乳腺癌中C-erbB2癌基因与雌、孕激素受体和PS2的关系及其预后意义

目的 探讨 C- erb B2癌基因在乳腺癌中的表达及其与雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)及 PS2的关系和预后意义。方法 采用链亲和素法检测 2 4 5例乳腺癌中 C- erb B2的表达。结果 约 6 0 %的乳腺癌有 C- erb B2癌基因表达 ,C- erb B2表达阳性率在 ER、PR及 PS2阳性组分别为 4 5 .19% ,4 8.0 8% ,2 3.2 6 % ,在 ER、PR及 PS2阴性组分别为 71.5 5 % ,70 .4 3% ,5 0 .75 % ,C- erb B2癌基因表达与 ER、PR及 PS2均分别呈负相关 (P<0 .0 5 ) ,其表达与患者年龄、肿瘤大小无关 (P>0 .0 5 ) ,与乳腺癌临床分期晚、组织学分级高、腋淋巴结转移有关 (P<0 .0 5 )。结论检测 C- erb B2癌基因在乳腺癌中的表达有助于乳腺癌预后的判断及治疗方案的制定。

老年宫颈癌p53和c-erbB2表达及其临床意义

背景与目的:老年宫颈癌分子生物学方面的研究尚不多见,因此我们将探讨抑癌基因p53和癌基因c-erbB2表达在其发生发展过程中的意义。方法:应用免疫组化LSAB法检测79例老年宫颈癌及23例正常老年宫颈上皮石蜡切片的p53和c-erbB2蛋白阳性率。结果:老年宫颈浸润癌和正常宫颈上皮p53蛋白阳性率分别为18.98%和0(P<0.01),而c-erbB2表达率为43.04%和34.78%(P=0.63)。组织学分级Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中p53蛋白阳性率分别为50.00%、11.76%和17.14%(P=0.01),c-erbB2表达率分别为80.00%、38.24%及37.14%(P<0.01)。临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期中p53表达率分别为11.11%、15.38%、25.81%(P=0.26),c-erbB2蛋白阳性率为33.33%、38.46%和51.61%(P<0.01)。淋巴结无转移组及转移组p53蛋白阳性率为6.67%、41.67%(P=0.01),c-erbB2表达率为26.67%、58.33%(P=0.08)。结论:p53蛋白在老年宫颈癌发生发展中可能起作用,它可能是预测淋巴结转移的重要指标。c-erbB2基因过度表达可能是老年宫颈癌发生的早期事件。

EGFR和C-erbB2蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨EGFR和C erbB2蛋白与非小细胞肺癌 (NSCLC)的临床生物学行为及预后的关系。方法 采用免疫组化法观察 35例NSCLC患者及 7例非癌肺疾病患者组织标本中EGFR和C erbB2蛋白的表达。结果 EGFR和C erbB2蛋白在 35例NSCLC患者中过表达率分别为 6 5 .7%和 5 7.14 % ,且其过表达与NSCLC患者的TNM分期及淋巴结转移呈显著正相关 (P <0 .0 5 ) ,其中C erbB2蛋白过表达主要与肺腺癌患者的TNM分期及淋巴结转移呈显著正相关。EGFR或 /和C erbB2蛋白过表达的NSCLC患者生存期短、预后差 (P <0 .0 5 )。结论 EGFR和C erbB2蛋白过表达与NSCLC的发生、发展和转移密切相关 ,二者有协同作用 。

雌、孕激素受体及C-erbB2在子宫内膜癌中的表达和意义

目的探讨雌、孕激素受体(Estrogen Receptor ER、Progesterone Receptor PR)及C-erbB2在子宫内膜癌中的表达与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学技术检测56例子宫内膜癌患者子宫内膜中ER、PR及C-erbB2的表达,并对56例患者的临床病理资料进行回顾性分析。结果子宫内膜癌患者内膜ER、PR及C-erbB2阳性率分别为41.07%、57.14%、53.57%。子宫内膜癌中ER表达与肿瘤分化程度、年龄、有无淋巴结转移呈负相关;PR表达与肿瘤组织学类型、分化程度、年龄、浸润肌层深度及有无淋巴结转移均呈负相关;而C-erbB2的表达与内膜癌分化程度、有无淋巴结转移呈正相关。结论激素依赖型子宫内膜癌ER、PR及C-erbB2表达水平均反映了子宫内膜癌的生物学行为,三者的测定对估计预后和指导术后辅助治疗具有重要意义。

