DNA测序法检测血友病B患者F9基因突变

目的分析血友病B患者凝血因子Ⅸ(F9)基因突变情况。方法检测3名非亲缘关系疑似血友病B患者的表型,确定其活性缺失因子;采用PCR结合DNA测序的方法对患者F9基因作序列分析,确定其突变位点。结果 3名患者均表现为FⅨ促凝活性(FⅨ∶C)明显偏低,分别为6.1%、14.7%及6.5%,故诊断为血友病B患者,其F9基因突变分别为G20341A(Gly133Arg)、G30116A(Ala233Thr)及G31095A(Cys336Tyr)。结论检测到3名血友病B患者的F9基因上均发生序列改变,证实了血友病B患者F9基因缺陷的分子机制。

免疫鸭体内副黏病毒的分离及其F基因的分子特征

为分析当地鸭副黏病毒流行状况及其融合蛋白(F)基因的序列特征,从江苏省某新城疫疫苗免疫过的鸭群中分离到1株病毒,经血清学试验和中和试验鉴定为鸭副黏病毒,命名为JS0920株。生物学特性分析,9日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5.3;9日龄SPF鸡胚的最小致死量平均死亡时间(MDT)为47.7h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.875,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)测定为2.7。用该病毒的培养物(鸡胚尿囊液)经肌肉注射攻毒,鸭的发病率为70%,死亡率为40%;鸡的发病率和死亡率均为100%。用RT-PCR方法扩增该分离毒株的F基因,序列分析表明,JS0920株与标准强毒株F48E9的核苷酸序列和氨基酸序列同源性最高,分别为99.2%和99.5%,与免疫预防用的LaSota株的同源性分别为89.0%和92.2%;其多肽裂解位点为112R-R-Q-R-R-F117,具有高致病性鸭副黏病毒毒株的分子特征;系统发育进化树分析,JS0920株与LaSota株的基因型不同,JS0920株为基因IX型,与F48E9株的亲缘关系最近。试验结果对认识当前DPMV的流行和变异现状以及疫苗研制具有重要的参考价值。