农杆菌介导大豆不同外植体遗传转化研究

以MYB转录因子GmPHR1为目的基因,冀豆12、冀豆16和绥农14为转化受体,比较农杆菌介导大豆不同外植体的遗传转化技术,为大豆转基因育种提供技术支撑。结果表明,以茎尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率最高,且对基因型的依赖性最小,但由于对抗生素的敏感性较差,因而存在一定程度的假阳性;其次,以胚尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率较高,对基因型的依赖性较小,同时对抗生素的敏感性较强,因而是一种较为理想的转化系统。而子叶节、下胚轴转化系统则表现出不定芽诱导率、植株再生率和转化效率均较低,且存在较强的基因型依赖性等不足。同时,利用上述4种转化系统,获得了3个供试大豆品种的转基因T1植株。

新红星苹果离体高效再生体系的建立

为了建立新红星苹果离体高效再生体系,以苹果品种新红星为试材,研究了不同基本培养基、激素质量浓度、外植体类型以及暗处理时间对其再生频率的影响。结果表明3种外植体的最适基本培养基均为MS培养基;叶片的再生效果最好,其次为黄化茎段,茎段最差,最高再生频率分别为74.1%,51.9%,42.6%;叶片和茎段的最佳暗处理时间为3周,黄化茎段的最佳暗处理时间为2周。新红星苹果再生的最佳外植体为叶片,最佳培养基为MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L,最佳暗处理时间为3周。

苗龄、基因型和外植体类型对黄瓜离体器官发生的影响

研究了苗龄、基因型和外植体类型对黄瓜离体器官发生的影响。结果表明 ,在水琼脂培养基上萌发的 4个黄瓜材料的种子 ,在萌芽后 1～ 4天时接种的子叶外植体出芽率及每外植体出芽数均较高 ,5天时明显降低 ,以 3～ 4天时最为合适。试验的1 2个不同基因型黄瓜材料愈伤诱导率均较高 ,且均能出芽。出芽率可大致分为高 (≥70 % )、中 (40 %～ 70 % )、低 (≤ 40 % ) 3类 ,以 T5 5 ,M9,P1 7出芽率最高 ,分别为76 % ,71 %和 73% ;以 K5 5 ,S8,S9×Q2 2出芽率最低 ,分别为 2 5 % ,39% ,40 %。各材料中 T5 5 ,P1 7,P1 7×Q2 2每外植体出芽数最多 ,分别为 3.40 ,3.43,3.82个。长春密刺和 K6 6子叶、下胚轴、胚根和真叶等外植体的愈伤诱导率均较高 ,但只有子叶出芽率和每外植体出芽数较高 ,下胚轴明显降低 。

外植体类型和培养基中激素浓度对香茶菜愈伤组织诱导的影响

香茶菜〔Isodon amethystoides （Benth.）H.Hara〕为唇形科（Lamiaceae）香茶菜属〔Isodon （Schrader ex Benth.）Spach〕植湖北和广西等省（自治区）,为安徽宿州著名的传统药食两用植物，以茎叶入药。

不结球白菜离体培养再生体系的优化

为了筛选较易再生的不结球白菜品种,为转基因工作建立良好的再生体系,以暑绿、苏州青、亮白叶和矮抗5号为材料,研究了基因型、外植体类型以及不同的激素配比对再生频率的影响。结果表明:不同品种中,暑绿的再生频率最高。不同外植体类型中,子叶-子叶柄再生频率最高。种子发芽培养基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)使幼苗生长健壮,利于外植体分化,不定芽分化率均在60.00%以上,子叶-子叶柄在培养基MN+0.5 mg.L-1TDZ+0.5 mg.L-1NAA+7.5 mg.L-1AgNO3中再生频率最高,达到80.00%,表明TDZ在诱导器官的发生中有较强的持续效应。

外植体类型和植物生长调节剂浓度对红金银花愈伤组织诱导的影响

以红金银花(Lonicera japonica var.chinensis)顶芽、当年生幼茎和叶片为试验材料,利用仿自然气候的培养条件,采用L9(34)正交试验设计,考察了外植体类型和培养基中添加植物生长调节剂的浓度对愈伤组织诱导的影响。结果表明,外植体类型对红金银花组织培养的污染率及愈伤组织的诱导率均有影响,以顶芽为外植体时污染率低,愈伤组织诱导率高,为最佳外植体。优化后的愈伤组织诱导培养基中KT、6-BA、α-NAA浓度分别为1.5、1.5、0.5 mg/L。

