Effect of Rhei Radix et Rhizoma and Eupolyphaga Steleophaga on liver protection mechanism based on pharmacokinetics and metabonomics

Objective:Based on metabonomics technology of high-performance liquid chromatography-mass spectrometry(HPLC-MS/MS)and hydrogen nuclear magnetic resonance spectroscopy(^(1)H NMR),the pharmacokinetic characteristics and therapeutic mechanism of Rhei Radix et Rhizoma(RhRR,Dahuang in Chinese),Eupolyphaga Steleophaga(EuS,Tubiechong in Chinese)combined with RhRR acting on acute liver injury were explored.Methods:Models of acute liver injury were established,and the pharmacokinetic methods of five components of RhRR-EuS in rats were found by HPLC-MS/MS.The liver tissues of different groups of mice were analyzed by ^(1)H NMR spectroscopy combined with multivariate statistical analysis to investigate the metabolomics of RhRR-EuS and RhRR.Results:Pharmacokinetic results showed there were different levels of bimodal phenomenon in different groups,and the absorption of free anthraquinone in RhRR increased after compatibility with EuS.In addition,the pathological state of acute liver injury in rats can selectively promote the absorption of emodin,chrysophanol,physcion and aloe emodin.Through 15 differential metabolites in the liver tissue of acute liver injury mice,it was revealed that RhRR-EuS and RhRR could protect the liver injury by regulating the metabolism of glutamine and glutamic acid,alanine,aspartic acid and glutamic acid,and phosphoinositide.However,the regulation of RhRR was weaker than that of RhRR-EuS.Conclusion:For the first time,we studied the pharmacokinetics and metabolomics differences of RhRREuS and RhRR in rats and mice with acute liver injury,in order to provide theoretical reference for clinical treatment of liver disease by DHZCP.

中药土鳖虫药理活性成分及其临床应用的研究进展

中药土鳖虫在临床上应用广泛,本文主要从土鳖虫的药理活性成分、临床使用方法及其应用的方向来进行阐述。土鳖虫的主要药理活性成分包括氨基酸、挥发油和生物碱等,具有降脂、抗凝、抑瘤和散瘀止痛等作用,临床上常与其他中药配伍使用,可用于高血脂、肝硬化、肿瘤以及骨科疾病等的治疗。本文旨在通过对相关内容进行归纳总结,为该药材的深入研究提供依据。

土鳖虫药材及其制剂特征离子鉴别研究

建立土鳖虫特征离子质谱测定方法,对土鳖虫及其制剂进行真伪鉴别和质量评价。使用超高效液相色谱-三重四级杆质谱,采用多反应监测模式,选择质荷比(m/z)415.72(双电荷)→406.72、415.72(双电荷)→667.34作为检测离子对,对土鳖虫药材及其制剂进行检测。24批不同产地的土鳖虫药材、21批土鳖虫提取物、6批成方制剂均能检出该离子对色谱峰,6批不同动物药(地龙、龟甲、僵蚕、鸡内金、蝉蜕、水蛭)药材和3批土鳖虫混伪品(金边土鳖、金边龙虱、美洲大蠊)中均未检出相应的色谱峰。本研究建立的方法为有效补充土鳖虫药材及其饮片检验标准上的不足,提高其质量控制水平,及保证土鳖虫相关药品临床用药的安全性提供了参考依据。

ICP-MS法测定土鳖虫中重金属含量

采用ICP-MS法对不同产地土鳖虫中重金属及有害元素进行测定和分析,其中,射频功率:1550w,等离子体氩气流速:15.0 L/min,辅助气流量:1.0 L/min,雾化器氩气流速:0.8 L/min,雾化室温度:2℃,进样速度:0.1 r/s。测定结果为市场销售土鳖虫中铅、镉、砷、汞、铜、铬均有不同程度检出,含量范围分别为0.5~4.8 mg/kg、0.01~0.14 mg/kg、0.4~1.4mg/kg、0~0.08 mg/kg、15.3~42.7 mg/kg和1.7~25.3 mg/kg。ICP-MS法测定土鳖虫中重金属含量,方便快捷,方法准确度、精密度和线性良好,为进一步提高土鳖虫质量控制标准提供参考。

