山茱萸免疫活性部位F-1C的免疫抑制作用

目的 :研究山茱萸免疫活性部位F 1C对小鼠免疫反应的抑制作用。方法 :运用淋巴细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应、溶血空斑实验和流式细胞技术观察F 1C体外应用和口服对正常小鼠免疫反应和脾脏T细胞亚群的影响。结果 :F 1C在 10 2 0 0 μg/ml剂量范围内无明显细胞毒性 ,但对小鼠ConA诱导的脾细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应和脾细胞抗体生成反应具有明显的抑制作用 ,对LPS诱导的裸鼠脾细胞增殖反应呈剂量依赖性的促进作用。连续 7天口服给予 4 0和 80mg/kg ,明显抑制脾细胞抗体生成反应和脾细胞自发增殖反应 ,对脾脏T细胞亚群CD4+ 细胞数目无明显影响 ,但明显升高CD8+ 细胞百分数 ,使CD4+ /CD8+ 比值降低。同时给药组小鼠T抑制细胞 (Ts)的抑制功能增强。结论 :F 1C对正常小鼠免疫反应具有明显的抑制作用 ,增加Ts细胞数量并增强Ts细胞抑制功能可能是其发挥免疫抑制作用的途径之一。

转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响

背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系。本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响。方法:用脂质体LipofectamineTM2000将具有短发夹结构的人E2F-1siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响。结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48h后,MGC803细胞中E2F-1基因mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%。转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:E2F-1siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖。

E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响

背景与目的:E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性。本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体,分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响。方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体)。Western blot检测转染情况,并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察E2F-1过表达对MKN-45细胞的影响。结果:pCMV-E2F1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞。转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2±6.7(P<0.01)。转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(P<0.01)。与转染空载体组相比,表达E2F-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4%vs.59.7%,P<0.05),S期所占比例明显下降(18.7%vs.30.7%,P<0.05)。结论:成功构建E2F-1基因真核表达载体,E2F-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖。

γ射线辐照对棉铃虫当代及其F-1代繁殖的影响

研究了γ射线对棉铃虫当代及其F 1代繁殖的影响、辐照导致棉铃虫F 1代的染色体畸变和对F 1代雄虫有核精子束的影响。说明棉铃虫的辐照适期为蛹末期 ,辐射遗传不育 (F 1代不育 )的适宜剂量为 2 0 0Gy(剂量率为 3 2 3Gy min)

E2F-1过表达对胃癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

背景与目的:E2F-1(E2F transcription factor1)基因是细胞周期的重要转录因子,也参与了细胞凋亡的过程,但机制尚不明确。本研究通过观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803凋亡的影响及对下游基因的调控,初步探讨其参与凋亡的分子机理。方法:用流式细胞仪检测稳定转染E2F-1的胃癌MGC-803/E2F-1细胞(实验组)、转染空载体的MGC-803/EV(阴性对照组)及未转染的MGC-803细胞的凋亡情况。再分别抽取MGC-803/E2F-1和MGC-803细胞的总RNA,采用逆转录的方法,制成cDNA,并以两种荧光Cy5和Cy3标记后作为探针(荧光交换芯片),与含有21522条人类基因表达谱芯片进行杂交。采用LuxScan10K/A双通道激光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,应用LuxScan3.0图像分析软件对芯片图像进行处理和分析与凋亡相关的基因的表达,再用RT-PCR针对性的对筛选得到的基因进行验证。结果:MGC-803/E2F-1组细胞的凋亡率明显高于MGC-803/EV组和MGC-803组,3组凋亡率分别为(8.40±0.91)%、(4.53±0.61)%、(4.97±0.47)%;基因芯片扫描筛选出与凋亡相关的差异表达基因15条,其中上调基因4条,下调基因11条;RT-PCR验证多条相关基因其上、下调趋势同基因芯片结果一致。结论:E2F-1基因过表达促进了胃癌MGC-803细胞的凋亡,其影响机制可能与这15条差异表达基因有关系。

