细胞外信号调节激酶通路对人动脉硬化平滑肌细胞增殖、表型标志蛋白及微小RNA-31表达水平的影响

目的 探讨阻断人动脉硬化平滑肌细胞中细胞外信号调节激酶（ERK）通路,进一步明确ERK、微小RNA（miR）-31与血小板源性生长因子（PDGF）-BB介导的平滑肌增殖之间的调控关系.方法 收集下肢动脉硬化闭塞患者下肢截肢标本,用贴壁法原代培养平滑肌细胞.相同代数的第3～6代血管平滑肌细胞（VSMCs）,加入PDGF-BB或PDGF-BB＋ PD98059分别用细胞计数试剂盒（CCK-8）法、Transwell法、Western blot、实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测VSMCs增殖、迁移能力、表型标志性蛋白表达以及miR-31表达水平.结果 经组织贴壁法成功培养出原代平滑肌细胞.PDGF-BB诱导动脉硬化细胞的增殖率上调102％ （P＜0.05）和迁移率上调246％ （P＜0.05）,ERK阻断剂PD98059能阻滞PDGF-BB诱导的诱导作用,平滑肌细胞增殖抑制53％（P＜0.05）和迁移抑制19％ （P ＜0.05）.与空白组比较PDGF-BB处理后,收缩表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）含量下调38％ （P ＜0.05）,增殖型蛋白骨桥蛋白（OPN）和miR-31含量分别上调116％ （P ＜0.05）和386％ （P ＜0.05）.与PDGF-BB组比较,PD98059＋PDGF-BB处理后,α-SMA含量显著上调41％ （P ＜0.05）,增殖型蛋白OPN和miR-31含量分别下调33％ （P ＜0.05）和46％（P＜0.05）.结论 阻断ERK通路可促进VSMCs由增殖型向收缩型转变,同时下调miR-31的表达水平,ERK-miR-31通路可能是调控人动脉硬化平滑肌细胞功能及表型的重要通路.