流行情况,本研究采集新疆伊犁察布查尔锡伯自治县某驴场流产母驴血清104份,利用PCR方法检测EHV-2的携带情况。结果显示,4份驴血清携带EHV-2,阳性率为2.9%,表明该驴场流产母驴携带EHV-2。遗传进化分析显示,本研究鉴定的EHV-2 Chabuchar16、Chabuchar31和Chabuchar34与波兰EHV-2 PL_EHV2_44、PL_EHV2_39_Ⅷ株处于同一进化分支,EHV-2 Chabuchar35与波兰EHV-2处于另一进化分支,表明有2种EHV-2基因型感染驴,且均与致伊犁马流产的EHV-2 XJ-YLZS28和XJ-YLZS28株亲缘关系较远。同源性分析显示:EHV-2 Chabuchar16、Chabuchar31和Chabuchar34与波兰马源EHV-2 PL_EHV2_39_Ⅷ株g B基因序列同源性为98%~99.6%,氨基酸序列同源性为97.5%~99.6%;EHV-2 Chabuchar35与波兰马源EHV-2PL_EHV2_3_I株g B基因序列同源性为99.7%,氨基酸序列同源性为100%,表明驴源EHV-2可能为外来病毒,且来源于马。另外,本研究鉴定的4株EHV-2 g B氨基酸序列在D^(165)N、P^(183)T、R^(196)K、S^(202)V和K^(217)R等位点发生了突变。本研究首次在流产驴血清中检测到EHV-2,并对其g B基因进行了遗传进化分析,为驴源EHV-2的流行病学研究提供了基础数据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒2型 GB基因 进化树
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新疆部分地区马疱疹病毒1型感染的血清学调查 被引量:4
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作者 胡月 高雁怩 +5 位作者 加尔肯 车传忠 王旭蕾 姜平 冉多良 刘建华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期845-850,共6页
旨在了解新疆地区马疱疹病毒1型感染的流行现状和特点,本研究于2019—2020年从新疆乌鲁木齐、昌吉州、伊犁州、巴州16处规模化马场收集1657份马血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行抗体检测,对不同地区、品种、性别及年龄马匹的... 旨在了解新疆地区马疱疹病毒1型感染的流行现状和特点,本研究于2019—2020年从新疆乌鲁木齐、昌吉州、伊犁州、巴州16处规模化马场收集1657份马血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行抗体检测,对不同地区、品种、性别及年龄马匹的马疱疹病毒1型抗体阳性率进行统计分析。结果显示,乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州马疱疹病毒1型抗体阳性率分别为39.34%、22.56%、90.52%、5.00%;纯血马、混血马、哈萨克马、伊犁马、焉耆马、普氏野马的EHV-1抗体阳性率分别为20.34%、32.93%、44.92%、19.35%、5.00%、90.52%;普氏野马与家马的EHV-1抗体阳性率分别为90.52%和29.32%;家马中新疆本土品种马与引进品种马的EHV-1抗体阳性率分别为31.70%和25.50%;母马与公马的EHV-1抗体阳性率分别为38.84%和22.00%;处于幼年、青年、成年、老年阶段的马匹EHV-1抗体阳性率分别为35.37%、33.00%、34.31%、23.81%。结果提示,新疆乌鲁木齐、伊犁州、昌吉州、巴州规模化养殖场普遍存在EHV-1感染,且不同地区、品种、性别及年龄的马EHV-1感染率差异显著(P<0.05)。本研究为新疆地区EHV-1感染的探讨和防控工作提供调查数据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 酶联免疫吸附试验 血清学调查
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THE EFFECTS OF MAGNETIC FIELD ON TWO-PHASE LIQUID METAL FLOW 被引量:1
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作者 Rong Sheng (Institute of Mechanics,Chinese Academy of Sciences,Beijing) 《Acta Mechanica Sinica》 SCIE EI CAS CSCD 1990年第2期128-132,共5页
In this paper,the basic equations of two-phase liquid metal flow in a magnetic field are de- rived,and specifically,two-phase liquid metal MHD flow in a rectangular channel is studied,and the expres- sions of velocity... In this paper,the basic equations of two-phase liquid metal flow in a magnetic field are de- rived,and specifically,two-phase liquid metal MHD flow in a rectangular channel is studied,and the expres- sions of velocity distribution of liquid and gas phases and the ratio K_0 of the pressure drop in two-phase MHD flow to that in single-phase are derived.Results of calculation show that the ratio K_0 is smaller than unity and decreases with increasing void fraction and Hartmann number because the effective electrical conduc- tivity in the two-phase case decreases. 展开更多
关键词 two-phase equid metal MHD flow magnetic field VELOCITY pressure gradient void fraction Hartmann number
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The Emerging Trade in Donkey Hide: An Opportunity or a Threat for Communities in Kenya?