E2F-1和survivin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与HPV感染的相关性研究

背景与目的:人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与人类多种恶性肿瘤密切相关,而肺癌中亦有HPV的检出引起了众多学者的关注。本实验旨在研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中高危HPV感染情况及其与E2F-1和survivin蛋白表达的关系,初步探讨HPV感染可能导致NSCLC发生、发展的分子机制。方法:特异型PCR检测47例NSCLC和13例肺良性病变组织中是否有HPV16、18DNA存在;免疫组化SP法检测E2F-1和survivin蛋白在肺病变组织中的表达。结果:NSCLC组HPV16、18DNA检出率为42.55%(20/47),明显高于肺良性病变组的7.69%(1/13,P<0.05)。NSCLC组中HPV的感染率与患者的吸烟史、组织学类型及分化程度有关(P<0.05),而与患者的年龄、性别及淋巴结转移无关(P>0.05)。NSCLC组中E2F-1蛋白表达阳性率为59.57%(28/47),其中64.29%(18/28)呈高表达,显著高于肺良性病变组23.08%(3/13,P<0.025)。NSCLC中survivin蛋白表达阳性率为61.70%(29/47),而肺良性病变组无表达。NSCLC组中E2F-1、survivin蛋白表达呈正相关(r=0.3151,P<0.05),且两者在HPV阳性组的阳性表达率分别为85.00%(17/20)和80.00%(16/20),均显著高于HPV阴性组的40.74%(11/27)和48.15%(13/27),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV16、18感染在NSCLC的发生中可能有病因学意义,其致癌机制可能与E2F-1和survivin蛋白表达上调有关。

E2F-1在胃癌组织中的突变、表达及其意义

E2F-1是细胞周期相关性转录因子E2F家族八个成员之一，在细胞周期进展过程中具有重要的调节作用。有文献报道E2F-1在转基因动物的角质形成细胞中可引起成纤维母细胞转化为肿瘤细胞,林福地等。发现随着肺癌分期的提高E2F-1表达也增高。本实验采用PCR-SSCP和免疫组织化学法，观察E2F-1在胃癌中的基因突变、表达情况，分析E2F-1在胃癌发生发展中的可能作用。

胃癌组织中c-met、e2f-1和Ki-67的表达

目的检测肝细胞生长因子受体c-met、转录因子e2f-1和Ki-67抗原在胃癌组织中的表达,探讨三者的相关性及与临床病理特征和预后的关系。方法免疫组织化学染色法检测86例胃癌患者手术标本中c-met、e2f-1和Ki-67的表达,单因素与多因素法分析其与临床病理特征的关系及三者的相关性,Logrank检验分析其与患者预后的关系。结果c-met、e2f-1和Ki-67在胃癌组织中均广泛表达。c-met的高表达与Ki-67高表达、生存期较短、肿瘤位置较高、淋巴结转移率较高、累及淋巴站较远及TNM分期较晚有关(P<0.05);e2f-1的低表达与肿瘤直径较大、TNM分期较晚、浸润较深、淋巴结转移率较高、累及淋巴站较远有关(P<0.05)。多因素分析显示,浸润深度、累及淋巴站、TNM分期和Ki-67表达是c-met表达的独立相关因素,而年龄和生存期是e2f-1表达的独立相关因素。Logrank检验显示,与术后生存相关的因素有c-met、e2f-1和Ki-67表达、累及淋巴站、肿瘤直径、肿瘤位置、淋巴结转移率、浸润深度和TNM分期。结论c-met阳性表达的胃癌患者生存期显著缩短。e2f-1在早期胃癌中高表达,晚期胃癌的进展可能与e2f-1表达降低有关。

E2F-1基因沉默可增强人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性

目的探讨E2F转录因子1(E2F transcription factor 1,E2F-1)基因沉默对人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂敏感性的影响及可能机制。方法将SGC-7901/DDP细胞接种于六孔板,分为3组:以E2F-1沉默重组慢病毒颗粒(Lv-shRNA-E2F-1)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNA-E2F-1组;以阴性对照慢病毒颗粒(Lv-shRNA-NC)感染SGC-7901/DDP,作为Lv-shRNANC组;空白对照组不做任何处理。以MTT法测定转染后各组细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50),并以AxnnexinV-PE/7-AAD双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率及周期分布。应用Western blot和半定量RT-PCR技术分别对各组细胞中E2F-1、survivin、Bcl-2的mRNA及蛋白水平进行检测。结果与Lv-shRNA-NC组和空白对照组相比,Lv-shRNA-E2F-1组细胞对顺铂的IC50显著降低,细胞凋亡率显著提高,细胞周期阻滞于G0/G1期,差别均有统计学意义(P<0.05);Lv-shRNA-E2F-1组E2F-1mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降45.0%和41.3%,蛋白水平分别下降66.7%和70.5%(均P<0.01);LvshRNA-E2F-1组survivin mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降30.3%和28.7%,蛋白水平分别下降56.5%和53.6%(均P<0.01);Lv-shRNA-E2F-1组Bcl-2 mRNA水平较Lv-shRNA-NC组和空白对照组分别下降76.6%和76.8%,蛋白水平分别下降74.6%和79.9%(均P<0.01);Lv-shRNA-NC组与空白对照组比较,上述指标差别均无统计学意义(均P>0.05)。结论:沉默E2F-1基因可有效提高人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与survivin及Bcl-2表达下调有关,提示E2F-1可能成为胃癌药物治疗的新靶点。

