Effects of erigeron breviscapus (Vant.) Hand-Mazz pretreatment on pathology and oxyradical level following spinal cord ischemia-reperfusion injury in rabbits

Objective To investigate the effects of erigeron breviscapus (Vant.) Hand-Mazz (erigeron breviscapus) pretreatment on pathology and oxyradical level in the spinal cord after ischemia-reperfusion (I/R) injury in rabbits. Methods A total of 40 New Zealand white rabbits were randomly divided into three groups: sham-operation group with 10 rabbits treated with only abdominal aorta exposure without occlusion,control group with 15 rabbits that underwent ischemia for 50 minutes and treated with matched saline,and experimental group with 15 rabbits that underwent ischemia for 50 minutes and treated with erigeron breviscapus (9mg/kg) injection before ischemia. Malondialdehyde (MDA) level and superoxide dismutase (SOD) activity in the spinal cord were examined at 6 and 24 hours after I/R,respectively. The morphological changes and the number of the spinal cord anterior horn motor neurons were observed and counted under the light microscope and electron microscope,respectively. Results The level of MDA was markedly decreased and SOD activity was increased in the experimental group compared with those in the control group (P<0.01). Compared with that in the control group,the number of motor neurons in the experimental group significantly increased at 24h after I/R (P<0.01) and the morphous of the motor neurons improved. Conclusion Erigeron breviscapus can reduce oxyradical production and the apoptosis of nerve cells,and protect nerve tissue structure and function after spinal cord I/R.

酶法制备野黄芩素的工艺研究

目的应用黄芩茎叶葡萄糖醛酸水解酶(Scutellaria baicalensis stems and leaves glucuronic hydrolase,sbsl GUS)酶解灯盏花中野黄芩苷制备野黄芩素,经分离纯化获得高纯度的野黄芩素提取物。方法采用正交试验优选灯盏花提取工艺参数;以野黄芩苷酶解转化率为指标,对酶用量、酶解pH值、温度、时间、抗氧化剂等进行考察,优选野黄芩素制备工艺参数;采用乙醇提取、活性炭脱色和分步结晶精制纯化粗提物。结果灯盏花提取工艺为灯盏花切段,加10倍水煎煮提取2次,每次1 h。野黄芩素制备工艺为sbsl GUS提取液和灯盏花水煎液加入量(以生药计)比为1∶10,加0.5%偏重亚硫酸钠,酶解pH值约6.0,温度约45℃,时间20 h,得到含量大于60%的野黄芩素粗提物。经分步结晶对粗提物进行纯化,用80%乙醇回流提取,活性炭脱色,浓缩、析晶,得到含量大于85%的野黄芩素提取物。结论该工艺应用sbsl GUS酶解技术制备野黄芩素,生产简便可行,为野黄芩素的生产制备提供了新的途径。

含灯盏花中成药DNA提取及其分子鉴定

目的:优选适用于含灯盏花中成药的DNA提取方法和聚合酶链式反应(PCR)扩增引物,并通过测序和系统发育分析实现对其原料灯盏花的分子鉴定。方法:采用4种十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)改良方法对3种含灯盏花的中成药进行DNA提取,测定DNA的纯度和浓度。采用内转录间隔区(ITS)、matK、psbA-trnH、rbcL位点通用引物对提取的中成药DNA进行PCR扩增,并对PCR扩增最佳位点进行测序,通过构建系统发育树进行分子鉴定。结果:4种CTAB改良方法均能获得含灯盏花中成药DNA,其中CTAB改良方法一提取的DNA质量浓度显著高于其他改良方法;PCR扩增中以matK位点2对引物(matKXF/matK5R或matK3F/matK1R)最佳,可通过1次PCR成功获得具有单一条带且浓度较高的PCR产物,序列与灯盏花对照药材同源性为100%,系统发育树显示可与同属其他植物区分。结论:通过CTAB改良方法一可以有效提取含灯盏花中成药样品的DNA,采用matK位点引物matKXF/matK5R或matK3F/matK1R进行1次PCR扩增并对产物进行测序,通过序列比对可完成其原料灯盏花的鉴定。