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作者 Gemma Carder Oscar Ingasia +3 位作者 Evans Ngenoh Samuel Theuri Desmond Rono Philemon Langat 《Agricultural Sciences》 2019年第9期1152-1177,共26页
Donkey hides are used in a form of Traditional Chinese medicine called ejiao, the demand for ejiao is currently so high the global donkey population is currently in decline. Africa’s donkey population is considered a... Donkey hides are used in a form of Traditional Chinese medicine called ejiao, the demand for ejiao is currently so high the global donkey population is currently in decline. Africa’s donkey population is considered a key source for the trade, with Kenya being highlighted as being particularly affected. In Kenya donkeys play a vital contribution to people’s livelihoods;this study aimed to explore the potential impact of the donkey hide trade on small holder farmer’s livelihoods. The study was conducted in five counties in Kenya;data was collected using household survey questionnaires, focus group discussions and key informant interviews. When household survey participants (n = 421) were asked if the number of donkeys in their herd had decreased within the last two years 34.2% (n = 144) reported a decrease, of those 43.8% (n = 63) reported the selling of donkeys as the primary cause of reduction in herd size. Increased money spent on the transportation of farm produce, water and firewood was the most frequently reported effect of the loss of donkeys (62.5%, n = 263). Some focus group discussion participants said that they had previously sold their donkeys to raise money for school fees, likewise 43% (n = 97) of focus group discussion participants said that they would sell their donkeys to pay medical bills. Results from the study suggest that small holder farmers are choosing to sell their donkeys for an instant boost in income, but long-term this is unlikely to be a sustainable livelihood option. 展开更多
关键词 DONKEY HIDE TRADE Kenya Livelihoods Traditional Chinese Medicine Ejiao Working equidS
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Comparison of Two Protocols of Agar Gel Immunodiffusion(AGID)Used to Diagnose of Equine Infectious Anemia(EIA)
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作者 Maria do Rosario Oliveira da Cunha Beltrao Cid Aristoteles de Siqueira Alencar +4 位作者 Adriana Soares Leite Leonardo Tavares Freitas Julianne Cortizo Gonzalez Vania Lucia de Assis Santana Helio Cordeiro Manso-Filho 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2015年第7期169-174,共6页