子宫内膜癌中E2F-1、Survivin和ki-67的表达及相关性

目的:检测子宫内膜癌组织中E2F-1、Survivin和Ki-67表达情况并探讨其意义。方法:采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中三者的表达。结果:子宫内膜癌组织中E2F-1和Ki-67表达定位于细胞核,Survivin表达定位于细胞质,其阳性表达率分别为58.33%(35/60)、55.00%(33/60)和85.00%(51/60),明显高于正常子宫内膜组织0、0、12.5%(4/32)(P<0.05)。三者的表达与淋巴结转移、临床分期及病理分期有关(P<0.05);在子宫内膜癌组织中E2F-1和Survivin两者之间比较表达呈正相关(P<0.05),Survivin和Ki-67两者之间比较表达呈正相关(P<0.05),E2F-1和Ki-67两者之间比较未发现有相关性(P>0.05)。结论:E2F-1、Survivin和Ki-67在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

EGCG对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及E2F-1表达的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用CCK-8法检测EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2Z增殖的影响;AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测EGCG的凋亡诱导作用;实时荧光定量PCR和Western blot检测核转录因子E2F-1及其上游调控蛋白CyclinD1和p21的表达水平。结果 EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖明显受到抑制,其细胞凋亡率亦显著增高,呈量效关系;随着EGCG浓度增高,E2F-1 mRNA和蛋白表达水平明显下降,其上游调控蛋白CyclinD1的表达亦明显下调,而p21的表达则明显上调。结论 EGCG可明显抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,可能与其直接或间接下调核转录因子E2F-1有关,CyclinD1和p21参与其调控。

芬太尼对胃癌MGC-803细胞E2F-1、p53基因表达的影响

目的观察芬太尼对人胃癌MGC-803细胞生长增殖及E2F-1、p53基因表达的影响。方法芬太尼10-4μmol/L与胃癌MGC-803细胞共同孵育为芬太尼组,未加入芬太尼的胃癌MGC-803细胞孵育为对照组。7d后检测胃癌MGC-803细胞生长增殖的变化,观察细胞超微结构的变化,检测细胞E2F-1、p53基因的表达。结果与对照组相比,芬太尼组MGC-803细胞生长增殖缓慢,细胞克隆形成率更低(P<0.05);细胞胞质深染、细胞核固缩、染色质碎裂,出现明显的凋亡表现;细胞E2F-1基因表达增加、p53基因表达减少。结论 10-4μmol/L芬太尼可抑制胃癌MGC-803细胞的生长增殖,促进细胞的凋亡,并改变E2F-1、p53基因的表达。

E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察

目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响。结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072。结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用。

E2F-1和Rb基因在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究E2F-1和Rb基因在食管鳞状细胞癌中的表达情况,探讨其在食管鳞状细胞癌发生发展中的规律与临床病理关系。方法应用免疫组化方法检测60例食管鳞状细胞癌和50例正常食管组织中E2F-1和Rb基因的表达情况。结果食管鳞状细胞癌中E2F-1的阳性表达率为73.3%,显著高于癌旁正常组织黏膜中的36.0%(P<0.01),E2F-1的表达与食管鳞状细胞癌的分期、分化及淋巴结转移有相关性(P<0.05)。Rb在食管鳞状细胞癌中的阴性表达率为30.0%,显著高于癌旁正常组织中的12.0%(P<0.05),Rb在食管鳞状细胞癌中的表达与分化及淋巴结转移有关(P<0.05),但尚不能认为与分期有关。结论E2F-1和Rb在食管鳞状细胞癌中的表达呈负相关,即E2F-1过度表达而Rb表达有一定程度缺失,在正常食管组织中的表达亦有差异。

E2F-1基因过表达影响胃癌MGC-803细胞对化疗药物敏感性的研究

目的:构建E2F-1真核表达载体,建立稳定过表达E2F-l的胃癌细胞株,探讨E2F-l基因过表达对胃癌MCC-803细胞化疗敏感性的影响方法:应用Tri zol法从胃癌的癌组织中提取mRNA逆转录合成cDNA,按Gene-Bank公布的E2F-1基因序列设计带有酶切位点的引物并行扩增获得E2F-1的ORF片段;然后经限制性内切酶EcoR l和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选用脂质体Lipofectamine2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株实时定量PCR( real-time quantitative PCR)和蛋白印迹(Western blotting)技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况四唑蓝(MTT)法检测MGC-803/E2 F-1组(实验组)、MGC-803/EV组(阴性对照组)和MCC-803组(未转染组)细胞对化疗药物的敏感性结果:重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoR I和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因之0RF完全一致,证明目的基因已成功克隆入真核表达载体,获取具Genectin抗性的细胞克隆、并进行了扩增。RT-PCR和Western blotting实验证实重组载体pCMV-E2F-l-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1 MTT法检测发现,5-氟尿嘧啶(5-FL)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)对MGC-803/E2F、-1组细胞的抑制率分别为71.45%、74.03%、76.72%,均明显高于MGC-803/EV组(45.58%、53.69%、54.58%)和MGC-803组(53.70%、54.67%、55.05%) (P<0.05)结论:成功构建了真核表达载体pCMV-E2F-1-HA2,并建立了稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株MGC-803/E2F-1。E2F-1过表达增强了胃癌细胞对化疗药物的敏感性。

