重组大肠杆菌高细胞密度发酵研究进展

重组大肠杆菌高细胞密度发酵(high cell-density fermentation,HCDF)是获得高外源蛋白产率的一种重要策略,文中就影响重组大肠杆菌高细胞密度发酵主要因素的研究进展进行了综述,包括宿主菌、接种量、培养条件、代谢副产物、培养方式等。

植物表达载体pGMAR—BADH的构建

将甜菜碱醛脱氢酶基因BADH和植物表达载体pGMAR通过内切酶BamHI和KpnI双酶切,T4连接酶进行连接反应。重组质粒在大肠杆菌菌株DH5α内扩增,提取并纯化质粒。经鉴定,基因BADH已被完整、正确的插入到pGMAR载体中,并成功将BADH插入到载体pGMAR的两个MAR序列之间。

牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因在大肠杆菌的融合表达

目的:克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白fimA基因,并使其在大肠杆菌中融合表达。方法:利用PCR方法克隆fimA,并用基因重组融合表达技术获得在大肠杆菌中的表达。结果:克隆基因测序结果与GenBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;经诱导表达后可观察到Mr 38kDa的融合蛋白。结论:成功克隆了fimA基因,并在大肠杆菌中表达了FimA蛋白,为后续研究奠定了基础。

禽致病性大肠杆菌体外感染鸡巨噬细胞模型的建立

为建立禽致病性大肠杆菌体外感染鸡巨噬细胞模型,通过荧光定量PCR检测了不同感染复数、不同感染时间、不同温度下禽致病性大肠杆菌感染HD11细胞后iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10相对表达量的变化;使用Gress法和DCFH-DA法分别检测41℃时不同感染时间和不同感染复数下HD11细胞生成NO和ROS的变化。结果显示:iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α的相对表达量在0.5~4 h呈时间依赖性,并在4 h达到峰值(P<0.01);4 h时,随着感染复数升高,4种促炎基因相对表达量呈降低趋势。当培养温度为41℃时,IL-10表达水平随着感染程度的增加而升高,感染时间为4 h,当MOI=5^(3)时,IL-10表达水平达到最大值;NO及ROS在感染早期显著升高(P<0.05),随着感染程度的增加而有所降低;4种促炎基因相对表达量显著高于37℃(P<0.05),当MOI=5^(1)时,其相对表达量达到最大值(P<0.01)。因此,选择感染复数为MOI=5^(1),感染时间为4 h,感染温度为41℃作为禽致病性大肠杆菌体外感染鸡巨噬细胞模型的感染条件。为进一步深入研究鸡大肠杆菌的致病机制提供试验依据。