The aim of the present study was to compare two protocols of Agar Gel Immunodiffusion (AGID) that can be used to diagnose Equine Infectious Anemia (EIA). Different volumes of reagents and support for agar gel were use... The aim of the present study was to compare two protocols of Agar Gel Immunodiffusion (AGID) that can be used to diagnose Equine Infectious Anemia (EIA). Different volumes of reagents and support for agar gel were used, as recommended by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA) and the World Organization for Animal Health (OIE). Equidae sera samples (n = 1000) were tested using a national commercial kit and different volumes (i.e. 25 μL—MAPA and 50 μL—OIE) of reagents and standard sera. Antigen was used as recommended by MAPA. The results were assessed by two operators, 48 hours after beginning the test. At the end of the experiment, a Kappa index of 1 was obtained by the operators, for the interpretation of the results and for the different volumes of reagents used. Similar results of agreement (Kappa index = 1) were obtained when using slides or Petri dishes as support for the agar gel. In both cases, an almost perfect agreement was achieved, suggesting that the use of different supports does not affect the results. These findings indicate that both protocols (MAPA and OIE) can be used to diagnose EIA. 展开更多
关键词 Horses equidS EIA Diagnosis AGID SEROLOGY
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新疆地区马呼吸道致病病毒的检测及其遗传进化分析 被引量:5
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作者 张磊 佟盼盼 +5 位作者 任美灵 宋小珍 帕丽旦·努尔兰 贾陈阳 况玲 谢金鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期777-781,共5页
为了解致汗血马马驹呼吸道疾病的病原,本研究采集新疆乌鲁木齐市南山某汗血马马场82份汗血马的鼻拭子样品(包括4匹患呼吸道疾病的汗血马马驹、6匹健康汗血马马驹和72匹成年健康汗血马),经处理鼻拭子样品、提取病毒RNA、反转录、经PCR扩... 为了解致汗血马马驹呼吸道疾病的病原,本研究采集新疆乌鲁木齐市南山某汗血马马场82份汗血马的鼻拭子样品(包括4匹患呼吸道疾病的汗血马马驹、6匹健康汗血马马驹和72匹成年健康汗血马),经处理鼻拭子样品、提取病毒RNA、反转录、经PCR扩增及产物纯化后由公司进行高通量测序和宏病毒组学分析。结果显示,与健康马相比,患病马驹鼻拭子样品核酸有1 050条reads注释到马疱疹病毒2型(Equid herpesvirus-2,EHV-2)gB基因,且与EHV-2参考株g B基因序列同源性为91.0%~99.3%,初步表明患病马驹鼻拭子样品携带EHV-2。为验证病毒组学结果,参照EHV-2 G9/92(KM924294)gB基因序列,设计引物,经PCR扩增82份汗血马的鼻拭子样品。PCR结果显示患呼吸道疾病马驹鼻拭子样品均扩增出了EHV-2 gB基因片段,EHV-2阳性率为100%(4/4),而健康马驹和成年汗血马鼻拭子样品均呈阴性结果(0/78),表明EHV-2可能与马驹呼吸道疾病有关。同源性分析结果显示,4株EHV-2之间g B基因和氨基酸序列的同源性分别为94.1%~100%和92.0%~100%,与英国、波兰、瑞士、德国和澳大利亚参考株g B基因和氨基酸序列同源性分别为91.0%~99.3%和89.6%~98.2%。gB氨基酸序列遗传进化分析显示,4株EHV-2与波兰、英国参考株处于同一分支,亲缘关系较近。氨基酸位点分析结果显示,4株EHV-2 g B基因编码氨基酸序列均有一些位点发生了突变,主要位于gB蛋白羧基端,表明4株EHV-2 gB基因具有遗传变异多样性。本研究首次在国内马匹中检测到EHV-2,为EHV-2感染致马驹呼吸道疾病的防控及其流行病学研究提供基础数据。 展开更多
关键词 汗血马马驹 呼吸疾病 病毒组学 马疱疹病毒2型 GB基因
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许家窑遗址马科动物的死亡年龄 被引量:1
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作者 栗静舒 张双权 +1 位作者 高星 Henry T.Bunn 《人类学学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期62-73,共12页