云南省灯盏花产业发展现状及对策

灯盏花是云南重要的道地中药材,是云南省具有全产业链的“云药”大品种,被列为云南省“十大云药”和“五大天然系列”药物之一加以重点开发。该文主要从灯盏花良种繁育、种植、制剂开发及应用方面总结云南灯盏花产业发展现状,并提出影响该产业进一步发展存在的问题和对策,以期为灯盏花产业的可持续发展提供参考。

RP-HPLC测定灯盏细辛中野黄芩苷的含量

目的:测定灯盏细辛中野黄芩苷的含量。方法:采用 RP-HPLC 法定量,Hypersil ODS 2色谱柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-四氢呋喃-磷酸(15∶85∶1.5∶0.1),流速0.8mL·min^(-1),检测波长:335nm,柱温30℃,进样量20μL。结果:野黄芩苷在2.16-34.5μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,方法的回收率为96.9%-97.5%,RSD 为1.5%-2.4%。结论:本方法简便、准确,重复性好,可用于灯盏细辛药材中野黄芩苷的含量测定。

短葶飞蓬总黄酮含量的生态生物学分析

目的 为研究短葶飞蓬总黄酮含量在个体器官间、个体间、不同地区和不同生境种群间的变化规律。方法测定了云南邱北、昆明等 8个地区 ,大理苍山不同海拔条件下生长和栽培的短葶飞蓬植株体内总黄酮含量。结果 不同地区生长的短葶飞蓬总黄酮含量不同 ;同一地区 ,总黄酮含量有随海拔升高而上升的趋势。植株地上部分茎、叶和花的总黄酮含量高于地下部分根的 ,生长在同一生境的短葶飞蓬不同个体总黄酮含量也有差异。结论 短葶飞蓬体内总黄酮含量的高低是基因和环境条件共同作用的结果。

灯盏细辛治疗青光眼多中心临床研究(英文)

目的:观察美尔瑞片(中草药灯盏细辛)对眼压控制后的青光眼是否具有视神经保护作用。方法:对99例(113眼)眼压已控制的原发性开角型青光眼及闭角型青光眼进行多中心、前瞻性、随机、双盲对照临床研究,观察口服美尔瑞片6mo后对视野的疗效,本研究采用VFDS视野缺损计分法,从0(无缺损)至20(所有检测点均不可测出)。结果:美尔瑞治疗组55例(66眼),安慰剂对照组44例(47眼),治疗前及治疗后2,4,6mo2组的眼压均<15mmHg,2组间同一时期眼压无显著性差异(P >0.05)。服美尔瑞2,4,6mo后VFDS净减值分别为0.44±1.60,1.27±2.16及1.42±2.37,呈现随治疗时间延长,视野缺损逐渐好转趋势。对照组2,4,6mo后VFDS净减计分值分别为-0.02±1.5,0.68±1.73和0.40±1.57。VFDS净减值两组间同一时期比较有显著性差异(P <0.05),治疗6mo后有高度显著性差异(P <0.01)。结论:灯盏细辛可用于治疗青光眼性视神经病变,有助于扩大/保持视野。

灯盏花的化学成分研究

自灯盏花 [Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand . Mazz .]全草乙醇提取物中分离得到 7个化合物 ,经理化性质和光谱分析分别鉴定为 :芹菜素 (1) ;山奈酚 (2 ) ;对羟基苯甲酸 (3) ;3 ,4 二羟基苯甲酸 (4 ) ;槲皮素 (5 ) ;木犀草素 (6 ) ;4′ 羟基黄芩素 (7)。其中山奈酚和槲皮素是首次从该植物中分离得到。

灯盏花的研究进展

对近年来有关灯盏花的化学成分、定量方法。

光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量影响的研究

目的光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量的影响。方法用遮阳网形成的不同光强以及不同颜色塑料膜下形成的不同光质的光照条件生境下,种植灯盏花试管苗至开花,取样测定生物量和黄酮的量。结果全光照和遮光20%生境中的植物生物量和黄酮的量明显高于遮光50%生境的植株;与无色塑料膜相比,黄、红、紫和蓝色塑料膜下平均植株的生物量均下降;无色和有色塑料膜下,蓝色膜下植株的黄酮量最高,而无色塑料膜下植株的黄酮产量最高。结论光强和光质影响灯盏花生长与总黄酮量,灯盏花在全阳光照射下植株有最高的生物量积累和黄酮产量。

