LD-PCR检测FⅧ基因XbaⅠ位点多态性及其在血友病A携带者诊断中的应用

目的建立高特异性的针对凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子22中XbaⅠ多态性位点的连锁分析法,以用于血友病A家系携带者的诊断。方法采用长距离PCR(LD-PCR)方法,特异性地扩增FⅧ基因内含子22中的XbaⅠ位点所在区域,用限制性内切酶XbaⅠ酶切,对5个血友病A家系作家系连锁分析,并对其中可提供多态性信息的家系作携带者诊断。结果家系1中确诊女性携带者1名及1名正常女性成员;家系2中确诊1名女性携带者;而家系3、家系4和家系5该位点无法提供多态性信息。结论基于LD-PCR的FⅧ基因XbaⅠ位点连锁分析方法具有较高的准确性和可靠性,这对临床上诊断血友病A携带者具有积极的意义。

11个甲型血友病家系FⅧ基因的RFLPs连锁分析

应用Southern印迹杂交方法和PCR新技术,对东北地区11个甲型血友病家系检测FⅧ基因内的Bcl Ⅰ和Xba Ⅰ位点的RFLPs和基因外Stl4/Taq I RFLPs,分析了FⅧ基因的连锁状况,7名肯定携带者中4名能提供多态信息,4名可疑携带者之中2名可确定为缺陷FⅧ基因的携带者,1名可确定为正常FⅧ基因。为婚姻、生育指导和产前基因诊断提供依据。进一步明确了应用PCR技术联合进行多个位点的RFLPs连锁分析进行甲型血友病基因诊断的可行性及优越性。

CD_(31)、CD_(34)和F_(Ⅷ)在宫颈癌中的表达及意义

目的:探讨血管内皮标记物CD31、CD34与FⅧ在显示宫颈癌微血管密度(MVD)中的差异,以及MVD与淋巴结转移的关系。方法:采用微波免疫组化染色方法(LSAB)检测CD31、CD34与FⅧ在50例宫颈癌中的阳性表达。结果:3种血管内皮标记物CD31、CD34与FⅧ显示的MVD分别是(60.6±11.9)条、(59.4±12.3)条和(51.8±10.8)条,范围分别是12～81、14～75和15～73条,3种微血管内皮标记物显示的MVD具有一致性(P>0.05)。CD31、CD34与FⅧ3种微血管内皮标记物在正常宫颈组织MVD分别是(35.9±12.5)条、(33.7±12.5)条和(32.6±12.9)条;显示宫颈鳞癌的MVD,在转移组分别是(66.2±10.5)条、(64.3±11.9)条和(63.8±10.4)条,在无转移组分别是(50.8±11.7)条、(49.7±12.8)条和(48.5±13.6)条,转移组与无转移组间差异均有显著性(P<0.01),而3种微血管内皮标记物之间显示的MVD差异无显著性(P>0.05)。结论:CD31、CD34、FⅧ相关抗原均能清晰地、选择性地显示宫颈癌的微血管,能突出显示较小的、不成熟的微血管或单一的内皮细胞;宫颈鳞癌的MVD与微血管内皮标记物的种类无关,与有无转移密切相关,MVD可作为预测宫颈癌病人预后的指标。

不同温度下3种血液制剂中FⅧ活性分析

目的了解新鲜冰冻血浆、亚甲蓝病毒灭活新鲜冰冻血浆和冷沉淀融化后在不同环境温度中FⅧ活性变化情况。方法随机选取储存于-20℃以下1年内的新鲜冰冻血浆、病毒灭活血浆和冷沉淀置于融浆机中融化后,分别于0、2、4、8和24 h检测3种血液制剂中FⅧ活性[检测标本分别置于(4±2)℃冰箱和20℃恒温水浴箱中保存]。结果融化后(0 h)3种血液制剂的FⅧ的活性分别为(125.8±5.6)、(75.4±3.5)和(58.4±4.2),其中新鲜冰冻血浆中FⅧ活性明显高于亚甲蓝病毒灭活新鲜冰冻血浆和冷沉淀(P<0.001);保存于(4±2)℃和20℃中的3种血液制剂FⅧ活性在24 h后分别为(76.3±5.1)、(39.1±2.9)、(35.1±3.7)和(60.3±4.1)、(35.2±3.0)、(31.7±4.6),其活性均明显下降(P<0.001)。结论 3种血液制剂中新鲜冰冻血浆中的FⅧ活性较高,且均随保存时间的延长而活性下降。建议在(4±2)℃保存融化后的血浆制剂,并尽快输注(最好在8 h内输注)。