普氏野马(Equus przewalskii)和野驴(Equus hemionus)是许家窑遗址动物群中的优势属种。本文基于对这两种动物牙齿材料的测量与分析,确定了遗址中马科动物的死亡年龄,并对上、下文化层的死亡年龄分布进行了研究,以期探知古人类获取肉食... 普氏野马(Equus przewalskii)和野驴(Equus hemionus)是许家窑遗址动物群中的优势属种。本文基于对这两种动物牙齿材料的测量与分析,确定了遗址中马科动物的死亡年龄,并对上、下文化层的死亡年龄分布进行了研究,以期探知古人类获取肉食资源的方式与特点。通过与马科动物在自然生存状态下以及死于不同原因(如疾病或营养衰竭、食肉动物猎杀、现代人类狩猎等)的年龄结构对比,结果表明:古人类在许家窑文化早期(下文化层)可能通过捡拾自然死亡的动物尸体、与食肉类动物抢夺猎物、主动狩猎等多种方式获取马科动物,而在许家窑文化晚期(上文化层)可能以主动狩猎作为获取马科动物的主要方式。此外,古人类在遗址的早期就可能已经具有捕获整个马科动物居群中任意年龄个体的能力,并能做出最优化判断,有选择地去捕猎脂肪和肉量较高的壮年动物群体。 展开更多
关键词 旧石器时代 许家窑遗址 马科动物 死亡年龄 埋藏学 动物考古学
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Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型的分离及鉴定 被引量:3
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作者 段汝丽 佟盼盼 +8 位作者 邓海峰 帕丽旦·努尔兰 贾陈阳 杨恩惠 田澍瑶 潘娟娟 张子君 况玲 谢金鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期940-945,共6页
为研究伊犁马是否存在Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型(EHV-1)的感染,并分析其遗传进化特征,本研究采集新疆伊犁昭苏县某马场93份伊犁马流产胎儿肺组织样品,经PCR鉴定为EHV-1阳性后,将部分EHV-1阳性的肺组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传3代... 为研究伊犁马是否存在Ⅷ群神经致病型马疱疹病毒1型(EHV-1)的感染,并分析其遗传进化特征,本研究采集新疆伊犁昭苏县某马场93份伊犁马流产胎儿肺组织样品,经PCR鉴定为EHV-1阳性后,将部分EHV-1阳性的肺组织研磨上清液接种MDBK细胞,盲传3代,待出现细胞病变时收集细胞及培养上清,通过PCR及透射电镜对EHV-1进行鉴定,并对其进行不同基因的遗传进化分析。结果显示,93份临床样品中有43份样品呈EHV-1阳性。将其中11份阳性样品接种MDBK细胞盲传3代后,有4份出现细胞病变,电镜观察可见疱疹病毒典型的形态特征,且均经PCR检测到EHV-1 g B基因,表明分离到4株EHV-1,分别命名为XJ-YLZS-21、XJYLZS-22、XJ-YLZS-29和XJ-YLZS-31。同源性分析结果显示,4株EHV-1分离株gB基因序列与EHV-1参考株Ab4相应基因序列的同源性为100%。ORF30基因序列分析结果显示,4株分离株第2 254位均为鸟嘌呤(G),编码天冬氨酸(D),表明4株EHV-1分离株为神经致病型EHV。ORF68基因及其编码氨基酸序列的遗传进化分析结果显示,4株EHV-1分离株的核苷酸及氨基酸序列同源性均为100%,并处于独立的进化分支,将其划分为Ⅷ群神经致病型EHV-1。本研究首次在国内鉴定并分离到Ⅷ群神经致病型EHV-1,丰富了EHV-1的流行病学数据库,为EHV-1感染所致马流产的防控奠定了流行病学基础。 展开更多
关键词 伊犁马 流产 疱疹病毒1型 神经致病型 Ⅷ群
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新疆部分地区马疱疹病毒2型gB基因遗传变异分析 被引量:2
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作者 帕丽旦·努尔兰 邓海峰 +7 位作者 段汝丽 贾陈阳 杨恩惠 田澍瑶 潘娟娟 况玲 佟盼盼 谢金鑫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期892-895,共4页
马疱疹病毒2型(EHV-2)是引起马流产的重要病原之一,严重危害马产业的健康发展。为了解EHV-2在流产伊犁马中的流行态势,本研究利用PCR方法检测从新疆伊犁昭苏县6个规模化马场及周边散养户采集的93份马流产胎儿肺组织样品,结果显示,3份伊... 马疱疹病毒2型(EHV-2)是引起马流产的重要病原之一,严重危害马产业的健康发展。为了解EHV-2在流产伊犁马中的流行态势,本研究利用PCR方法检测从新疆伊犁昭苏县6个规模化马场及周边散养户采集的93份马流产胎儿肺组织样品,结果显示,3份伊犁马流产胎儿样品携带EHV-2,阳性率为3.2%(3/93)。同源性分析结果显示,鉴定的3株EHV-2 gB基因序列和氨基酸序列之间的同源性分别为99.9%~100%、99.6%~100%;与澳大利亚、巴西、德国、冰岛、波兰、英国及中国EHV-2参考株gB基因和氨基酸序列的同源性分别为91.6%~96.4%和90.8%~96.2%;与EHV-2新疆参考株CJ-31-06和CJ-07相比,该3株EHV-2 gB氨基酸序列有12个位点发生突变,而与其他参考株gB氨基酸序列比对显示有26个氨基酸位点发生突变,表明3株EHV-2 gB基因具有遗传变异多样性。遗传进化分析显示鉴定的3株EHV-2与波兰、英国、瑞士EHV-2参考株处于同一进化分支,亲缘关系较近,与引起新疆马呼吸道疾病的EHV-2参考株处于不同进化分支。本研究首次在国内伊犁马流产样品中检测到EHV-2,并对其gB基因进行遗传进化分析,为我国EHV-2感染的防控及流行病学研究提供基础数据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒2型 伊犁马 流产胎儿 GB基因 进化树
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马疱疹病毒5型的鉴定及遗传进化分析 被引量:2
