大戟苷诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制研究

目的:研究大戟苷对人宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法:取Hela细胞分为空白对照组、顺铂组(阳性对照,10 mg/L)和大戟苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/L),分别加入相应药物进行培养。药物作用24、48、72 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。药物作用48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态变化;采用Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-10蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,顺铂组和大戟苷各剂量组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均显著升高(P<0.05或P<0.01),细胞核浓染,或有变形、缩小、碎裂,或出现凋亡小体。与空白对照组比较,大戟苷低、中、高剂量组细胞中Cyt-C、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.05或P<0.01);大戟苷中、高剂量组细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-10蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:大戟苷能显著抑制Hela细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用可能是通过激活Caspase依赖的线粒体凋亡途径来实现的。

大戟苷抑制大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化

目的:观察泽漆主要活性成分大戟苷(euphornin)对大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC)成骨分化的影响。方法:从大鼠股骨中分离培养rMSC,并诱导其成骨分化。用MTT法检测细胞增殖情况,通过茜素红染色,碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙含量测定分别定性、定量地判断其在成骨分化中的效果。实时定量PCR(Q-PCR)检测主要成骨标志因子骨桥蛋白(OPN)和一型胶原蛋白(COL-Ⅰ)及主要转录因子骨形成蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(Runx2)和Osterix(Osx)mRNA的表达。结果:大戟苷能剂量依赖性地抑制rMSC成骨分化,并一定程度地抑制其细胞增殖。COL-Ⅰ和OPN的表达在第4、8天分别有显著下降。BMP2、Runx2和Osx等关键转录因子的表达也被明显抑制。结论:大戟苷能抑制rMSC成骨分化,其作用主要是通过抑制BMP通路相关因子的表达而实现的。

泽漆全草中二萜类成分研究

目的 研究泽漆Euphorbia helioscopia全草的二萜类化学成分及其抗炎活性。方法 用醋酸乙酯对泽漆的95%乙醇提取物进行萃取得粗提物,然后采用大孔树脂、硅胶、中压制备色谱、SephadexLH-20和高效液相色谱等多种色谱技术对醋酸乙酯部位分离纯化,根据波谱数据及理化性质鉴定化合物结构。结果 从泽漆的醋酸乙酯部位分离得到20个二萜,分别鉴定为euphoscopin A(1)、euphoscopin B(2)、euphoscopin C(3)、euphoscopin E(4)、euphorbiapene D(5)、euphornin A(6)、euphornin B(7)、euphornin(8)、helioscopianoid M(9)、euphoheliosnoid D(10)、2α-hydroxy helioscopinolide B(11)、helioscopinolide A(12)、helioscopinolide B(13)、helioscopinolide C(14)、helioscopinolide D(15)、helioscopinolide H(16)、helioscopinolide L(17)、ent-16β,17-dihydroxyatlsan-3-one(18)、20-O-acetylingenol(19)、altotibetol(20)。并且所有化合物均筛选了NO生成抑制活性。结论 化合物15~17、20为首次从泽漆中分离得到,所有化合物均报道于大戟属的不同植物,说明大戟属植物合成二萜的酶系具有高度同源性;活性结果显示6、8~10和19显示了微弱的抗炎活性。