红掌愈伤组织培养及不定芽分化影响因素的研究

[目的]构建红掌愈伤组织培养再生植株的技术体系.[方法]以红掌叶片和叶柄愈伤组织为继代培养的外植体材料,探讨红掌品种、外植体大小、激素条件对愈伤组织不定芽分化的影响.[结果]红掌品种YNG1叶片愈伤组织的不定芽分化率最高,叶柄愈伤组织的不定芽分化率则以品种YNG2最高,而品种YNG3和YNG5仅叶片愈伤组织能分化不定芽,叶柄愈伤组织均无分化;与细胞分裂素6-BA相比,向分化培养基中添加ZT与TDZ可促进叶片愈伤组织的增殖及不定芽分化;选取直径约1.0～1.5 cm的愈伤组织块进行继代培养,不定芽分化较多,同时可缩短不定芽分化时间.[结论]该研究为构建稳定高效的红掌组培快繁技术体系提供了新的试验依据.

水果型番木瓜外植体灭菌方法研究

以水果型番木瓜成龄株顶芽和侧芽为外植体,研究不同灭菌剂组合和灭菌时间、抗生素组合对外植体的灭菌效果。结果表明,3种灭菌剂组合对外植体的灭菌效果优于两种灭菌剂组合;3种灭菌剂组合中以采用0.1%KMnO4浸泡10min→5%NaClO浸泡10min→0.1%HgCl2浸泡8min的灭菌效果最好,外植体成活率最高,为47.27%。经不同抗生素组合灭菌,外植体平均污染率和成活率分别为28.57%～45.16%、54.84%～71.43%,灭菌效果明显优于对照,说明抗生素组合可以有效降低水果型番木瓜外植体的内源菌污染,提高其成活率,其中以MS+6-BA1.5mg/L+庆大霉素80mg/L+头孢噻肟钠500mg/L的效果最好,利于获得番木瓜无性系。此外,以幼苗顶芽作为外植体进行灭菌培养的效果优于侧芽,利于促进外植体的萌动生长和形成丛生芽。

南方型紫花苜蓿Millennium组织培养及其再生

以南方型紫花苜蓿Millennium种子发育5~7 d无菌苗的子叶、下胚轴为外植体,对紫花苜蓿愈伤组织诱导和植株再生进行了研究。结果表明,在愈伤组织诱导中,下胚轴为最佳外植体材料,出愈率随着2,4-D质量浓度的增加呈明显的升高趋势,最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D 2 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L,诱导率达到100%。紫花苜蓿诱导最佳愈伤组织的分化培养基为MS＋KT 1.0 mg/L＋NAA 0.05 mg/L,下胚轴愈伤组织分化率达到58%,子叶愈伤组织分化率达到40%。将苗切下转接到1/2 MS＋20 g/L蔗糖质量浓度时,培养6 d即可诱导生根,诱导生根率达到100%,完成植株再生仅需60~70 d。成功地建立了南方型Millenni-um紫花苜蓿子叶和下胚轴的离体培养再生途径,并获得了再生植株。

产业成长模式:从移植型向内生型过渡

我国与许多后起国家都采用了移植型产业成长模式 ,20世纪90年代后这一模式的弊端日益显现。目前 ,我国已具备内生型产业成长的初始条件 ,但由于知识、主体、人才、资金、制度等因素的制约 ,模式过渡难度较大。因此 ,必须加强基础研究 ,激活创新主体 ,开发人才资源 ,加大科技投入 ,推进制度创新 ,以实现移植型向内生型产业成长模式的顺利过渡。

外植体类型及取材时期对花魔芋组织培养效果的影响

以花魔芋的顶芽、顶芽鳞片、侧芽、皮上芽孢、块茎作为外植体,研究不同类型外植体和不同取材时期对花魔芋组织培养效果的影响,以明确花魔芋组织培养的最佳外植体和取材时期。结果表明,不同外植体类型对魔芋组织培养效果有显著影响,顶芽的诱导率和出芽率显著高于其他外植体,死亡率、褐化率与污染率均显著低于块茎与顶芽磷片,顶芽为花魔芋组织培养的最佳外植体。不同时期取材对花魔芋组织培养效果亦有显著的影响,冬季取材的顶芽与顶芽磷片的污染率和褐化率均显著低于其他时期,膨大率和诱导率均显著高于其他取材时期,冬季为花魔芋组织培养最佳取材时期。