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作者 佟盼盼 张磊 +6 位作者 宋小珍 任美灵 贾陈阳 帕丽旦·努尔兰 谭美玲 况玲 谢金鑫 《动物医学进展》 北大核心 2021年第4期35-38,共4页
采集乌鲁木齐某马术俱乐部226匹纯血马鼻拭子样品,用高通量测序检测纯血马携带病毒多样性,结果宏病毒组学分析共产生73664946条reads,有16067条reads(0.022%)注释为哺乳动物病毒,其中105条reads注释到马疱疹病毒5型(EHV-5)gH基因。根据G... 采集乌鲁木齐某马术俱乐部226匹纯血马鼻拭子样品,用高通量测序检测纯血马携带病毒多样性,结果宏病毒组学分析共产生73664946条reads,有16067条reads(0.022%)注释为哺乳动物病毒,其中105条reads注释到马疱疹病毒5型(EHV-5)gH基因。根据GenBank中的EHV-5参考株2-141/67 gH基因序列,设计特异性引物,验证宏病毒组学结果,并对gH基因的氨基酸序列进行遗传进化分析。结果14匹健康纯血马鼻拭子样品呈EHV-5阳性,阳性率为6.2%(14/226),序列分析表明,鉴定的14株EHV-5 gH基因的核苷酸和氨基酸序列与澳大利亚、意大利及日本分离株gH基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为98.4%~100%和90.3%~100%。遗传进化分析显示我国14株EHV-5与澳大利亚2-141/67和EHV-5.2-141株亲缘关系较近,而与意大利glycoprotein H株、日本16-I-1064和1-I-790株处于不同分支。 展开更多
关键词 马疱疹病毒5型 纯血马 GH基因 进化树
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山东地区规模驴场马疱疹病毒流行病学调查
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作者 张敬文 刘文强 +7 位作者 张健鹏 许丹丹 张伟 姜桂苗 王长法 王彤彤 李亮亮 郭晶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期497-501,共5页
为研究山东地区马疱疹病毒(EHV)流行情况,本实验从山东地区76个规模驴场采集鼻拭子1 834份,采用PCR检测鼻拭子样品中EHV-1、EHV-4和EHV-8,对检测数据进行流行病学分析。结果显示,在鼻拭子样品中均未检测到EHV-1和EHV-4;EHV-8病原的场感... 为研究山东地区马疱疹病毒(EHV)流行情况,本实验从山东地区76个规模驴场采集鼻拭子1 834份,采用PCR检测鼻拭子样品中EHV-1、EHV-4和EHV-8,对检测数据进行流行病学分析。结果显示,在鼻拭子样品中均未检测到EHV-1和EHV-4;EHV-8病原的场感染率为76.32%(58/76),个体感染率为6.65%(122/1834)。EHV-8分离株与EHV-8 Wh株同源性最高,为99.6%~99.7%。经统计分析,不同地区间驴的EHV-8感染率差异显著(P<0.05),以德州地区最高,为13.36%(29/217);不同年龄驴间EHV-8感染率差异不显著(P>0.05);驴在冬季EHV-8感染率为14.57%(73/501),显著高于其他季节(P<0.05)。本研究首次对山东地区规模驴场EHV的流行进行了系统调查,为EHV的流行风险评估提供了重要参考。 展开更多
关键词 规模驴场 马疱疹病毒 流行病学调查
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驴源马疱疹病毒8型ORF72基因原核表达及多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 许丹丹 张敬文 +2 位作者 张健鹏 王长法 刘文强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期117-121,共5页
为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载... 为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并优化表达,获得gD重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定表达产物。使用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化gD重组蛋白,并免疫小鼠,共免疫3次,每次间隔2周。三免2周后,通过Western-blot对鼠抗EHV-8 gD多克隆抗体进行鉴定,并使用间接ELISA测定其效价。结果表明:试验成功构建EHV-8 gD960基因表达载体并获得gD重组蛋白,gD重组蛋白分子质量约为65 ku,与预期大小相符,且特异性良好。小鼠血清中鼠抗EHV-8 gD960多克隆抗体效价为1∶16 000,该多克隆抗体可以与EHV-8 gD960蛋白发生免疫反应。说明成功表达了EHV-8 gD960重组蛋白并制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价较高,免疫原性较好。 展开更多
关键词 马疱疹病毒8型 ORF72基因 原核表达 多克隆抗体
原文传递
马疱疹病毒1型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 胡月 刘建华 +4 位作者 王雪竹 车传忠 吴桂灵 加尔肯 冉多良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2345-2350,共6页