HIF-1α在乳腺癌组织中的表达及与HER-2、Survivin表达的相互关系

背景与目的:H IF-1α、HER-2和Survivin是乳腺癌的重要预后因子,但其是否存在内在的联系尚不清楚。本实验研究H IF-1α在乳腺癌组织中的表达,并探讨其与HER-2、Survivin表达的相互关系。方法:免疫组化法检测51例乳腺癌组织中H IF-1α、HER-2、Survivin的表达。结果:①本组51例中,28例H IF-1α呈阳性表达,阳性率为55%;Survivin阳性率为69%;HER-2强阳性表达率为22%。②在H IF-1α阳性表达的样本中与H IF-1α阴性表达的样本中,HER-2的强阳性表达差异有非常显著性(P<0.01);但Survivin的表达差异无显著性(P>0.05)。结论:H IF-1α在乳腺癌中的表达水平与HER-2强阳性表达相关,与Survivin表达无关。

P73、E2F-1、Bcl-2蛋白表达与胃癌生物学行为关系研究

目的本研究旨在探讨P73、转录因子E2F-1、凋亡抑制基因Bcl-2在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组化技术(SP法)检测46例胃癌癌组织及癌旁正常黏膜中P73、E2F-1、Bcl-2蛋白的表达情况。结果胃癌组织中P73蛋白的阳性表达率为69.6%,癌旁正常黏膜组织中为4.3%,两组比较具有统计学意义(P<0.01);P73蛋白的表达与胃癌组织学分级、淋巴结转移、肿瘤浸润深度有关(P<0.05)。胃癌组织中E2F-1阳性表达率为73.9%,癌旁正常黏膜中为8.7%,两者比较有显著性差异(P<0.01);E2F-1在癌组织中的表达与TNM分期、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度无相关性(P>0.05)。Bcl-2在胃癌中的阳性表达率为52.2%,在癌旁正常黏膜中为15.2%,两者比较差异显著(P<0.01);Bcl-2在癌组织中的表达与胃癌组织学分级具有相关性(P<0.05)。结论P73、E2F-1、Bcl-2在胃癌细胞中共同过度表达,参与了胃癌的发生发展。

子宫内膜癌中E2F-1和p-p38的表达及意义

目的检测子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38表达情况并探讨其意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测60例子宫内膜癌、32例正常子宫内膜组织中E2F-1和p-p38的表达情况。结果子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38表达定位于细胞核,其阳性表达率分别为58%(35/60)和55%(33/60);而正常子宫内膜组织均无表达。两者的表达与肌层浸润程度、淋巴结转移、临床分期及病理分期有关;在子宫内膜癌组织中E2F-1和p-p38两者之间比较表达呈正相关(P<0.05)。结论 E2F-1和p-p38在子宫内膜癌中呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞E2F-1、cyclinE蛋白表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖及E2F-1、细胞周期素E(cyclinE)蛋白表达的影响。方法人LECs常规培养,分为实验组和对照组,实验组加入PI3K抑制剂LY294002(25μmol/L),对照组加入同体积DMSO,两组分别培养36 h后,MTT比色法测定细胞增殖状况,Western blot法检测细胞中E2F-1及cyclinE蛋白表达。结果实验组细胞增殖受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),人LECs中E2F-1及cyclinE蛋白表达降低(P<0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增殖,可能与下调E2F-1及cyclinE蛋白的表达水平相关。

大肠癌E2F-1、CyclinD1的表达及其意义

目的探讨E2F-1和cyclinD1在大肠腺癌组织中的表达及其意义。方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的TUNEL法缺口末端标记和免疫组化SP法检测大肠腺癌78例、正常大肠黏膜20例、大肠息肉30例,以及大肠腺瘤细胞30例的原位凋亡(Al)及E2F-1和cyclin D1的表达情况。结果 E2F-1和cyclin D1在大肠腺癌中的阳性率显著高于正常大肠黏膜、大肠息肉以及大肠腺瘤(P<0.05)。E2F-1表达与大肠腺癌的病理分化程度、淋巴结转移和临床分期具有相关性(P<0.05)。从正常大肠黏膜、大肠息肉、大肠腺瘤到大肠腺癌细胞凋亡呈梯度降低。结论 E2F-1和cyclinD1的表达与大肠腺癌发生关系密切,是大肠腺癌发生、发展的重要生物学标记物。