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利用基因组比对方法寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列
被引量:
2
1
作者
虞剑
黄勇
+2 位作者
周长林
童贻刚
方宏清
《生物技术通讯》
CAS
2014年第5期640-643,共4页
目的:寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列。方法:采用基因组比对的方法,通过软件MAUVE分别对大肠杆菌DH1与miniMG1655、miniW3110进行基因组比对,筛选得到大肠杆菌DH1基因组中的候选非必需序列,进而以基因必需性评分的方法确定非必需...
目的:寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列。方法:采用基因组比对的方法,通过软件MAUVE分别对大肠杆菌DH1与miniMG1655、miniW3110进行基因组比对,筛选得到大肠杆菌DH1基因组中的候选非必需序列,进而以基因必需性评分的方法确定非必需序列。结果与结论:通过基因组比对及基因必需性评分的方法,确定了大肠杆菌DH1基因组中64个非必需序列区域,占全基因组的26.3%。非必需序列区域的确定,为后续构建基因组减小的大肠杆菌miniDH1提供了基础。
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关键词
基因组比对
非必需序列
大肠杆菌
dh1
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职称材料
磷酸水解酶对大肠杆菌工程菌合成番茄红素的影响
被引量:
1
2
作者
刘洋洋
王天民
+3 位作者
郭佳慧
张翀
薛正莲
邢新会
《安徽工程大学学报》
CAS
2018年第4期1-5,42,共6页
实验以大肠杆菌DH1为宿主菌,在已有生产番茄红素大肠杆菌工程初始菌株lyc001的基础上,增加合成番茄红素途径中的关键基因crtEIB拷贝数;表征结果表明,相较于初始菌lyc001,番茄红素产量提高了34%,并将此菌命名为lyc011.利用CRISPR干扰(CRI...
实验以大肠杆菌DH1为宿主菌,在已有生产番茄红素大肠杆菌工程初始菌株lyc001的基础上,增加合成番茄红素途径中的关键基因crtEIB拷贝数;表征结果表明,相较于初始菌lyc001,番茄红素产量提高了34%,并将此菌命名为lyc011.利用CRISPR干扰(CRISPR interference,CRISPRi)原理以及Golden-Gate组装方法成功构建了可以靶向得到的57个磷酸水解酶基因的双single guide RNA (sgRNA)的质粒.将dCas9质粒和sgRNA表达质粒导入lyc011菌株中,通过下调这57个磷酸水解酶基因表达量,最终通过发酵表征成功筛选到了15个对番茄红素产量提高具有正向调节结果的磷酸水解酶基因,分别为:yjjG,aphA,nagD,yqaB,yidA,pphA,bacA,glpQ,pgpB,spoT,cpdB,nudJ,dgt,phoQ.
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关键词
大肠杆菌
dh1
番茄红素
磷酸水解酶基因
CRISPRi
GOLDEN
GATE
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职称材料
一种新的基于Red重组及I-SecI体内切割的大肠杆菌基因组无痕删减方法
被引量:
1
3
作者
朱美勤
虞剑
+1 位作者
周长林
方宏清
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期114-126,共13页
目前常用的基因修饰方法是在Red同源重组介导下,电转线性PCR片段替换染色体上指定序列。因PCR过程错误掺入,该方法常常会在同源序列部位产生一些突变。为了避免此类突变,我们建立了一种新的无痕删除方法。首先将含有抗性标记(两侧带有I-...