急性心脑血管血栓性疾病患者血浆FⅦ:C、FⅧ:C、凝血酶原及纤维蛋白原的变化

目的:检测凝血因子Ⅶ、Ⅶ、Ⅱ、Ⅰ的活性,研究其在急性心脑血管血栓性疾病中的变化。方法:分别采用凝血活酶时间、部分凝血活酶时间、发色底物法及凝血酶时间法测定了急性心肌梗死(AMI)和急性缺血性脑卒中(AIS)病人血浆FⅦ:C、FⅧ:C、凝血酶原及纤维蛋白原相对活性。结果:AMI病人血浆FⅦ:C为98.3 ％±36.7％,与青年组的104.0％±29.4％和老年组的114.9％±23.6％比较无明显差异(P值均>0.05),而AIS病人为152.9％±30.3％,较青年组和老年组显著升高(P值均<0.001)。AMI病人血浆FⅧ:C为234.2％±57.9％,明显高出青年组的101.2％±32.6％和老年组的116.4％±35.7％(P值均<0.001)。但AIS病人FⅧ:C±为85.5％±32.6％,低于老年组(P<0.05)。AMI和AIS病人血浆凝血酶原活性分别为130.2％±14.7％和128.0％±29.4％,高于青年组的108.0％±7.7％(P<0.001和0.01)和老年组的106.1％±19.4％(P值均<0.001)。AMI和AIS病人血浆纤维蛋白原活性分别为207.2％±53.0％和174.3％±28.5％,二者均显著高于正常青年组的103.3％±11.6％(P值均<0.001)和老年组的143.8％±16.8％(P<0.001和和0.01)。结论:AMI病FⅧ:C增高,AIS病人FⅦ:C增高;二者血浆凝血酶原和纤维蛋白原活性均高于正常水平。

倒位PCR法检测血友病A FⅧ基因内含子22/1倒位

目的建立血友病A(hemophilia A,HA)FⅧ基因第22内含子倒位PCR检测法,并初步应用于HA直接基因诊断。方法应用倒位PCR(inversion-PCR,I-PCR)方法对24个HA家系中所有先证者的FⅧ基因22内含子倒位进行检测,对检测阳性者的母亲进一步用上述方法行携带者诊断,并对其中1例进行羊水产前基因诊断。检测阴性者再行内含子1倒位筛查。结果 24个HA家系中,7例先证者的F基因内含子22倒位检测为阳性,阳性检出率、可诊断率分别为29.17%、100%,未发现内含子1倒位;7例内含子22倒位突变阳性患者的母亲有6例为倒位携带者,羊水诊断未发现内含子22/1倒位。结论 I-PCR法能准确地检测F基因22内含子倒位突变,可应用于HA患者及携带者FⅧ基因22内含子倒位基因诊断及产前诊断。

PCNA和FⅧR:Ag在氪激光诱导大鼠脉络膜新生血管中的表达及意义

目的研究在氪激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)中,增殖细胞核抗原(PCNA)和因子Ⅷ相关抗原(FⅧR∶Ag)的表达,探讨CNV形成的过程及特征。方法对7组42只BN大鼠单眼行氪激光光凝,分别在光凝后第3天及1、2、3、4、8和12周行眼底血管荧光造影检查(FFA)、病理学检查,并用免疫组织化学方法分别检测PCNA和FⅧR∶Ag蛋白表达。结果激光光凝后第1～12周的FFA检查见光斑处圆盘样荧光渗漏。病理学检查光凝后第1周可见视网膜下新生血管。免疫组织化学检查,光凝后第3天光凝区PCNA表达最强,3d～4周逐渐减弱,损伤区各种细胞处于增殖状态,是CNV形成的主要阶段。第1周时光凝区内FⅧR:Ag阳性表达围成管状,CNV开始形成;2～4周FⅧR∶Ag表达增强(P<0.05),CNV形成最多,达到高峰;此后FⅧR∶Ag保持较强的阳性表达(P>0.05),CNV持续存在。结论通过氪激光诱导BN大鼠CNV形成,至少在光凝后第1～12周内CNV形成并稳定存在,作为CNV发病机制基础研究的动物模型是可靠的。

930701血浆和中纯FⅧ国家标准品FⅧ：C检测结果及分析

９３０７０１血浆和中纯ＦⅧ国家标准品ＦⅧ：Ｃ检测结果及分析中国药品生物制品检定所１０００５０刘大英，沈琦，云志宏笔者用一、二期凝结法和基质显色法，对９３０７０１血浆和中纯ＦⅧ国家标准品ＦⅧ：Ｃ进行了标定，现将结果报告如下。１材料和方法１．１标准品ＷＨ...

东北地区健康汉族人群FⅧ基因内含子13(CA)n多态分布的研究

目的 :探讨东北地区健康人群FⅧ基因内含子 13的二核苷酸CA重复多态分布 ,为甲型血友病基因诊断提供依据。方法 :应用同位素 (α 3 2 PdCTP)掺入的PCR方法检测无遗传关系的健康汉族个体 44例 ,男 3例 ,女41例 ,总计 85条X染色体。结果 :检出 7种不同长度的等位基因片段 ,其长度在 130～ 15 0bP之间 ,从最短片段开始 ,依次为A ,B ,C ,D ,E ,F ,G。各等位基因频率为 :A :0 .0 2 35 ,B :0 .76 47,C :0 .0 2 35 ,D :0 .0 471,E :0 .0 70 6 ,F :0 .0 5 88,G :0 .0 118。计算可提供信息量为 40 .16 % ,实际检测到的杂合子率为 39.0 2 % (16 /4 1)。结论 :FⅧ基因内含子 13(CA)