菜用大豆高效离体再生体系的优化

为筛选较易再生的菜用大豆品种,为遗传转化建立良好的再生体系,以‘春丰早’、‘浙农6号’、‘浙农8号’、‘沪宁95-1’、‘辽鲜1号’和‘台湾75’为材料,研究外植体类型、激素配比、接种时间、接种方式以及基因型对再生频率的影响。结果表明:不同外植体类型中,子叶—子叶柄的再生频率最高;B5培养基+1.0mg·L-1 TDZ+0.05 mg·L-1 NAA+5.0 mg·L-1 AgNO3为最佳培养基;种子发芽10 d为最佳接种时间;子叶—子叶柄垂直接种时再生频率较高;不同品种中,‘浙农8号’再生频率最高,达80.89%;最佳生根培养基为1/2B5+0.5 mg·L-1 NAA。

花叶芦竹组织培养快繁技术研究

以花叶芦竹为试材,研究外植体不同类型、处理方式和启动培养基生长激素组合。结果表明:采用花叶芦竹新生侧枝茎段(带芽)作为外植体灭菌效果最好,根部和茎杆侧芽作为外植体染菌率高,不利于无菌体系的建立;接种前对芽点进行剥除苞片处理有利于缩短无菌体系建立的周期;适宜的启动培养基为MS+4.0 mol·L^-1 6-BA+2.0 mol·L^-1 IAA;最佳增殖培养基为MS+4.0 mol·L^-1 6-BA+1.6 mol·L^-1 IAA,增殖系数6.2。

多肉植物“麦秆22号”离体培养体系建立

以多肉植物“麦秆22号”为试验材料,研究外植体类型、激素配比对“麦秆22号”愈伤组织诱导及离体培养的影响,以实现对“麦秆22号”离体培养条件的优化,为建立工厂化育苗技术体系提供参考。结果表明,以“麦秆22号”的叶片切片作为外植体诱导愈伤组织效果最佳,茎切片作为外植体诱导不定芽效果最佳。愈伤组织最佳增殖培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7%琼脂+30%蔗糖;不定芽最佳增殖培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7%琼脂+30%蔗糖;生根最佳培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+7%琼脂+30%蔗糖。

低频再生黄瓜离体培养体系的优化

【目的】优化低频再生黄瓜离体培养体系,为黄瓜遗传转化体系的进一步完善奠定基础。【方法】以低频再生黄瓜种质Q24和L66为材料,分别以黄瓜的子叶、子叶节和下胚轴为外植体,研究外植体类型对黄瓜再生频率的影响;在MS培养基中添加不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和脱落酸(ABA),研究激素配比对黄瓜再生频率的影响;将获得的黄瓜子叶节外植体置于1/2 MS培养基上预培养0,1,2,3和4 d,研究预培养处理对黄瓜再生频率的影响。【结果】不同基因型黄瓜再生频率差异显著,其中Q24整体上具有相对较高的再生频率,其子叶节再生频率为54.8%,下胚轴再生频率为50.0%;L66的再生频率相对较低,其子叶节再生频率为36.9%,下胚轴再生频率为16.7%。激素配比显著影响黄瓜子叶节外植体的再生频率,其中1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对Q24子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到60.7%;2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对L66子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到42.9%。预培养处理可显著提高L66子叶节的再生频率,经过1~3 d预培养,其再生频率逐渐增加并达到最高(32.1%),4 d后再生频率开始降低;Q24子叶节经3 d预培养再生频率达到最高,为27.4%,但与对照相比差异不显著。【结论】Q24子叶节外植体最适激素配比为1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后其再生频率可达60.7%;L66子叶节外植体最适激素配比为2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后再生频率可达42.9%。

