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LAMP法检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H
被引量:
3
1
作者
范阳阳
张全芳
+5 位作者
刘艳艳
谭晴晴
胡悦
朱天翼
王文博
步迅
《食品与药品》
CAS
2017年第6期381-387,共7页
目的建立一种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)...
目的建立一种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)。方法以牛奶为研究对象,分别利用金黄色葡萄球菌nuc,鼠伤寒沙门菌invA和大肠杆菌O517:H7的rfbE保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应温度、时间等条件,建立检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应体系。并验证了本方法的特异性和灵敏度。结果 LAMP法对牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的灵敏度均为1.0×10~2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度提高了10倍。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应条件为60℃、30 min,鼠伤寒沙门菌为60℃、60 min。利用SYBR Green I染料在紫外光下可直接观察检测结果,金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7阳性样品均呈绿色;进一步利用荧光定量PCR仪可检测到对应的扩增曲线。通过牛奶样品模拟掺杂实验,验证了方法的实用性和可靠性。结论本研究建立的检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点,可用于牛奶中相关致病菌的检测,对预防和控制3种致病菌的传染有重要意义。
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关键词
环介导恒温扩增
金黄色葡萄球菌
鼠伤寒沙门菌
大肠杆菌O
517
:
h
7
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职称材料
题名
LAMP法检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H
被引量:
3
1
作者
范阳阳
张全芳
刘艳艳
谭晴晴
胡悦
朱天翼
王文博
步迅
机构
山东农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室
韦兰学院
山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/山东省食品质量与安全检测技术重点实验室
出处
《食品与药品》
CAS
2017年第6期381-387,共7页
基金
基础研究重大项目前期研究专项(2016YFD0501400)
文摘
目的建立一种能快速准确检测牛奶中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和大肠杆菌O517:H7(Escherichia coli O517:H7)的环介导恒温扩增方法(loop mediated isothermal amplification,LAMP)。方法以牛奶为研究对象,分别利用金黄色葡萄球菌nuc,鼠伤寒沙门菌invA和大肠杆菌O517:H7的rfbE保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应温度、时间等条件,建立检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应体系。并验证了本方法的特异性和灵敏度。结果 LAMP法对牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的灵敏度均为1.0×10~2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度提高了10倍。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP反应条件为60℃、30 min,鼠伤寒沙门菌为60℃、60 min。利用SYBR Green I染料在紫外光下可直接观察检测结果,金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7阳性样品均呈绿色;进一步利用荧光定量PCR仪可检测到对应的扩增曲线。通过牛奶样品模拟掺杂实验,验证了方法的实用性和可靠性。结论本研究建立的检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H7的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便等特点,可用于牛奶中相关致病菌的检测,对预防和控制3种致病菌的传染有重要意义。
关键词
环介导恒温扩增
金黄色葡萄球菌
鼠伤寒沙门菌
大肠杆菌O
517
:
h
7
Keywords
loop-mediated isot
h
ermal amplification
Stap
h
ylococcus aureus
Salmonellatyp
h
imurium
escherichiacolio517:h7
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
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被引量
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1
LAMP法检测牛奶中金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和大肠杆菌O517:H
范阳阳
张全芳
刘艳艳
谭晴晴
胡悦
朱天翼
王文博
步迅
《食品与药品》
CAS
2017
3
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职称材料
已选择
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引证文献
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