山东省市售土鳖虫质量分析与评价

目的:评价山东省市售土鳖虫质量状况。方法:收集山东省16地市市售土鳖虫样品28批,参照《中国药典》2020年版一部,分别对样品的性状、显微特征、薄层特征进行鉴别,对杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、黄曲霉毒素和浸出物进行检查,对样品进行聚类及相关性分析,对重金属污染情况就行了探索研究。结果:土鳖虫的性状及显微特征均符合药典规定;薄层色谱中,供试品溶液在与对照药材色谱相应的位置上,分别显相同颜色的荧光斑点和斑点;杂质含量为0.08%~2%,水分含量为6.7%~9.4%,总灰分含量为7.7%~15.8%(合格率为96%),酸不溶性灰分含量为1.1%~9.2%(合格率为96%),28批样品中,有两批同厂家样品检出黄曲霉毒素(检出率7%),浸出物含量为25.6%~37.0%,通过聚类分析,可将样品分为三类。结论:山东省市售土鳖虫总体质量较好,现行质量标准基本能满足其质量控制,极少部分样品中发现总灰分、酸不溶性灰分以及黄曲霉毒素含量超标等问题,需要进一步加强炮制工艺优化、贮藏环境监控及质量控制和监管。

土鳖虫水煎剂对人多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响

目的 :观察中药土鳖虫对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响。方法 :以灌服中药土鳖虫水煎液的 SD大鼠血清为含药血清 ,灌服等量生理盐水的 SD大鼠血清为对照血清。将囊肿衬里上皮细胞培养于含有下述物质的 RPMI 16 4 0液中 :(1)上皮生长因子 (EGF) 0、2 .5、5、10、2 0 ng/m l;(2 )含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,以等量对照血清为对照 ;(3) EGF 10 ng/ml分别加含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,并以等量 EGF加对照血清作为对照。培养 4 8h后 ,以 5 -溴 - 2 -脱氧尿核苷嘧啶 (Brdu)掺入法检测细胞增殖。结果 :EGF能显著地刺激囊肿衬里上皮细胞增殖 ,一定范围内呈剂量依赖性 ;与对照血清比较 ,土鳖虫含药血清能明显抑制经或未经 EGF刺激的囊肿衬里上皮细胞增殖 ,并呈剂量依赖性。结论

土鳖虫抗兔高胆固醇血症模型内参基因的评估及应用

以60只雄性哈尔滨大白兔(Leporidae)制备土鳖虫(Eupolyphaga steleophaga)抗兔高胆固醇血症模型,使用GeNorm、BestKeeper、NormFinder、ΔCt和RefFinder算法综合评估9个常用内参基因(Actb、B2m、 Eef1a1、Gapdh、Hprt1、Ppia、 Rpl5、Sdha、Ywhaz)模型肝脏表达稳定性,应用最稳定内参基因标准化肝Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因在不同处理组mRNA表达。结果表明,哈白兔可制备土鳖虫抗兔高胆固醇血症模型,模型中2个最稳定内参基因为Gapdh和B2m;与高胆固醇血症组相比,各治疗组肝Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因mRNA表达显著上调(P<0.05)。评估所获最稳定内参基因,为实时定量PCR技术研究该模型机制奠定基础;土鳖虫可降低高胆固醇血症兔胆固醇水平,上调Lxrα、Abca1和Cyp7a1基因表达。

响应面法优化土鳖虫水溶性蛋白质的提取条件

目的确定土鳖虫水溶性蛋白质提取最佳工艺条件。方法在单因素实验基础上,以土鳖虫蛋白质提取率(Y)为响应值,应用响应面法对土鳖虫蛋白质提取工艺进行优化。结果依据统计模型发现液料比、提取时间、提取液p H 3个要素均对土鳖虫蛋白质提取率影响明显。由响应面三维图及等值图分析,得到土鳖虫蛋白质提取率较高的最佳方案为液料比40:1,提取时间20 min,提取液p H 9。结论验证实验所得蛋白质提取率为11.06%,与模型预测值十分接近,运用响应面法优化土鳖虫蛋白质提取条件切实可行。