原癌基因c-erbB2和EGFR表达与大鼠肺纤维化的相关性

目的研究原癌基因c-erbB2和肺表皮生长因子受体(EGFR)的表达与大鼠肺纤维化的相关性,探讨肺纤维化的发生机制。方法采用博莱霉素气管注射法制造鼠肺纤维化模型。30只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组,分别于第1、14、28天处死大鼠5只并留取标本,采用免疫组化SP法检测在不同程度肺纤维化条件下c-erbB2和肺内源性EGFR的表达,分析其与肺纤维化的相关性。结果①模型组c-erbB2和EGFR表达在各时间点均与对照组有统计学差异(P<0.01);②模型组c-erbB2表达1d最显著,EGFR表达28d达到顶峰,与同组其他时间点均有统计学差异(P<0.01);③模型组c-erbB2和EGFR水平在第14天与最低水平组(分别为第28天和第1天)比较有统计学差异(P<0.01);④模型组c-erbB2和EGFR表达与肺纤维化程度密切相关(相关系数r分别为-0.835和0.77,P<0.01)。结论 c-erbB2活化的同时,EGFR表达也逐渐增强,且c-erbB2、EGFR的活化水平与肺纤维化程度密切相关;c-erbB2和EGFR激活可能参与了肺纤维化的发生。

艾迪注射液对体外培养的ErbB2阳性乳腺癌细胞的抗肿瘤作用

目的研究艾迪注射液对体外培养的ErbB2阳性乳腺癌BT-474、SK-BR-3及HCC^(-1)954细胞的抗肿瘤作用。方法通过MTS法测定不同质量浓度艾迪注射液抑制细胞增殖作用;流式细胞术分析不同药物浓度对不同乳腺癌细胞的诱导凋亡及坏死作用;细胞计数分析仪分析药物作用下细胞直径分布的改变。结果不同质量浓度(10~100mg·ml^(-1))艾迪注射液均能够显著抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.05,P<0.01)、诱导凋亡及坏死(P<0.01)、显著缩小细胞直径(P<0.01)。结论艾迪注射液对肿瘤细胞具有抑制增殖和促进细胞凋亡及坏死的作用,并使得细胞直径显著减小。

乳腺浸润性导管癌超声征象与ER、PR、c-erbB2表达的相关性研究

目的研究乳腺浸润性导管癌超声征象与ER、PR、c-erbB2表达的相关性。方法经病理证实的120例乳腺浸润性导管癌,均术前超声检查按超声征像将肿块分为毛刺组、周边强回声晕组、后方回声衰减组及微力钙化组,且术后标本免疫组化染色,检测ER、PR、c-erbB2的表达水平,分析超声征象与其表达的关系。结果ER、PR的表达在毛刺组、周边强回声晕组、后方回声衰减组高于不具有上述征象的肿块;ER、PR的表达在肿块大于2cm组低于小于2cm组,在有腋窝淋巴结转移组低于无腋窝淋巴结转移组,而c-erbB2的表达则正相反;差异均有统计学意义。结论乳腺浸润性导管癌超声征象与ER、PR、c-erbB2的表达密切相关,两者结合可预测乳腺浸润性导管癌的生物学行为特征及预后,指导临床制定个体化的治疗方案。

组织芯片简易制作方法及免疫组化有效性分析

目的探索一种组织芯片的简易制作方法,并对它的有效性进行分析。方法在实验中探索出组织芯片的制作方法,收集乳腺癌病例124例,制作成直径1.6cm的组织芯片,进行雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及c-erBb2受体免疫组化染色,同时与普通切片的免疫组化染色结果对比,并进行统计学分析。结果组织芯片与普通切片的ER、PR及c-erBb2染色积分(0～7分)显著相关,ER、PR及c-erBb2的表达(阳性/阴性)一致率分别达94.35%、93.55%和91.94%。比较组织芯片与普通切片的ER、PR及c-erBb2的表达,两者之间无统计学差异(P>0.05),即组织芯片的结果与普通切片的结果是一致的。结论自制1.6mm直径的组织芯片在进行免疫组化染色时能够代表普通切片,自制组织芯片的方法可靠有效。