灯盏花黄酮苷化学成分的研究

从菊科植物灯盏花 Erigeron brevis capus中分得 4个黄酮苷类化合物 ,通过理化常数、光谱数据分别鉴定为灯盏乙素 (scutellarin, )、5 ,6 ,4′-三羟基黄酮 - 7- O-β- D-半乳糖醛酸苷 (5 ,6 ,4′- trihydroxy flavone- 7- O-β- D-galactonic acid, )、灯盏甲素 (4′- hydroxy baicalein- 7- O- β- D- pyrangluconate methyl ester, )和黄芩素 - 7- O- β- D-吡喃葡萄糖苷 (baicalein- 7- O-β- D - pyranglucose, )。其中 为新化合物 ,

短葶飞蓬总黄酮含量变化研究

目的 研究短葶飞蓬总黄酮含量与生长发育和月份变化的关系 ,环境与遗传因素对总黄酮含量的决定作用。方法 测定同一月份不同生长发育期、同一生长发育期不同月份短葶飞蓬的总黄酮含量的器官分布 ,阳生和阴生生境下短葶飞蓬的总黄酮含量 ,不同花色短葶飞蓬的总黄酮含量。结果 短葶飞蓬的总黄酮主要分布于地上部分 ,而地上部分的总黄酮含量以盛花期最高 ,谢花期最低。4～ 6月盛花期短葶飞蓬各器官的总黄酮含量月份变化不显著。光照强度对短葶飞蓬总黄酮含量影响不大。短葶飞蓬的花色不能作为总黄酮含量的选择标记 ,遗传因素对个体间总黄酮含量差异起重要作用。结论 通过遗传育种提高短葶飞蓬总黄酮含量的前景是广阔的。

灯盏花快速繁殖体系的建立

目的为加速灯盏花的人工种植与品种改良,利用组织培养技术建立灯盏花快速繁殖体系。方法利用种子直接萌发的无菌苗在培养基培养加速种苗繁殖,通过在消毒前对种子进行预处理,采用合适时间消毒种子来减少消毒剂对种子伤害从而提高发芽率;采用不同激素配比从叶片与叶柄诱导愈伤组织,并进一步分化获得再生植株。结果种子去除冠毛后0.1%HgCl2消毒6min可获得最佳发芽率,MS0上培养一个月后即可获得生长健壮的幼苗用于移栽;利用无菌苗的叶柄在MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L培养基上获得了大量分化能力强的愈伤组织,愈伤分割后在该培养基上可继续分化出苗,分化苗转接到MS0上可形成正常植株。结论利用种子灭菌处理获得无菌苗用于组织培养可实现灯盏花快速繁殖和缩短人工育苗时间。

毛细管电泳法测定灯盏花及提取物中灯盏花乙素含量

目的 建立灯盏花药材和灯盏花提取物 (灯盏花素 )中灯盏花乙素的含量测定方法。方法 采用高效毛细管电泳法 ,缓冲液为 40 mmol/L 硼砂 (p H8.5 0 ,磷酸调节 ) ,未涂层石英毛细管 (5 7cm× 5 0 μm) ,分离电压 2 0 k V,检测波长 2 80 nm。结果 灯盏花乙素线性范围 0 .1～ 4.0 mg/m L (r=0 .9985 ) ,回收率大于 98.0 %。结论 方法简便、快速 ,准确 ,可用于灯盏花药材和灯盏花素的质量控制。

灯盏细辛的组织培养与快速繁殖

本研究以野生高含量灯盏花的叶片为外植体,在7个不同浓度NAA和BA组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导、不定芽分化和增殖及生根的培养,确定了灯盏花快繁体系的最适培养条件(1)初代培养基(MS+6-BA)0.5mgL-1+NAA0.1mgL-1;(2)丛生芽增殖培养基(MS+6-BA)2mgL-1+NAA0....7mgL-1;(3)生根培养基(2/3MS+NAA)0.5mgL-1+IBA0.8。..

