盐浓度对欧洲鳗肌原纤维蛋白理化性质和凝胶形成性能的影响

为探究盐浓度对欧洲鳗肌原纤维蛋白热诱导凝胶形成性能的影响,测定了蛋白的浊度、表面疏水性和活性巯基的变化,考察了0.1、0.3、0.5 mol/L的NaCl浓度下的肌原纤维蛋白热诱导凝胶的性质。结果表明,欧洲鳗肌原纤维蛋白的浊度、表面疏水性和活性巯基分别在30、35和40℃开始增加。随着NaCl浓度的增加,肌原纤维蛋白的热吸收峰温度降低,而储能模量和损耗模量增加。0.5 mol/L NaCl溶解的欧洲鳗肌原纤维蛋白热诱导凝胶破断强度为98.81 g,高于低浓度NaCl溶解的蛋白热诱导凝胶。电泳结果表明,增加NaCl浓度会促进肌球蛋白重链和肌动蛋白的相互作用。根据傅里叶变换红外光谱和扫描电镜结果,发现0.5 mol/L NaCl溶解的肌原纤维蛋白热诱导凝胶具有最高的酰胺Ⅱ/酰胺Ⅰ强度比和最致密的网络结构。研究结果表明欧洲鳗肌原纤维蛋白在35℃时开始变性,提高NaCl浓度可以增强热诱导蛋白凝胶的强度和网络结构致密度,将为利用盐浓度和温度调控鳗鱼加热调理产品提供理论指导。

欧洲鳗鲡外周血细胞的显微和超微结构

利用光镜和透射电镜技术研究了欧洲鳗鲡 (Anguillaanguilla)外周血细胞的显微和亚显微结构。结果表明 :在外周血细胞中可区分出红细胞、单核细胞、大淋巴细胞、小淋巴细胞、嗜中性粒细胞和血栓细胞 ;嗜中性粒细胞内的特殊颗粒包括A、B、C三型 ;嗜中性粒细胞分为Ⅰ型粒细胞 (内含A、B、C三种特殊颗粒 )、Ⅱ型粒细胞 (内含A型和C型两种特殊颗粒 )和Ⅲ型粒细胞 (内含C型特殊颗粒 )。还见到幼稚的和正在分裂的红细胞和单核细胞 ,提示幼稚的红细胞能直接进入外周血流中。嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞无论在血涂片上或超薄切片上均未见到。描述了上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构。血栓细胞体积最小 ,嗜中性粒细胞体积最大 ;淋巴细胞数目最多 ,嗜中性粒细胞数目最少。

欧洲鳗鲡“狂游病”血液生化指标研究

近年来,欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla L.)的养殖过程中常发生“狂游病”。发病前,出现食欲极为旺盛,异常抢食现象。数日后离群、不摄食、旋转式游动、侧游或在水面上挣扎状急游,数秒后沉入水底。

欧洲鳗鲡血液指标的研究

以 114尾欧洲鳗鲡 (Anguillaanguilla)为材料 ,测定了血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白值、比积、白细胞分类计数值及各型血细胞大小等正常值 ;按统计学原理进行分析 ,并对总体正常值范围进行估计。

欧洲鳗鲡血液某些生物化学指标的测定

以 1 1 4尾欧洲鳗鲡为材料 ,测定了血液中肌酸酐、血糖、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇、总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、乙酰胆碱脂酶、γ 谷氨酰转肽酶、钠、钾、钙、镁、氯化物、二氧化碳、无机磷等血液指标值。按统计学原理进行分析 ,并对总体正常值范围进行估计。获得了欧洲鳗鲡血液生理生化指标参考值。

嗜水气单胞菌主要外膜蛋白对欧洲鳗鲡的免疫保护试验

制备出4株分属3个不同血清型嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白(MOMP)免疫刺激复合物(ISCOMs)亚单位疫苗,腹腔注射免疫欧洲鳗鲡,ELISA法测得免疫后第14d和第30d所采集的血清的平均抗体效价在1∶320—1∶1280之间。免疫印迹结果显示,在印迹膜上对应的位置均可检测到MOMP的主要蛋白条带。第40d的免疫保护试验表明,免疫欧鳗对TPS-30菌株约100倍半数致死剂量的攻击无免疫保护作用,其中的3组被测免疫欧鳗对TPS-30菌株约10倍半数致死剂量的攻击的免疫保护率皆在80%以上。上述试验结果提示,嗜水气单胞菌的主要外膜蛋白是重要的保护性抗原,在制备成ISCOMs亚单位疫苗的情况下,较小的剂量免疫一次即可显示出较高的相对免疫保护率,且没有明显的血清型特异性。