改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对成骨细胞增殖效果的比较研究

目的 比较改良贴壁组织块法与改良Ⅰ型胶原酶消法对SD大鼠颞下颌关节髁突软骨下骨成骨细胞的增殖效果.方法 取10只出生1 -3dSD乳鼠颞下颌关节髁突软骨下骨,将骨片平分成2份,分别采用改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消法培养颞下颌关节髁突成骨细胞,并标记为Ⅰ组和Ⅱ组,通过细胞形态学观察、HE染色、ALP染色鉴定成骨细胞.取第4代成骨细胞进行细胞计数、MTT生长曲线及流式细胞仪周期分析,比较2种原代培养方法对成骨细胞增殖能力的异同.结果 （1）Ⅰ组和Ⅱ组培养的细胞经鉴定均为成骨细胞; （2） Ⅱ组成骨细胞总量约为Ⅰ组细胞总量的1.5倍; （3） Ⅱ组成骨细胞MTT生长曲线较Ⅰ组细胞提前2d进入对数生长期及达到生长高峰; （4）2组细胞在达到第4代时,细胞周期含量差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 改良贴壁组织块法和改良Ⅰ型胶原酶消化法均适用于颞下颌关节软骨下骨成骨细胞的培养,但改良Ⅰ型胶原酶消化法可以更快速有效地获得大量成骨细胞.

自修复高分子材料的研究进展

高分子材料在加工和使用过程中会产生各类损伤,从而降低了材料的力学性能,缩短其使用寿命.自我修复性的高分子材料是一种智能材料,这种高分子材料本身具备自我诊断的功能,同时对其中的微小裂缝能够进行自我修复.依据是否添加修复剂对自修复材料进行分类,分为外植型与本征型,并对这两种类型的自修复材料进行具体阐述与分类.

不同外植体类型和植物生长调节剂对手参组培的影响

本研究以甘孜藏族自治州野生手参为试验材料,研究不同外植体类型(茎尖、根尖、侧芽)和植物生长调节剂(2,4-D、6-BA、NAA)对手参愈伤组织诱导的影响,并检测愈伤组织中药用化学成分含量。结果表明,茎尖的愈伤组织诱导率高于根尖和侧芽,在MS+NAA 0.5 mg/L培养基中手参愈伤组织诱导率最高(59.5%),且单独添加生长素时愈伤组织诱导率高于组合添加同一浓度的生长素和细胞分裂素;根尖的褐化率最高(100.0%),茎尖的褐化率最低(38.5%);附加NAA 0.5 mg/L的培养基诱导的愈伤组织天麻素和dactylorhin A含量均高于附加2,4-D 0.5 mg/L的培养基诱导的愈伤组织。本研究结果可为进一步提高手参的品质,增强我国药用植物产业的竞争力,为后续商业化应用打下坚实的基础。

Study on High-frequency Callus Induction From Aseptic Plantlets of Anthuium andraeanum

[Objectives]This study was conducted to improve the efficiency of callus induction and redifferentiation,and construct high-frequency plant regeneration techniques of tissue culture in Anthuium andraeanum.[Methods]The effects of different genotypes,explant types and hormonal conditions on callus induction and re-differentiation of A.andraeanum were studied by using the aseptic A.andraeanum test-tube plantlets as test materials.[Results]Among the four kinds of aseptic A.andraeanum plantlets,the callus induction using stem segments with leaves was the best,followed by stem segments and leaves,and the petioles were the worst;among the six A.andraeanum varieties tested,the callus production rates of four varieties reached 100%;and the callus differentiation rate reached 93.3%-100%through the organogenesis pathway,and the suitable differentiation medium was 1/2MS+ZT 0.5 mg/L+2,4-D 0.1 mg/L.[Conclusions]The research results provide a new experimental basis for optimizing the technical system of A.andraeanum rapid propagation.

人体黏膜活组织模型在HIV-1性传播途径感染中的应用

性传播途径已经成为全球人免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)传播的主要方式。对HIV-1黏膜感染机制的深入理解,将有助于研发新型有效的生物技术阻断其感染和传播。目前,HIV-1黏膜感染机制的研究主要依赖于体外细胞培养和灵长类动物模型。近年来,一种新型黏膜活组织模型(包括人体生殖道或肠道黏膜等组织)的建立,可再现HIV-1突破黏膜屏障进入基底侧的生物学过程,适用于HIV-1黏膜感染机制与黏膜局部感染阻断生物技术的临床前有效性评价研究。以下主要阐述了该模型的组织类型、技术特点以及在HIV-1性途径感染机制与阻断技术研究中的进展,并结合本实验室工作对其新的应用进行了展望。