灯盏花中两个新化合物的分离和鉴定

目的 探索菊科植物灯盏花 Erigeron breviscapus的化学成分。方法 采用各种色谱分离技术 ,理化常数和光谱分析鉴定了化合物的结构。结果 从灯盏花的乙醇提取物中分得了 2个化合物 ,经光谱学分析鉴定它们的结构分别为 :1-羟基 - 2 ,3 ,5 -三甲氧基酮 ( 1- hydroxy- 2 ,3 ,5 - trim ethoxy xanthone, ) ,1- ( 2′-γ-吡喃酮 ) - 6-咖啡酰基 -α- D-吡喃葡萄糖苷 ( 1- 2′- γ- pyranone) - 6- caffeoyl- α- D- pyranoglucose, )。结论 化合物 , 为新化合物。化合物 对 TNF-α诱导的内皮细胞粘附有一定的抑制作用。提示它对缺血再灌注损伤有保护作用。

灯盏花chi的克隆及其生物信息学分析

查尔酮异构酶(CHI)是调控黄酮生物合成的关键酶,分离和克隆这一酶的功能基因,对利用转基因技术进行灯盏花黄酮生物合成的调控具有重要意义。本研究采用RT-PCR和RACE技术,获得了chi cDNA全序列,GenBank登录号为GU208823.1,序列全长996 bp,开放阅读框为594 bp,编码197个氨基酸,3-Race有一个多聚腺苷酸加尾信号。应用软件预测该基因编码蛋白分子量约为21.6 kD,理论等电点为4.78。该基因编码的蛋白无跨膜结构域,其二级结构的主要构件为α-螺旋和随机卷曲。对其三级结构进行了建模,表明其结构与苜蓿chi的三级结构相似。同时根据灯盏花chi N端序列变化的特征,提出了灯盏乙素的合成可能与chi在细胞亚结构的定位及其与合成代谢相关酶形成复合酶的特异性有关。研究为利用基因工程定向改变灯盏花黄酮代谢产物奠定了基础。

加速溶剂萃取法用于灯盏细辛中灯盏乙素的测定

目的:筛选加速溶剂萃取(ASE)的最佳提取条件,并比较其与常规提取方法的优劣。方法:以灯盏花药材为模型药物,运用正交试验法,色谱柱:Diamonsil ODS 柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈和0.5%磷酸溶液进行 HPLC 梯度洗脱,检测波长335nm,流速:1.0mL·min^(-1),测定样品中灯盏乙素的含量。结果:ASE 提取灯盏乙素的最佳条件为:总静态提取时间:20min;提取温度:120℃;循环次数:3次;冲洗溶剂量:80%。结论:ASE 提取较常用回流提取法方便、快捷、效率高。

灯盏花总黄酮与微量元素含量分析及其药效机理的研究

目的研究中药灯盏花中总黄酮及微量元素的含量,为治疗心脑血管疾病的机理提供科学的依据。方法采用醇提法提取灯盏花中总黄酮,紫外分光光度法测定药物中总黄酮的含量,测定吸收波长为λ=510 nm;采用HNO3-HC lO4湿法消化,原子吸收分光光度法测定钾、钙、钠、镁、铁、铜、锌、锰、镍9种微量元素的含量。结果测定结果显示,灯盏花中含有丰富的微量元素和黄酮类化合物,微量元素含量较高的是铁、铜、锰元素。结论实验结果为研究中药灯盏花中黄酮类化合物与微量元素在治疗心脑血管疾病中的作用机制,为临床合理应用和开发中药灯盏花提供了有用的数据。

加速溶剂萃取-气相色谱/质谱法测定灯盏花及其土壤中阿特拉津和二甲戊乐灵残留

建立了加速溶剂萃取（ASE）-气相色谱/质谱法（GC/MS）同时测定灯盏花及其土壤中阿特拉津和二甲戊乐灵2种除草剂的农药残留。样品采用丙酮-二氯甲烷（1∶1,V/V）加速溶剂萃取,弗罗里硅土柱层析净化,用GC/MS选择离子监测（SIM）法测定。结果表明,2种除草剂在0.05~2.00mg/L范围内线性良好,相关系数分别为0.9987~1.0000（灯盏花）,0.9880~0.9980（土壤）;在0.1、0.5和1.0mg/L添加水平下,2种除草剂在灯盏花及其土壤中的平均回收率分别为67.38%~104.02%和71.69%~105.58%,相对标准偏差（RSD）分别为3.21%~13.48%和2.65%~18.26%,方法的检出限（LOD）在灯盏花中为3.00~4.10ng/g,在土壤中为1.50~2.50ng/g。应用该法成功测定了云南省灯盏花及其土壤样品中2种除草剂残留。