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物对欧洲鳗鲡的免疫保护性分析

创伤弧菌（Vibrio vulnificus）是一种革兰氏染色阴性、多形性、运动性、有荚膜的嗜盐性细菌,属于弧菌属第5群,主要生长于海水中、鱼类及贝母类等体内[1]。根据寄主范围和生化反应类型的不同,将创伤弧菌分为3个生物型：生物Ⅰ型（产吲哚）[2]、生物Ⅱ型（不产吲哚）[3]以及1999年以色列的研究人员报道的创伤弧菌生物III型。

欧洲鳗鲡红头病病原的研究

我国南方各省欧洲鳗鲡养殖过程中，在黑仔及幼鳗期易发生一种以头部充血发红为主要特征的严重疾病，被称为“红头病”。本文描述了欧鳗红头病的症状，从病鳗血液中分离到３株菌，肌注和口服人工感染试验出现与自然发病相似的症状，死亡率分别为８３％和６７％，从病鳗身上重新分离到性状相同的菌株。４株分离菌的特性完全一致。均为革兰氏阴性杆菌，以周鞭毛运动，兼性厌氧，发酵葡萄糖产酸，氧化酶阴性，过氧化氢酶阳性，还原硝酸盐，ＶＰ和柠檬酸盐阴性，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性，发酵麦芽糖和甘露糖等，该菌除葡萄糖产酸不产气外，其余生理生化特性完全与《伯捷细菌鉴定手册》第九版中迟钝爱德华氏菌吻合，因此鉴定为迟钝爱德华氏菌。

反相离子对液相色谱法测定欧洲鳗鲡体中丙硫咪唑及其代谢物的残留量

建立了鳗鲡体中丙硫咪唑及其代谢物残留量测定方法。样品用乙腈提取,经正己烷净化后,液相色谱-荧光法测定,标准加入法定量。流动相为:甲醇、乙腈和乙酸铵,梯度洗脱。检测波长为:激发波长290 nm,发射波长320 nm,丙硫咪唑、2-氨基丙硫咪唑砜、丙硫咪唑亚砜、丙硫咪唑砜检出限依次为:25、5、10、1μg/kg。回收率大于95%,相对标准偏差小于8%。

鳗鲡创伤弧菌的分子鉴定

目的对分离自发病欧洲鳗鲡的创伤弧菌疑似菌株进行准确的鉴定。方法首先尝试利用一对16S rRNA基因特异性通用引物PCR扩增一株鳗源创伤弧菌疑似株的基因组DNA,得到一个约500bp的DNA片段,将该DNA片段亚克隆至pMD18-T载体,鉴定克隆化成功之后,送专业公司进行测序,得到一个502bp的DNA产物,NCBI上同源性比较表明,该片段与GeneBank上注册的创伤弧菌的16S rDNA序列同源性最高(100%),同时排除了哈维氏弧菌的可能。设计一对创伤弧菌溶血素特异性引物,实现了对鳗鲡创伤弧菌的分子鉴定。结果建立一种简洁的鳗鲡创伤弧菌的分子鉴定方法。结论国内首次自发病欧鳗分离到创伤弧菌,并给出分子鉴定证据。

复方甲苯咪唑对拟指环虫的杀灭效果和对欧洲鳗的毒性

26℃ ,2 8℃ ,30℃水温下复方甲苯咪唑对欧洲鳗的毒性试验表明 ,随水温升高、药浴时间延长、药物浓度提高 ,甲苯咪唑对欧洲鳗的毒性加强 ;复方甲苯咪唑、甲苯咪唑、左旋咪唑对拟指环虫的杀灭率表明 ,甲苯咪唑对拟指环虫具强杀灭能力 ,左旋咪唑对拟指环虫无杀灭能力 。

欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立

通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPMI1640细胞培养液中培养66 h后可获得最好的淋巴细胞转化效果。方差分析结果显示,4个因素中仅鳗鲡血清水平对淋巴细胞转化试验OD值具有极显著影响(P<0.01),而温度、时间和ConA对其影响均不显著(P>0.05)。本研究建立的鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验条件为鳗鲡的细胞免疫建立了研究方法。