目前常用的基因修饰方法是在Red同源重组介导下,电转线性PCR片段替换染色体上指定序列。因PCR过程错误掺入,该方法常常会在同源序列部位产生一些突变。为了避免此类突变,我们建立了一种新的无痕删除方法。首先将含有抗性标记(两侧带有I-Sec I识别位点)的线性DNA电转到Red重组感受态细胞内,用抗性基因替换基因组上指定序列;然后,将携带融合同源臂(两侧带有I-Sec I位点)的供体质粒导入上述细胞,诱导表达I-Sec I内切酶切割供体质粒释放同源片段,同时切除染色体上抗性基因产生双链断裂,通过分子间同源重组实现无痕删除。我们应用该方法连续删除了大肠杆菌DH1基因组上11个非必需区,使基因组减小10.59%。PCR测序证明所有删减区域同源臂未发生突变,基因组重测序证明指定区域被删除。删减菌的生长变化不大,但耐酸能力有所改变,并对番茄红素合成有不同影响。
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关键词
大肠杆菌
dh1
RED同源重组
无痕删除
原文传递
题名
利用基因组比对方法寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列
被引量:
2
1
作者
虞剑
黄勇
周长林
童贻刚
方宏清
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
军事医学科学院生物工程研究所
军事医学科学院微生物流行病研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2014年第5期640-643,共4页
基金
国家重点基础研究发展计划(2011CBA00800)
文摘
目的:寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列。方法:采用基因组比对的方法,通过软件MAUVE分别对大肠杆菌DH1与miniMG1655、miniW3110进行基因组比对,筛选得到大肠杆菌DH1基因组中的候选非必需序列,进而以基因必需性评分的方法确定非必需序列。结果与结论:通过基因组比对及基因必需性评分的方法,确定了大肠杆菌DH1基因组中64个非必需序列区域,占全基因组的26.3%。非必需序列区域的确定,为后续构建基因组减小的大肠杆菌miniDH1提供了基础。
关键词
基因组比对
非必需序列
大肠杆菌
dh1
Keywords
genomic comparison
nonessential sequences
escherichia coli dh1
分类号
Q811.4 [生物学—生物工程]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
磷酸水解酶对大肠杆菌工程菌合成番茄红素的影响
被引量:
1
2
作者
刘洋洋
王天民
郭佳慧
张翀
薛正莲
邢新会
机构
安徽工程大学生物与化学工程学院
清华大学化学工程系生物化工研究所
清华大学合成与系统生物学中心
出处
《安徽工程大学学报》
CAS
2018年第4期1-5,42,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(NSFC21627812)
文摘
实验以大肠杆菌DH1为宿主菌,在已有生产番茄红素大肠杆菌工程初始菌株lyc001的基础上,增加合成番茄红素途径中的关键基因crtEIB拷贝数;表征结果表明,相较于初始菌lyc001,番茄红素产量提高了34%,并将此菌命名为lyc011.利用CRISPR干扰(CRISPR interference,CRISPRi)原理以及Golden-Gate组装方法成功构建了可以靶向得到的57个磷酸水解酶基因的双single guide RNA (sgRNA)的质粒.将dCas9质粒和sgRNA表达质粒导入lyc011菌株中,通过下调这57个磷酸水解酶基因表达量,最终通过发酵表征成功筛选到了15个对番茄红素产量提高具有正向调节结果的磷酸水解酶基因,分别为:yjjG,aphA,nagD,yqaB,yidA,pphA,bacA,glpQ,pgpB,spoT,cpdB,nudJ,dgt,phoQ.
关键词
大肠杆菌
dh1
番茄红素
磷酸水解酶基因
CRISPRi
GOLDEN
GATE
Keywords
escherichia coli dh1
lycopene
phosphatases gene
CRISPRi
Golden Gate
分类号
TQ28 [化学工程—有机化工]
下载PDF
职称材料
题名
一种新的基于Red重组及I-SecI体内切割的大肠杆菌基因组无痕删减方法
被引量:
1
3
作者
朱美勤
虞剑
周长林
方宏清
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期114-126,共13页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)(No.2011CBA00800)
国家自然科学基金(No:81373286)资助~~
文摘
目前常用的基因修饰方法是在Red同源重组介导下,电转线性PCR片段替换染色体上指定序列。因PCR过程错误掺入,该方法常常会在同源序列部位产生一些突变。为了避免此类突变,我们建立了一种新的无痕删除方法。首先将含有抗性标记(两侧带有I-Sec I识别位点)的线性DNA电转到Red重组感受态细胞内,用抗性基因替换基因组上指定序列;然后,将携带融合同源臂(两侧带有I-Sec I位点)的供体质粒导入上述细胞,诱导表达I-Sec I内切酶切割供体质粒释放同源片段,同时切除染色体上抗性基因产生双链断裂,通过分子间同源重组实现无痕删除。我们应用该方法连续删除了大肠杆菌DH1基因组上11个非必需区,使基因组减小10.59%。PCR测序证明所有删减区域同源臂未发生突变,基因组重测序证明指定区域被删除。删减菌的生长变化不大,但耐酸能力有所改变,并对番茄红素合成有不同影响。
关键词
大肠杆菌
dh1
RED同源重组
无痕删除
Keywords
escherichia coli dh1
Red homologous recombination
markerless deletion
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用基因组比对方法寻找大肠杆菌DH1基因组中的非必需序列
虞剑
黄勇
周长林
童贻刚
方宏清
《生物技术通讯》
CAS
2014
2
下载PDF
职称材料
2
磷酸水解酶对大肠杆菌工程菌合成番茄红素的影响
刘洋洋
王天民
郭佳慧
张翀
薛正莲
邢新会
《安徽工程大学学报》
CAS
2018
1
下载PDF
职称材料
3
一种新的基于Red重组及I-SecI体内切割的大肠杆菌基因组无痕删减方法
朱美勤
虞剑
周长林
方宏清
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
原文传递
已选择
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