为快速准确地检测马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1),本研究根据EHV-1基因组序列进化分析筛选出特异性较高的ORF68基因的保守区域设计引物与探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法线性关系良好,相关系数为... 为快速准确地检测马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1),本研究根据EHV-1基因组序列进化分析筛选出特异性较高的ORF68基因的保守区域设计引物与探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,最低检测量为10.2拷贝/μL,比常规PCR敏感1000倍;特异性强,检测EHV-2、EHV-4、EHV-5、马动脉炎病毒和马流感病毒均无交叉反应;重复性好,组内及组间样本检测的Ct值均小于等于2%;对2020年收集的60份伴有呼吸道症状的马匹鼻试子进行检测分析显示本方法的阳性检出率(26.67%)高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(23.33%)和常规PCR(21.67%)。本研究建立了一种快速、灵敏、稳定、特异性强的TaqMan荧光定量PCR检测方法,可用于EHV-1的快速诊断和核酸定量检测,为EHV-1的防控工作提供了有力手段。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型 ORF68基因 荧光定量PCR TAQMAN探针
原文传递
1型和4型马疱疹病毒VHS蛋白在HeLa细胞中的表达与定位
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作者 曲娟娟 胡晓亮 +3 位作者 顾海东 张春苗 冉多良 相文华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期145-147,261,共4页
为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-b... 为了研究1型和4型马疱疹病毒(EHV)VHS蛋白在真核细胞中的表达与亚细胞定位,试验将1型和4型马疱疹病毒VHS基因片段与p3×Flag载体连接,构建p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4重组表达质粒,经脂质体转染HeLa细胞后,用Western-blot验证该蛋白在HeLa细胞中的表达情况,并以激光共聚焦显微成像技术确定VHS蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果表明:重组质粒p3×Flag-VHS-1和p3×Flag-VHS-4在HeLa细胞中获得了表达,且主要聚集于细胞浆。说明VHS蛋白能够在外源真核细胞HeLa中表达,蛋白主要位于HeLa的细胞浆中。 展开更多
关键词 马疱疹病毒 HELA细胞 VHS蛋白 表达 定位 免疫印迹
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吉林省马弓形虫病分子流行病学调查
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作者 赵少伟 王楠 +5 位作者 谢素珠 王浩 张爽 张煊承 李航 贾立军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1791-1795,共5页
为了解吉林省马弓形虫感染情况,本试验共采集辽源、白城、通化和吉林市等地血液样本120份,利用血液基因组提取试剂盒和PCR技术对弓形虫B1基因进行检测。结果表明,弓形虫总体阳性率为9.17%(11/120)。调查的4个地区中辽源阳性率最高14.30%... 为了解吉林省马弓形虫感染情况,本试验共采集辽源、白城、通化和吉林市等地血液样本120份,利用血液基因组提取试剂盒和PCR技术对弓形虫B1基因进行检测。结果表明,弓形虫总体阳性率为9.17%(11/120)。调查的4个地区中辽源阳性率最高14.30%(5/35),其次为白城10.00%(3/30)、通化8.00%(2/25)、吉林市3.30%(1/30),除白城和通化地区间差异不显著(P>0.05)外,其他各地区间差异显著(P<0.05);散养马阳性率为11.10%(10/90),规模化养殖马阳性率为3.30%(1/30),差异显著(P<0.05);母马弓形虫阳性率为9.47%(9/95),公马弓形虫阳性率为8.00%(2/25),性别间差异不显著(P>0.05)。结果证明,吉林省马感染弓形虫的情况普遍存在。本次调查为吉林省马弓形虫病的有效防控提供了科学依据。 展开更多
关键词 吉林省 弓形虫 B1基因
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马属动物CG-β的生物信息学分析
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作者 汤驰 时士成 +2 位作者 廖清超 解鹏 邓亮 《生物技术》 CAS 2018年第6期579-584,共6页
[目的]采用生物信息学的方法对马属动物(马、驴和斑马)绒毛膜促性腺激素β(CG-β)的氨基酸组成、亲/疏水性、二级结构、糖基化位点和三级结构进行预测分析。[方法]利用多种分析软件对马属动物CG-β进行预测分析。[结果]马属动物CG-β脯... [目的]采用生物信息学的方法对马属动物(马、驴和斑马)绒毛膜促性腺激素β(CG-β)的氨基酸组成、亲/疏水性、二级结构、糖基化位点和三级结构进行预测分析。[方法]利用多种分析软件对马属动物CG-β进行预测分析。[结果]马属动物CG-β脯氨酸含量最高;二级结构均以β折叠为主要结构单元;dCG-β在13氨基酸位点发生N-糖基化,zCG-β在13和138氨基酸位点发生N-糖基化;dCG-β、zCG-β分别有14个和13个氨基酸位点发生O-糖基化;构建CG-β三级结构模型稳定可靠。[结论]马属动物CG-β均在29、48、84氨基酸位点附近呈现强疏水性,β折叠占比在50%以上,模型可靠性和稳定性达到标准。 展开更多
关键词 马属动物 CG-β 糖基化 生物信息学
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