ErbB信号与蛋白激酶B在快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤中的作用

为了研究ErbB受体与蛋白激酶B在心力衰竭发生机制中的作用,建立快速起搏诱导恒河猴心力衰竭模型。采用颈总动脉插管技术,测定左心室最大压力上升速度(LVdp/dtmax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LVSP)等血流动力学指标;采用电化学发光免疫测定法观察脑钠肽(BNP)含量;采用RT-PCR方法测定ErbB2、蛋白激酶B(PKB)、Bcl-xl mRNA表达水平;采用Western blotting检测蛋白激酶B活性(phospho-PKB,即磷酸化蛋白激酶B蛋白水平)及凋亡相关基因Bcl-xl的蛋白水平。快速起搏诱导心力衰竭模型恒河猴心肌收缩能力显著下降,心衰标志物脑钠肽水平明显上升(P<0.05)。与对照组比较ErbB2,PKB及Bcl-xl mRNA表达水平明显下降(P<0.05),同时心肌组织蛋白激酶B活性显著下降,Bcl-xl蛋白水平也明显下降(P<0.05)。快速起搏所致猴心衰心肌细胞损伤的机制可能与ErbB2、下游蛋白激酶B、凋亡抑制基因Bcl-xl表达水平下降及蛋白激酶B活性下降有关。

嵌合抗原受体T细胞治疗多形性胶质母细胞瘤的最新进展

多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是恶性程度最高的脑胶质瘤,传统手术结合放、化疗疗效有限。嵌合抗原受体是由单一分子组成的抗原重组受体,重新定向T细胞的特异性和功能,由CD28或4-1BB构成的第二代CAR-T能识别抗原,完全活化T细胞并增强T细胞功能和持久性,是新兴GBM疗法的关注焦点。本文从CAR-T研究现状出发,主要介绍其发展历程和GBM相关的有效靶点,综述其理论基础,着重以白介素13受体α2、表皮生长因子受体变异Ⅶ、人表皮生长因子受体2和酪氨酸蛋白激酶受体A2这四种胶质瘤相关抗原为例,探讨靶点的结构、功能特性、前期研究和临床研究前景。选择性表达在GBM的白介素13受体α2在临床Ⅰ期治疗复发性GBM是安全有效的;表皮生长因子受体变异Ⅷ只存在于癌细胞和胶质母细胞瘤干细胞,与预后不良密切相关,正在进行Ⅰ、Ⅱ期临床试验;表皮生长因子受体2和酪氨酸蛋白激酶受体A也取得重大进展。这些特异性CAR-T可能成为治疗相应靶向阳性的GBM的重要免疫疗法。本文集中总结了目前CAR-T治疗GBM的应用价值及挑战。

scFv亲和力对CAR-T细胞抗肿瘤能力的影响

目的:比较抗原亲和力不同的scFv片段对CAR-T细胞增殖、分化和抗肿瘤能力的影响。方法:分别构建靶向ErbB2的FRP5(K_D=30 nmol/L)和chA21(K_D=11 nmol/L)CAR慢病毒表达载体,包装病毒后制备CD8^+CAR-T细胞;在CAR-T细胞扩增过程中,通过计数细胞来检测细胞增殖;利用流式细胞术检测CAR-T细胞分化情况;利用荧光素酶活性法检测杀伤活性;用ELISA检测CAR-T细胞在肿瘤识别过程中IL-2和IFN-γ的分泌情况;利用成像流式细胞仪检测scFv亲和力对CAR-T细胞形成免疫突触能力的影响。结果:成功构建了CD8^+ CAR-T细胞,FRP5和chA21 CAR阳性率均达50%左右;CAR-T细胞的增殖和分化状态没有差异;荧光素酶活性法显示chA21-CAR-T细胞裂解肿瘤细胞的能力较强;ELISA检测结果显示chA21-CAR-T细胞分泌细胞因子能力更强;chA21-CAR-T细胞形成免疫突触的能力更强。结论:包含高亲和力scFv的chA21-CAR-T细胞具有较强的抗原依赖性杀伤活性。

过表达HER2增强黑素瘤B16细胞的增殖及侵袭和迁移

目的构建稳定过表达人表皮生长因子受体2(HER2/ErbB2)基因的黑素瘤细胞株,研究其对黑素瘤细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。方法将pCMV3-ErbB2(人源)重组质粒通过脂质体法转染至黑素瘤B16细胞株,用潮霉素B筛选出耐药阳性克隆。实时定量PCR(qRT-PCR)检测各单克隆ErbB2 mRNA相对表达量,免疫荧光技术检测ErbB2蛋白的表达。MTT法检测转染后细胞增殖能力,TranswellTM实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果实时定量PCR检测结果表明,通过脂质体法成功构建过表达HER2的B16细胞株,其HER2的表达显著高于空载体对照细胞。TranswellTM等实验显示HER2过表达增强黑素瘤细胞增殖、侵袭和迁移的能力。结论过表达HER2促进黑素瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。