iNOS,FⅧ-RAg在喉鳞状细胞癌的表达与血管形成的关系

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和FⅧ-RAg在喉癌组织中的表达及其侵袭转移过程中的作用。方法采用免疫组化Elivi-sion法检测30例喉鳞状细胞癌、10例声带息肉中iNOS和FⅧ-RAg的表达,并检测微血管密度(MVD)。结果30例喉癌组织中iNOS的阳性表达率为80%(24/30),声带息肉中iNOS的阳性表达率为10%(1/10)。FⅧ-RAg在喉癌组织和声带息肉的阳性表达率分别为70%(21/30),0%(0/10)。FⅧ-RAg,iNOS阳性表达两组间差异有统计学意义,P<0.025。喉癌组织和声带息肉中MVD分别为65.85±13.06,5.64±3.57,两组间差异有统计学意义(P<0.001)。结论iNOS,FⅧ-RAg在喉癌组织中的高表达,提示iNOS,FⅧ-RAg可促进血管形成,可能与喉癌的发生、发展和侵袭转移有关。因此,选择性抑制iNOS和FⅧ-RAg可减少肿瘤的发展和侵袭转移。

江苏汉族人群FⅧ基因内微卫星DNA多态性研究及其在基因诊断中的应用

为研究江苏地区汉族人群FⅧ基因内微卫星DNACA 13、CA 2 2的多态性 ,并探讨其在血友病甲基因诊断中的应用价值 ,我们用聚合酶链反应 (PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)的方法 ,分别检测了 86名 (131条X染色体 )和 74名 (10 9条X染色体 )江苏汉族人CA 13、CA 2 2的长度多态以及三个血友病甲家系成员这两个微卫星的长度变化。结果发现CA 13、CA 2 2分别有 7种、4种等位片段 ,多态信息量 (polymorphisminformationcontent,PIC)分别为 0 5 14 9、0 5 2 0 2。用这两个微卫星进行家系连锁分析 ,两个家系得到诊断 ,并检出一名携带者。本研究表明微卫星标记CA 13、CA 2 2具有高多态性 ,联合应用这两个微卫星 ,理论上可使家系完整的血友病甲携带者检出率及产前诊断率达 77%。

FⅧ-RAg和CD34标记早孕胎盘绒毛微血管的比较研究

目的为早孕期胎盘绒毛微血管显示寻求合适的标记物.方法人6～11wk胎盘绒毛45例,应用免疫组织化学S-P法对其微血管进行CD34和FⅧ-RAg标记.结果两种标记物的阳性表达率和微血管密度均有明显差异.结论 CD34是标记早孕胎盘绒毛微血管较好的标记物,而FⅧ-RAg不适宜于该组织的标记.

多器官功能不全综合征患者血浆中VWF、FⅧ和AT-Ⅲ变化的临床意义

目的:研究多器官功能不全综合征(MODS)患者血管性血友病因子(VWF)、Ⅷ因子(FⅧ)和抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)的变化,并探讨其临床意义。方法:40例MODS患者被列为观察对象。测定血浆VWF、ⅧF和AT-Ⅲ水平,同时计算患者的急性生理和慢性健康评分(APACHEⅡ)。20例健康者为正常对照。结果:MODS组血浆VWF和FⅧ水平明显高于正常对照组,AT-Ⅲ水平低于正常对照,P<0.01;MODS组中,死亡组血浆VWF和FⅧ水平明显高于生存组,差异有统计学意义,P值分别为P<0.01和P<0.05。MODS患者血浆VWF和FⅧ与APACHEⅡ评分呈正相关,r分别为0.716和0.705,AT-Ⅲ与APACHEⅡ评分呈负相关,r=-0.752,P<0.01。结论:VWF、FⅧ和AT-Ⅲ在MODS的发病过程中起着重要的作用,并与MODS患者病情严重程度相关,可以作为反映MODS患者预后的指标。

FⅧ-RAg、CD34在前列腺癌组织中的表达及MVD检测的意义

目的 检测第Ⅷ因子相关抗原 (FⅧ -RAg)和CD3 4在前列腺癌 (PC)组织中的表达及微血管密度 (MVD ) ,探讨其与前列腺癌组织分化、临床分期及预后的关系。方法 应用免疫组化S -P法检测 3 0例PC、3 0例良性前列腺增生 (BPH )组织中FⅧ-RAg和CD 3 4的表达 ,并检测其MVD。 结果 CD 3 4表达高者其MVD值高于FⅧ -RAg表达高者。PC与BPH相比较 ,不同组织分化、临床分期、预后的PC组织间相互比较 ,其CD3 4、FⅧ -RAg表达水平及MVD值均有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论MVD与前列腺癌组织分化、临床分期和预后密切相关。同时检测肿瘤组织中CD 3 4和FⅧ -RAg的表达 。

FⅧ抑制物:50年纵览

FⅧ抑制物研究时间已超过半世纪。抑制物有两种类型：一种是暴露于外源性FⅧ的血友病患者中产生的（同种抗体），另一种为正常F8基因人群中产生的自身抗体。