地鳖虫人工饲养和食用、药用研究进展

对地鳖虫的人工饲养、营养价值现状、药用价值现状以及当前开发利用研究的热点问题等方面进行了较全面的概括。

蛰虫对肝纤维化大鼠IV.C、LN、HA的影响

目的 :研究蛰虫抗肝纤维化的作用。方法 :以腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型 ,以IV .C、LN、HA及肝脏组织病理变化为指标 ,观察蛰虫对大鼠肝纤维化的影响。结果 :蛰虫有降低IV .C、LN、HA的作用 ,并能改善肝脏组织病理学变化。结论 :蛰虫有减少纤维组织增生 ,阻止纤维化发展 。

仿生酶解法提取土鳖虫的工艺研究

目的:研究土鳖虫仿生酶解的工艺条件。方法:在胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解温度已固定的基础上,以PT/APTT为指标,筛选酶底比和酶解时间主要工艺参数;并以血小板聚集率、血凝-纤溶动态图为指标,对酶解法提取土鳖虫的工艺合理性进行考察。结果:土鳖虫酶解条件为:37℃人工胃液温浴30min,再加入2.0%(酶底比)胃蛋白酶酶解3h,残渣转入45℃人工肠液,加入4%(酶底比)胰蛋白酶酶解2h。结论:该工艺条件简单、稳定。

土鳖虫多肽F2-2的体外药效研究

目的:通过体外试验,考察土鳖虫多肽F2-2的抗凝、抗血小板聚集与舒张血管药效。方法:以凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)、血小板聚集率、纤溶图参数与离体血管环张力等为指标,评价多肽F2-2是否具有活血化瘀的作用。结果:土鳖虫多肽F2-2具有延长家兔血浆APTT/PT/TT、降低FIB、降低血小板聚集率、延长凝血启动时间并降低最大凝固程度以及增加大鼠离体血管环张力的作用。结论:体外实验表明,多肽F2-2是中药土鳖虫的活性组分,有继续研究的价值。

利用HPLC法测定不同产地土鳖虫中尿囊素的含量

[目的]建立土鳖虫中尿囊素含量的测定方法,考察不同产地土鳖虫中尿囊素的含量,为土鳖虫药材质量标准的制订提供依据。[方法]采用HPLC法对土鳖虫的尿囊素进行定量分析,色谱柱为Agilent ODS-C18（4.0 mm×250.0 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%醋酸,梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,检测波长为360 nm。[结果]各产地土鳖虫中尿囊素含量差异较大,其中以＂致信药材＂土的鳖虫尿囊素含量最高。尿囊素在0.2~2.0μg范围内线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为97.42%（RSD=4.5%,n=5）。[结论]所建立的方法准确可靠,重复性好,可用于土鳖虫药材的质量控制。

HPLC法测定土鳖虫中尿嘧啶和尿囊素的含量

目的建立土鳖虫药材中尿嘧啶和尿囊素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为AlltimaNH2（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为乙腈-水（90：10）;流速为1.0 ml/min,检测波长205 nm;柱温35℃。结果尿囊素和尿嘧啶的线性范围分别是：0.404~3.23μg（r=0.999 5,n=5）,0.820~6.56μg（r=0.999 5,n=5）。平均回收率分别为98.8%、99.0%,RSD分别为0.96%、0.79%（n=6）。结论该方法简便、准确,可作为土鳖虫药材的质量控制方法。

反相高效液相色谱法测定冬虫夏草等6味动物药中尿嘧啶含量

目的：采用反相高效液相色谱法（reverse phase—high performance liquid chromatography，RPHPLC）测定冬虫夏草、蛤蚧、土鳖虫、蜈蚣、中华蟾蜍、蜚蠊药材中尿嘧啶的含量。方法：色谱柱为Shim—pack CLC—ODS C18柱；流动相：0．05mol／L磷酸氢二铵溶液（pH8．4）；流速：0．6ml／min；检测波长：254nm。结果：尿嘧啶对照品浓度为2．49～49．80μg／ml时与峰面积呈良好的线性关系；回归方程：A=145874 c-45893，r=0．9999（n=7）。精密度试验RSD=0．08％，样品加样回收率为99．79％，RSD=1．93％（n=5）。结论：本法操作简单、准确、重现性好，为冬虫夏草、蛤蚧、土鳖虫、蜈蚣、中华蟾蜍、蜚蠊的鉴定和质量控制提供了依据。

