生殖道感染白色假丝酵母菌药敏性研究及耐药基因ERG11突变情况分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性以及耐氟康唑白色假丝酵母菌ERG11基因突变的情况。方法收集2016年1月—2017年1月临床生殖道假丝酵母菌感染患者生殖道分泌物标本,培养并进行菌种鉴定,微量稀释法进行体外药敏性实验对氟康唑靶酶基因ERG11进行PCR扩增、测序,与已知序列进行对比分析。结果 815例样本中发现假丝酵母菌感染213例,感染率26.1%,其中白色假丝酵母菌感染139例占65.3%。通过药敏性实验从中分离耐药菌10株,通过ERG11基因分析共16个同义突变与9个错义突变。结论白假丝酵母菌是女性生殖道假丝酵母菌感染的主要致病菌,对ERG11基因测序发现了4株单位点及6株多位点的有义突变。

Relationship between antifungal resistance of fluconazole resistant Candida albicans and mutations in ERG11 gene

Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase （Ergllp） encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans （C. albicans） isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions （F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A） have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.

白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变分析

目的分析白色假丝酵母菌临床分离株对氟康唑的耐药性,阐明耐氟康唑白色假丝酵母菌Erg11基因突变。方法回顾性分析2011年6月-2012年12月医院患者送检各类标本分离的287株假丝酵母菌属,采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)M27-A3推荐的微量稀释法进行体外药敏试验,从177株白色假丝酵母菌中筛选出7株对氟康唑耐药株,对氟康唑靶酶基因Erg11进行PCR扩增、测序,与Genbank上标准序列(X13296)比对分析。结果在7株白色假丝酵母菌氟康唑耐药株和1株敏感株中共发现25个点突变,其中15个同义突变,10个错义突变,10个错义突变分别为V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G、D116E、K119N、K128T、D153E、E266D,其中V51G、Y53H、C75W、Y79D、V94G是新发现的。结论成功分析了白色假丝酵母菌对氟康唑耐药性及Erg11基因突变。

白色假丝酵母菌ERG11基因突变与高表达在唑类药物交叉耐药中的作用

目的初步探讨白色假丝酵母菌ERG11基因突变、高表达对唑类药物交叉耐药的作用,为临床合理用药提供理论依据。方法自2014年9月-2015年10月收集43株白色假丝酵母菌临床菌株进行体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)扩增ERG11基因并测序、分析其突变情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ERG11基因mRNA的表达水平。结果 43株实验菌株中有药物敏感菌株15株、单药耐药菌株13株、交叉耐药菌株15株,其中9株交叉耐药菌株出现5个错义突变,分别为T123I、Y132H、E174A、G450E、G464S,交叉耐药菌株ERG11基因突变概率显著高于单药耐药菌株及药物敏感菌株(P<0.05);交叉耐药菌株ERG11基因mRNA的表达量(4.00±2.06)显著高于药物敏感菌株(0.93±0.21)(P<0.05),但与单药耐药菌株(3.92±1.01)相比无统计学差异。结论 ERG11基因突变及高表达均为白色假丝酵母菌耐药的机制,其交叉耐药的产生与基因突变相关,与高表达关系尚待进一步研究。

艾滋病患者白念珠菌ERG11基因突变的研究

目的 探讨艾滋病患者的白念珠菌唑类耐药株中唑类抗真菌药物（氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑）的作用靶位基因ERG 11基因突变与耐药的关系.方法 用PCR对临床分离的93株白念珠菌的Erg11基因进行扩增、测序,DNAman软件将测序结果与基因库中的X13296进行比对,将突变碱基翻译为氨基酸,确定是否发生错义突变.结果 共检出40个碱基突变位点,包括27个同义突变位点和13个错义突变位点.耐一种药物的突变菌株中每株菌只发生一处错义突变或无错义突变,而耐二种或三种药物的菌株中每株菌还可以同时出现两处或三处错义突变.结论 ERG 11基因错义突变与白念珠菌耐药有关.

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因差异性分析

目的探讨白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间的差异。方法将16株同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌（CA-1-CA-9、CA-11-CA-17）进行菌丝相与酵母相培养后，分别抽提基因组DNA。设计引物扩增ERG11基因，扩增产物分别用AccⅠ、MunⅠ、AnⅡ消化，电泳后比较两相细胞RFLP图谱，同时用下游引物P2对ERG11基因扩增产物进行反向测序。结果AccⅠ、MunⅠ、AftⅡRFLP图谱及基因测序结果均显示菌株CA-7、CA-8、CA-14、CA-16、CA-17的菌丝相与酵母相间存在差异。两相细胞ERG11基因在1547、1587、1617三位点存在差异，位点编号按照基因库中ERG11基因序列编号（登录号X13296）。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间存在差异，在进行白念珠菌体外研究时，选用其菌丝相更能反映体内真实情况。

阴道白假丝酵母菌的耐药性和ERG11基因突变关系研究

目的探讨ERG11基因突变与白假丝酵母菌对吡咯类药物敏感性下降的关系。方法收集VVC患者的白假丝酵母菌60株,用科玛嘉念珠菌显色培养基作菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,选取所有中度敏感株和耐药株用聚合酶链反应扩增(PCR)ERG11基因,将PCR产物进行测序分析和比对分析。结果 60株白假丝酵母菌对咪康唑、酮康唑和氟康唑敏感率分别为36.7%、56.1%和80%;将38株中度敏感株和耐药株进行ERG11基因分析后共发现29个有义突变和25个同义突变,其中,有义突变中发现多个新突变位点。结论有些新发现的突变位点可能与耐药相关;多位点有义突变可能降低菌株对药物的敏感性。