膀胱细胞外基质的研制

目的 :探讨膀胱细胞外基质 (ECM)的制备方法。方法 :采用正交设计方法 [L9(34) ]。取 1 9只兔的膀胱共 1 9个 ,其中 9个被分成 2 7片 ,按正交设计随机分为 9组行脱细胞处理 ;所有试验重复 3次。经脱细胞处理后 ,采用HE染色及计算机图像分析对基质进行残余细胞成分计数 ,统计分析获得最佳方法。另 1 0个膀胱采用最佳方法制备成膀胱ECM并用于同种异体膀胱缺损修复实验 ;分别于修复术后 1 0d、4周及 3个月取材分析缺损修复处组织再生情况。结果 :各组脱细胞后残余细胞成分量均不相同 ,但第 7组未发现细胞残余成分 ;采用最佳方案(A3 B2 C3 )制备的膀胱ECM经扫描电镜分析未发现细胞残片。缺损修复实验后 1 0d移行上皮组织爬满基质内表面 ;术后 4周可见基质内细胞成分明显增多 ,但较正常组织稀疏 ,排列不规则 ;3个月后 ,取材的组织学分析表明细胞外基质替代部分组织再生状况良好。结论 :制备膀胱细胞外基质的最佳方案是A3 B2 C3 ,即在膀胱脱细胞处理过程中采用 0 .4 %胰蛋白酶、1 %甲醛 +0 .2 %戊二醛、4 0U·ml-1 DNase。

白细胞介素-6对破骨细胞骨吸收效应及MMP-3表达影响的实验研究

目的 :观察不同浓度IL - 6对破骨细胞骨吸收的剂量效应及对破骨细胞基质金属蛋白酶 - 3表达的影响 ,以期进一步阐明IL - 6介导基质金属蛋白酶在破骨细胞性骨吸收中的病理机制。方法 :采用体外破骨细胞溶骨模型 ,通过原子吸收分光光度仪及免疫组化染色技术检测不同浓度IL - 6对破骨细胞溶骨活性及基质金属蛋白酶 - 3表达的影响。结果 :当IL - 6 >10U/ml时 ,培养上清中Ca2 + 浓度显著增加 ,牙本质片上骨吸收陷窝数目明显增多 ;当IL - 6浓度为 10 0U/ml、5 0 0U/ml时破骨细胞基质金属蛋白酶 - 3表达的阳性信号显著增强。结论 :在IL - 6作用下 ,破骨细胞表达基质金属蛋白酶 - 3。IL - 6对破骨细胞具有激活作用 ,低浓度主要诱导破骨细胞形成 ,较高浓度刺激破骨细胞的溶骨活性。

尿道细胞外基质的研制

目的 探讨尿道细胞外基质 (ECM )的制备方法。 方法 采用 4因素 3水平 ,9次实验的正交设计 [L9(34) ]。切取 37只兔的尿道 ,2 7条按正交设计随机分为 9组行尿道脱细胞处理 ,试验重复 3次。采用HE染色及计算机图像分析对尿道基质进行残余细胞成分计数 ,统计分析获得最佳方法 :0 .4 %胰蛋白酶、1%甲醛加 0 .2 %戊二醛、4 0U/mlDNA酶 (A3 B2 C3 方案 )。另 10条兔尿道制备成尿道ECM并用于同种异体尿道缺损修复实验 ;分别于修复术后 10d ,3、6及 2 4周取材观察缺损修复处组织再生情况。 结果 各组脱细胞后残余细胞成分量均不相同 ,第 7、9组未发现细胞残余成分 ;制备的尿道ECM经扫描电镜分析未发现细胞残片。缺损修复实验术后 10d ,基质中见单层上皮细胞 ,且有血管长入ECM中 ,但管径较小 ,基质和受体尿道连接处有炎性细胞浸润 ;3周时尿道ECM管腔已完全被上皮细胞覆盖 ;6周时可见平滑肌细胞再生 ,炎性细胞消失。 2 4周后基本结构近似正常。 结论 制备尿道细胞外基质中 3个关键条件的最佳水平为A3 B2 C3 ,即在尿道脱细胞处理过程中采用 0 .4 %胰蛋白酶、1%甲醛加 0 .2 %戊二醛、4 0U/mlDNA酶。

输尿管细胞外基质的研制

目的 探讨输尿管细胞外基质 (ECM )的制备方法。方法 采用正交设计方法 [L9( 34 ) ]。取 19只兔的输尿管 19条 ,其中 9条被分成 2 7段 ,按正交设计随机分为 9组行脱细胞处理。所有试验重复 3次。经脱细胞处理后 ,采用苏木素 伊红 (HE)染色及计算机图像分析对基质进行残余细胞成分计数 ,统计分析获得最佳方法 (A3B2 C3)。另 10条输尿管采用最佳方法制备成输尿管ECM并用于输尿管缺损修复实验 ,分别于修复术后 1、4及 16周取材分析缺损修复处组织再生情况。结果 各组脱细胞后残余细胞成分量均不相同 ,但第 7、9组均未发现细胞残余成分 ;采用最佳方案制备的输尿管ECM经扫描电镜分析未发现细胞残片。缺损修复实验后 1周移行上皮组织爬满基质内表面 ;术后 4周可见基质内细胞成分明显增多 ,但较正常组织稀疏 ,排列不规则 ;16周 ,取材的组织学分析表明细胞外基质替代部分组织再生状况良好。结论 制备输尿管细胞外基质的最佳方案是A3B2 C3,即在输尿管脱细胞处理过程中采用 0 .4%胰蛋白酶、1.0 %甲醛 + 0 .2 %戊二醛、40U/mlDNase。

脱细胞胆管细胞外基质替代胆总管缺损的研究

目的 探讨脱细胞胆管细胞外基质（ECM）的制备方法及其替代胆总管缺损的可行性。方法 采用4因素3水平9次实验的正交设计[L9（3^4）]，切取活体犬的肝外胆管39段，每段长1cm，其中27段按正交设计随机分为9组行脱细胞处理，试验重复3次。采用苏木素．伊红（HE）染色及计算机图像分析对ECM进行残余细胞成分计数，进行极差分析及方差分析，获得制备ECM的最佳方案。另12段胆管按最佳方案制备成ECM并用于同种异体胆总管缺损修复实验。分别于术后2、4、12及24周取材观察缺损修复处组织再生情况。结果脱细胞后第7、9组未发现残余细胞，ECM富含胶原，第9组胶原呈立体交叉交联。移植术后2周，ECM内膜面见少量单层上皮细胞，有血管长入其中，ECM中有少量成纤维和平滑肌细胞，吻合口处有较多炎性细胞浸润；4周ECM管腔被上皮细胞覆盖，排列整齐，ECM中有较多成纤维和少量平滑肌细胞，吻合口有少量炎性细胞浸润；12周吻合痕迹消失，ECM中有较多成纤维、平滑肌细胞和少量纤维细胞；24周ECM中有以平滑肌细胞和纤维细胞为主，少量成纤维细胞，结构近似正常。结论制备ECM中3个关键条件的最佳水平为A383C3，即在胆管脱细胞处理过程中采用0．4％胰蛋白酶、1．0％叠氮二苯基磷（DPPA）、40U／ml DNA酶。所得ECM应用于犬同种异体胆总管端端吻合修补，效果满意。