蛰虫抗大鼠免疫性肝纤维化研究

目的 :研究蛰虫抗肝纤维化的作用。方法 :以腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型 ,以ALT、GGT、TP、Alb、A /G比值、IV .C、LN、HA及肝脏组织病理变化为指标 ,观察蛰虫对大鼠肝纤维化的影响。结果 :蛰虫能提高肝纤维化大鼠TP、ALb含量及A/G比值 ,有降低ALT、GGT、IV .C、LN、HA的作用 ,并能改善肝脏组织病理学变化。结论 :蛰虫有保护肝细胞、减轻肝细胞变性坏死 ,恢复肝细胞结构和功能 ;减少纤维组织增生 ,阻止纤维化发展 。

土鳖虫质量优化前后主要成分的分析

目的对质量优化前后的土鳖虫药材进行质量比较研究,分析质量优化前后土鳖虫的成分差异。方法按2005版《中国药典》一部附录ⅨH水分测定法第一法、附录ⅨK灰分测定法、附录ⅩA浸出物测定法对土鳖虫药材的水分、总灰分、酸不溶灰分、水溶性浸出物等质量方面进行了研究,采用凯氏定氮法进行粗蛋白的测定,采用电感耦合等离子发射光谱进行微量金属的测定。结果质量优化前后的土鳖虫药材的总灰分、酸不溶性灰分、水分含量没有很大差异,符合《中国药典》中质量检查项规定。质量优化前后土鳖虫药材中粗蛋白含量和微量元素含量有明显差异。结论质量优化后的土鳖虫明显优于质量优化前,探索的优化养殖方法,为建立土鳖虫药材的生产质量管理规范提供了可供参考的数据资料。

不同饲料对土鳖虫若虫增重影响的研究

目的饲喂不同的饲料,对土鳖虫若虫增重的影响。方法选择45～60日龄的土鳖虫幼虫300g,随机分为3组,每组100g。在土鳖虫生活土配方等条件相同的情况下,实验1组饲喂麦麸,实验2组饲喂发酵料,实验3组饲喂麦麸+发酵料,实验期为2.5个月。结果实验证明,实验3组的饲料配比最利于土鳖虫的生长发育,实验1组次之,实验2组较差。结论使用实验3组的饲料配方,土鳖虫若虫增重效果明显。

不同产地土鳖虫重金属含量的分析

目的:比较不同产地土鳖虫重金属含量的差异。方法:采用紫外分光光度法,在300nm波长下,测定8个不同产地土鳖虫重金属含量。结果:不同产地土鳖虫中重金属含量存在一定差异,其中山东淄博的土鳖虫重金属含量最高,为55.51μg/g;河北石家庄的最低,为39.19μg/g。结论:本测定结果可为土鳖虫药材的收购养殖及质量评价提供参考。

土鳖虫活性肽组分对急性血瘀模型大鼠血液流变学、血脂四项指标及血液因子含量的影响

用胃蛋白酶和胰蛋白酶复合酶系对土鳖虫药材进行仿生酶解,产物经除盐、超滤、纳滤、DA201-C型大孔吸附树脂、葡聚糖凝胶G-25层析、反相高效液相色谱以及半制备液相色谱分离纯化,获得纤溶活力最强的土鳖虫活性肽组分。并研究其对急性血瘀模型大鼠的血液流变学指标、血脂四项指标和血清内一氧化氮(NO)、超氧化歧化酶(SOD)、组织性纤溶酶原激活物(t-PA)和纤维蛋白(FIB)含量等的影响。结果表明:土鳖虫活性肽组分F2能显著降低血液黏度、红细胞压积、血小板计数(P<0.05);与模型组相比,土鳖虫活性肽组分F2能显著降低大鼠血液内甘油三脂(TG)、胆固醇(T-CHO)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量(P<0.05);大鼠血液中NO、SOD、t-PA含量较模型组明显升高,血清内FIB含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。土鳖虫经仿生酶解、分离纯化后制备的土鳖虫活性肽组分F2具有改善急性血瘀模型大鼠血液流变学指标,降低血脂四项指标和改变血液因子含量的作用。