创伤弧菌FJ03-X2胞外产物对欧洲鳗鲡的致病性和免疫原性分析

以70％饱和硫酸铵盐析法制备鳗源创伤弧菌生物1型高致病菌株FJ03-X2的胞外产物（ECPs），攻毒试验表明，该ECPs对鳗鲡无致病力；SDSPAGE分析表明，该ECPs由约36ku为主的系列蛋白条带组成。制备ECPs的免疫刺激复合物（ISCOMs），以20pg／尾的剂量腹腔注射免疫规格为15-20g／尾的欧洲鳗鲡，ELISA分析表明，21d和28d时的血清抗体效价约为1：1280，免疫印记显示，ECPs中分子量为36ku以上的蛋白成份可被免疫欧洲鳗鲡血清所识别，是构成ECPs的主要免疫原；免疫保护试验表明，免疫欧洲鳗鲡显示出较高的免疫保护力。试验结果也显示出，单纯以ECPs等剂量腹腔注射免疫欧洲鳗鲡，不能激发欧洲鳗鲡产生较高滴度的血清抗体，免疫欧洲鳗鲡也未能产生有效的保护性免疫应答。

欧洲鳗鲡胃肠道激素免疫组织化学的研究

用免疫组织化学技术研究了９种哺乳动物胃肠道激素抗体在正常生长欧缓和僵鳗胃肠道的定位分布。研究结果表明， ５－ＨＴ， ＳＯＭ、ＧＡＳ、α－１－ＡＴ和 Ｐ物质免疫活性内分泌细胞存在于正常鳗和僵鳗胃肠道中，其余４种抗体呈阴性反应。文中讨论了胃肠道激素在僵鳗成因中可能的生理作用。

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛血清的营养液中培养68 h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果。

养殖欧洲鳗鲡肠道菌群组成的研究

用稀释滴种定量方法,分别于甘露醇卵黄多黏菌素、马铃薯葡萄糖、伊红美蓝、链球菌琼脂、CDC厌氧琼脂和营养琼脂,分离并计数不同饵料投喂阶段饱食和空腹状态下养殖欧洲鳗鲡肠道细菌的数量与组成。结果表明:在空腹状态下肠道菌群组成以大肠菌群为主,未开口期和水蚯蚓(Tubificidae)投喂期厌氧菌第二,其次为芽孢杆菌;投喂人工配合饲料后芽孢杆菌第二;投喂人工配合饲料后出现肠球菌。饱食状态下以厌氧菌为主,其次为大肠菌群,水蚯蚓投喂期间肠球菌占第三位,其余时间芽孢杆菌占第三位。饱食和空腹状态下,肠道菌群数量以水蚯蚓(Tubificidae)投喂期最高,随养殖时间的延长,肠道菌群数量下降。

欧洲鳗鲡血浆和肌肉中甲苯咪唑及其代谢物的高效液相色谱测定法的建立

应用高效液相色谱法建立欧洲鳗鲡血浆和肌肉中甲苯咪唑(MBZ)及其代谢物5-羟甲基苯基苯并咪唑(MBZ-OH)和二氨基-5-苯基苯并咪唑(MBZ-NH2)浓度的检测方法.结果表明:选用C18色谱柱,检测波长为248 nm,样品经Na2CO3溶液和乙酸乙酯提取,以乙腈和醋酸—醋酸钠缓冲液(pH 4.5)为流动相,在0.01-1.00μg.mL-1内,MBZ及其代谢物的线性关系良好,标准品添加平均回收率均大于90%,日内、日间变异系数均低于6.70%,最低检测限为3 ng.mL-1.

鳗鲡养殖循环水处理系统细菌的组成及其数量

为研究鳗鲡养殖循环水处理系统中细菌的组成与数量,从循环水处理系统中的养殖池、沉淀池、生物膜池、滤池和紫外消毒池采集水样,并从生物膜池和滤池中采集附着生物样品,分别用平板菌落计数法和16S rRNA基因克隆文库分析法进行细菌计数和附着样品的细菌组成分析.结果表明:1)养殖水经过各处理环节后,水体中细菌数量逐渐减少,如由养殖池中的2.98×106CFU/L降低至牡蛎壳填料滤池中的9.30×105CFU/L,再经过紫外消毒池后,水体中细菌数量又减少了96%,再降低至3.53×104CFU/L.2)生物膜池的尼龙丝挂网载体和滤池中牡蛎壳填料上附着细菌数量较多,其数量分别高达1.39×108CFU/g和1.52×108CFU/g.牡蛎壳上的附着细菌主要分为3大类:分别属于变形菌门(包括α-、β-和γ-变形菌纲)、拟杆菌门和异常球菌-栖热菌门,其中以β-变形菌纲细菌为优势类群,大部分细菌对环境有机物具有良好的分解作用.