表皮生长因子受体和C-erbB2及Ki-67在鼻部鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)、C-erbB2及Ki-67在鼻部鳞状细胞癌(SCC)中的蛋白表达及其在该病发生、发展中的意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测31例鼻腔鼻窦SCC、12例鼻息肉(NP)和17例鼻内翻性乳头状瘤(IP)组织中EGFR、C-erbB2和Ki-67蛋白的表达。结果:EGFR与Ki-67在鼻腔鼻窦SCC中的阳性表达率明显高于IP(P<0.05,P<0.01)与NP组织(P<0.05,P<0.01),C-erbB2在SCC中的表达明显高于NP组织(P<0.05),3种蛋白均与SCC组织分级无关。结论:EGFR的过度表达可能是鼻部SCC发病的早期表现,C-erbB2的过度表达可能与鼻部SCC的发展及病理分级有关,Ki-67的免疫组织化学表达特征可作为反映鼻腔鼻窦肿瘤生物学行为的客观指标,但3种生物标志物均不能作为评价SCC病理分级的检测指标。

EGFR和ErbB2表达对肺腺癌纵隔淋巴结转移的预测作用

目的:探讨表皮因子生长受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、表皮生长因子受体2 (ErbB2)表达水平对肺腺癌纵隔淋巴结转移的预测作用。方法:对30例术后病理确诊为腺癌、接受纵隔淋巴结清扫的EGFR突变患者原发灶标本进行免疫组化、PCR分析。了解EGFR及ErbB2在EGFR突变型肺腺癌患者原发灶中蛋白及mRNA水平表达情况,探索两者与纵隔淋巴结转移之间的关系。结果:EGFR蛋白水平在具有纵隔淋巴结转移组中的表达高于其在无纵隔淋巴结转移组中的表达(P=0.048),EGFR强阳性表达率在纵隔淋巴结转移组中高于无纵隔淋巴结转移组(P=0.041),ErbB2蛋白水平在具有纵隔淋巴结转移组中的表达高于其在无纵隔淋巴结转移组中的表达(P=0.002),ErbB2阳性表达率在纵隔淋巴结转移组中显著高于无纵隔淋巴结转移组(P<0.001)。EGFR与ErbB2蛋白表达及mRNA转录均具有相关性(r值分别为0.975,0.521)。结论:EGFR强阳性表达、ErbB2阳性表达可能可以作为EGFR突变型肺腺癌患者纵隔淋巴结转移的预测因子。

人表皮生长因子受体阳性乳腺癌的分子靶向治疗

人表皮生长因子受体2（HER2）在20％～30％的乳腺癌患者中过表达。针对HER2的分子靶向治疗可从分子水平抑制乳腺癌细胞生长。目前乳腺癌的分子靶向治疗药物主要有作用于HER2的单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂两类。曲妥珠单抗已临床用于治疗HER2阳性的转移性乳腺癌，对HER2阳性的早期乳腺癌也有一定疗效。拉帕替尼对难治性乳腺癌和乳腺癌脑转移的治疗有很大潜力。该类药物在乳腺癌治疗领域中存在着巨大潜力。

拉帕替尼耐药乳腺癌细胞株的建立及耐药机制的研究

目的 :建立对拉帕替尼(lapatinib)耐药的乳腺癌SKBR3细胞株并筛选与拉帕替尼耐药相关的基因。方法:采用间隙大剂量冲击和逐步增加剂量相结合的方法诱导建立拉帕替尼耐药的乳腺癌细胞模型;应用CCK-8(cell counting kit-8)和FCM法检测亲本、耐药细胞增殖及凋亡的情况,蛋白质印迹法检测人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)通路中相关蛋白的表达情况,应用人类全基因组表达谱芯片检测亲本和耐药细胞中基因表达的差异。结果 :CCK-8和FCM法检测结果显示,耐药SKBR3细胞对拉帕替尼的敏感性明显降低,拉帕替尼对亲本和耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)分别为(0.35±0.07)μmol/L和(3.89±0.09)μmol/L,经计算耐药倍数约为11.11。蛋白质印迹法检测结果显示,耐药细胞中磷酸化HER2、HER3、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinase1/2,ERK1/2)的表达水均明显低于亲本细胞。全基因组芯片检测结果显示,差异表达基因(上调或下调)共1 598个,其中上调的基因为989个,下调的基因为609个。对差异表达基因进行功能分类,涉及氨基酸代谢、糖代谢、脂类代谢、细胞凋亡和细胞间黏附等相关细胞转导通路共391条。结论:成功建立了拉帕替尼获得性耐药的乳腺癌细胞株,细胞代谢等通路中基因的表达异常可能与乳腺癌细胞对拉帕替尼的耐药有关。